国家自然科学基金(30000080)
- 作品数：6 被引量：66H指数：5
- 相关作者：陈香美田月林洪丽董健平师锁柱更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院中国人民解放军中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金创新研究群体项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TIMP-1转基因小鼠纯合子的建立及建系被引量：5
- 2003年
- 采用遗传学育种方法 ,使外源基因整合位点随机的基质金属蛋白酶抑制剂 1(TIMP 1)转基因小鼠成为单一整合位点的纯合子转基因小鼠而建立TIMP 1转基因小鼠品系 .通过受精卵原核显微注射方法 ,获得带有人TIMP 1基因的Founder小鼠 .将转基因小鼠与正常小鼠交配 ,得到子代小鼠 .通过PCR及Southern印迹等方法 ,检测TIMP 1DNA在转基因小鼠体内的整合情况 ,阳性率达5 0 %后 ,进行近亲交配 .提取小鼠组织总RNA ,Northern印迹分析阳性小鼠各组织外源性TIMP 1mRNA表达情况 ,以正常NIH小鼠做对照 .获得了 6代小鼠共 4 2 4只 ,其中PCR阳性鼠 2 72只 ,Southern阳性鼠 2 2 6只 ,纯合子转基因小鼠 12 8只 ;F4代后阳性率达到 95 %以上 .转基因小鼠TIMP 1基因表达情况在肾脏的丰度明显高于肝脏和脾脏 (P <0 0 1) ,而肝和脾之间并没有显著差异 (P>0 0 5 ) .外源基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传 ,并得到了整合有TIMP 1基因的纯合子转基因小鼠 ,且在阳性的转基因小鼠体内在肾脏中特异性表达 ,为以后开展TIMP
- 田玥刘庆鑫陈香美洪权林洪丽冯全洲张雪光
- 关键词：转基因小鼠纯合子基质金属蛋白酶抑制剂杂交
- IgA肾病肾血管纤溶酶原激活物抑制物-1和基质金属蛋白酶-9的表达及其意义被引量：5
- 2002年
- 为探讨免疫球蛋白A肾病(IgA肾病)患者肾血管壁纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)和α平滑肌肌动蛋白(αSMA)的表达及意义,采用免疫组织化学技术检测38例IgA肾病肾组织血管壁的PAI1、MMP9、αSMA和TIMP1的蛋白表达。结果显示,αSMA主要表达于平滑肌细胞;PAI1表达与αSMA类似;MMP9在平滑肌细胞和内皮细胞均表达;TIMP1仅在血管壁内膜的内皮细胞微弱表达。在IgA肾病LeeⅣ～Ⅴ级组,肾血管壁的PAI1、MMP9和αSMA表达显著高于LeeⅠ～Ⅲ级组(P<001)。直线相关分析显示,肾血管的PAI1、MMP9和αSMA表达与肾小管间质的纤维化和炎细胞浸润呈正相关(P<001)。提示PAI1可能参与介导了IgA肾病肾血管壁细胞外基质的积聚过程,MMP9则可能促进血管的平滑肌细胞迁移和内膜增生。
- 王建中陈香美师锁柱田月
- 关键词：IGA肾病基质金属蛋白酶-9金属蛋白酶组织抑制物-1
- 金属蛋白酶组织抑制剂1在大鼠肾小管间质损害中的表达及其意义被引量：42
- 2002年
- 目的 观察单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型中金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)在肾小管间质中的表达部位、动态变化及其与肾小管问质损害的关系。方法 制备UUO大鼠模型,采用免疫组织化学方法检测UUO术后第1、3、5、7、14天肾小管间质中TIMP-1、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)和单核巨噬细胞抗原(ED)-1的表达及其与输尿管梗阻后肾小管间质损害的关系。结果 UUO术后第1天肾间质可见少量TIMP-1表达细胞,第3～7天TIMP-1表达明显增加,主要表达于肾小管上皮细胞和肾间质。UUO术后第3天肾小管PCNA表达达高峰,随后下降,而肾间质PCNA水平于第7～14天仍较高。UUO术后第3天肾间质成纤维细胞及肾小管上皮细胞可检出α-SMA表达并随时间递增。α-SMA阳性面积与肾间质相对面积成正相关(r=0.924,p<0.01)。TIMP-1表达与间质相对面积(r=0.835,P<0.05)及α-SMA阳性面积(r=0.922,P<0.01)成正相关。结论 TIMP-1蛋白质于肾小管间质病变早期表达于肾小管间质,早于肾间质纤维化出现,其表达量与肾间质α-SMA表达及肾间质相对面积呈正相关并随病变进展逐渐增加。TIMP-1在肾小管上皮细胞和问质细胞的高表达及肾小管上皮细胞和间质细胞增殖可能参与介导UUO术后肾小管间质损害。
