广东省自然科学基金(980116)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：冯崇锦程斌李春阳夏娟钟雪云更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院中山大学暨南大学更多>>
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- 转染cdc25A-Fas嵌合基因表达载体体外诱发Tca8113细胞凋亡的研究
- 2004年
- 背景与目的Fas/FasL与口腔鳞癌的发生、发展相关。本研究旨在探讨cdc25A-Fas嵌合基因表达载体诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的作用。方法用基因工程方法分别构建pAdTrack-CMV-cdc25A-Fas(pCCF)和pAdTrack-cdc25A-Fas(pCF)嵌合基因表达载体;脂质体法将pCCF、pCF、pAdTrack-CMV分别转染Tca8113细胞;报告基因绿色荧光蛋白(GFP)观察转染效率;Northernblot、RT-PCR、Westernblot、免疫组化技术检测Fas基因的转录及表达时序;DNA凝胶电泳带型分析(DNAagarosegelelectrophoresis)、原位缺口末端标记(TUNEL)、AnnexinV、流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测Tca8113细胞凋亡。结果(1)嵌合基因表达载体pCCF、pCF转染Tca8113细胞的转染率为15%左右,出现在转染后第5～7天。(2)转染第3天,pCCF、pCF组Fas表达显著上调;第3、5、7天均表达Fas蛋白,Fas蛋白主要在胞膜和胞浆表达;表达Fas蛋白的Tca8113细胞呈现部分凋亡的形态特征。(3)pCCF和pCF转染2.5天(60h),Tca8113细胞开始出现凋亡,第3天凋亡率达到最高约25%,与对照组细胞比较具有显著性差异(P<0.05),pCCF和pCF比较无显著性差异(P>0.05)。(4)流式细胞仪检测到绿色荧光蛋白表达细胞峰与凋亡细胞峰一致。结论嵌合基因表达载体pCCF和pCF转染口腔鳞癌Tca8113细胞可诱导细胞凋亡?
- 冯崇锦李春阳洪筠杨灵澜叶萍程斌
- 关键词：舌肿瘤CDC25AFAS
- cdc25A-Fas嵌合基因真核表达载体的构建与鉴定
- 目的构建和鉴定含cdc25片断和Fas 基因ORF 全长的真核表达重组质粒pAdTrack-CMV-cdc25A-Fas 和pAdTrack-cdc25A-Fas,为下一步转入口腔鳞癌细胞,将该肿瘤细胞固有的促细胞增殖信...
- 冯崇锦李春阳程斌洪筠杨灵澜叶萍
- 关键词：鳞癌FASCDC25AC-MYC
- 文献传递
- 诱发口腔鳞癌细胞凋亡嵌合基因表达载体的构建被引量：1
- 2006年
- 目的:获取含凋亡基因fas表达调控元件cdc25A片段和fas开放阅读框架的cdc25A-fas嵌合基因,构建和鉴定真核表达载体pAdTrack-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25A-fas,为将口腔鳞癌细胞固有的促细胞增殖信号转变为促细胞凋亡信号的研究奠定基础。方法:根据fas基因、cdc25A已知序列设计合成引物,采用PCR技术从pBLF58-1质粒中扩增得到嵌合基因cdc25A-fas;然后定向克隆至真核表达载体pAdTrack-CMV和pAdTrack,分别转化大肠杆菌E.coliDH5α感受态细胞;卡那霉素筛选阳性克隆;进行PCR、酶切鉴定和序列分析。结果:PCR扩增得到特异的1603bp的cdc25A-fas片段;筛选并鉴定得到含pAdTrack-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25A-fas的大肠杆菌E.coliDH5α阳性克隆。结论:成功构建了真核表达载体pAdTrack-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25A-fas,为下一步研究其在肿瘤基因治疗中的作用奠定基础。
- 冯崇锦李春阳钟雪云夏娟程斌郭俊兵
- 关键词：细胞凋亡口腔肿瘤