- 董健平陈香美师锁柱田月
- 关键词：金属蛋白酶组织抑制剂1输尿管梗阻纤维化肾小管间质损害免疫组织化学细胞增殖
- 外源性人TIMP-1基因在转基因小鼠染色体上的整合及定位被引量：3
- 2006年
- 为探讨外源基因人基质金属蛋白酶组织抑制物-1（human tissue inhibitor of metalloproteinase-1，hTIMP-1）基因在转基因小鼠家系染色体上的整合和精确定位，应用Southern印迹检测外源基因在染色体上整合的位点及拷贝数，结果表明，外源基因是以单拷贝、单位点形式整合；应用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技术检测F4～F20代转基因小鼠中外源基因的整合．结果证明，该家系转基因小鼠自F4代起是纯合子，外源基因整合在17号染色体E区；反向PCR法（Inverse PCR，IPCR）克隆出约3．8kb外源基因整合位点处的侧翼序列．分析表明，外源基因整合在17号染色体E1.3区，ALK（anaplastic lymphoma kinase，ALK）基因第23个内含子区域、结果提示，获得的转基因小鼠为纯系，外源基因hTIMP-1已稳定整合在转基因小鼠染色体上，并能遗传给后代．
- 朱晗玉陈香美马润林张冬芬任建功
- 关键词：转基因动物模型基质金属蛋白酶组织抑制物-1荧光原位杂交反向PCR
- 反义金属蛋白酶组织抑制剂-1对大鼠肾小管间质损害的治疗作用被引量：9
- 2002年
- 目的 探讨金属蛋白酶组织抑制剂 1(TIMP 1)参与肾小管间质损害的机制及防治措施。方法 分 3组通过输尿管逆行注射将等体积生理盐水、空载体、反义TIMP 1基因全长逆转录病毒载体分别导入单侧输尿管梗阻大鼠的肾脏 ,检测肾外源基因的表达 ,观察肾小管间质损害的变化。结果 反义TIMP 1基因可以在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质细胞表达。反义TIMP 1组单侧输尿管梗阻术后较盐水组和空载体组大鼠梗阻肾组织内TIMP 1蛋白质表达明显减少 (3d :0 75± 0 0 7vs1 18± 0 12、1 14± 0 14 ,P <0 0 5 ;7d :2 0 2± 0 16vs 4 0 7± 0 5 7、4 13± 0 6 0 ,P <0 0 1)。免疫组化显示反义TIMP 1组肾小管间质的增殖细胞核抗原和α 平滑肌肌动蛋白抗原表达下调。与两对照组相比 ,反义TIMP 1组肾间质相对面积明显下降 (3d :6 0± 0 7vs8 2± 1 2、8 2± 1 3,P <0 0 1;7d :16 2±1 1vs 2 1 2± 2 6、2 1 0± 2 4 ,P <0 0 1)。结论 反义TIMP 1可能通过抑制肾间质TIMP
- 董健平陈香美冯全洲傅博田月王兆霞林洪丽
- 关键词：肾小管间质损害输尿管梗阻间质性肾炎
- 正、反义组织金属蛋白酶抑制剂1基因转染对肾小球系膜细胞凋亡及相关基因表达的影响被引量：10
- 2001年
- 目的 探讨正、反义组织金属蛋白酶抑制剂 1(TIMP 1)对肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法 利用前期工作中克隆出的人TIMP 1全长cDNA ,分别构建出表达正义及反义TIMP 1的重组真核表达载体pcDNA3 TIMP 1(PTs)、pcDNA3 ATIMP 1(PTas) ,并将上述重组质粒转染至大鼠的肾小球系膜细胞中 ,Northern杂交检测正、反义TIMP 1的表达。无血清诱导大鼠系膜细胞凋亡 ,利用DNA缺口末端标记 (TUNEL)分析、DNA电泳技术在无血清后的不同时间点检测细胞凋亡 ,RT PCR的方法检测凋亡相关基因的表达。结果 转染PTas的大鼠系膜细胞可以高效表达反义TIMP 1,于无血清诱导 12h开始发生凋亡 ;无外源基因转染及空载体转染的大鼠系膜细胞在无血清 48h发生凋亡 ;而转染正义TIMP 1的大鼠系膜细胞可高效表达正义TIMP 1,在无血清 4d时才发生凋亡。TIMP 1的高表达或低表达可引起大鼠系膜细胞bax的下调或上调 ,但并不影响bcl 2的表达。结论 TIMP 1可以抑制无血清诱导的大鼠系膜细胞的凋亡 ,反义TIMP 1对之则有促进作用。这提示TIMP 1在肾脏除了抑制细胞外基质的作用外还具有新的功能。
- 林洪丽陈香美傅博于志恒李文歌王建中
- 关键词：金属蛋白酶1组织抑制剂脱噬作用基因转染肾小球系膜
