国家自然科学基金(81102360)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：于蕊王晗陈薇于长明樊红艳更多>>
- 相关机构：军事医学科学院解放军第302医院中国人民解放军更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人破伤风基因工程中和抗体的研究进展被引量：1
- 2013年
- 破伤风是一种既古老又年轻的疾病。2300年前，希腊医生希波克拉底首次描述了外伤引起破伤风感染病例。我国医书《五十二病方》、《黄帝内经》等均对破伤风有过描述。破伤风疫苗及抗毒素等的成功研制虽然大大降低了破伤风感染病死率，但作为世界上已知最毒的毒素之一，自然灾害、生物恐怖战剂以及治疗困难等使破伤风仍然在一些国家和地区威胁着人们的健康。目前破伤风的致病机制、重组疫苗及抗体的研究是破伤风研究的主要领域，尤其是人破伤风基因工程中和抗体的研制将为破伤风感染提供更加安全、廉价的治疗手段。目前还没有一种人破伤风中和抗体药物获得FDA认证。本文从破伤风感染的威胁、致病机制、中和抗体治疗、抗原表位研究和抗体水平检测等方面，对破伤风中和抗体的研究进行概述。
- 王晗于蕊于长明陈薇
- 关键词：破伤风感染中和抗体基因工程《五十二病方》抗体水平检测希波克拉底
- 人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及体外亲和筛选被引量：3
- 2013年
- 目的构建人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,筛选抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)的特异性单链抗体(scFv)。方法利用RT-PCR从5名破伤风抗体滴度较高的健康献浆员外周血淋巴细胞中获得全套人破伤风抗体VH和VL基因,经过重叠PCR将VH和VL基因连接获得scFv片段。将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转化大肠TG1感受态菌,获得抗体库。以TeNT-Hc为抗原对抗体库进行3轮筛选,获得特异性人源性抗TeNT-Hc单链抗体。scFv由pET32a(+)表达载体表达,产物包涵体采用HisTrap FF预装柱纯化并透析复性。采用非竞争酶免疫实验法测定scFv亲和常数(affinity constant,KD值)。检测scFv抑制TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的体外中和活性,计算抑制率。结果构建库容量为1×108的人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,经过筛选获得3株特异性较好的人源性抗TeNT-Hc单链抗体。原核表达结果显示,3株scFv均以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的40%～45%。包涵体经洗涤、纯化和复性后,scFv均保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,1 L培养物经纯化后可获得4～6 mg scFv蛋白。亲和力测定结果,27G、22D和S-4-7H-scFv的KD值分别为(1.25×10-7),(2.31×10-7)和(1.97×10-7)mol/L。3株抗体对TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的抑制率分别为64.5%,58.6%和51.5%。结论人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及具有体外中和活性的特异性抗TeNT-Hc单链抗体的获得,为人破伤风基因工程中和抗体的制备奠定了良好基础。
- 王晗于蕊张晓鹏任军谢娜樊红艳张金龙房婷于长明陈薇
- 关键词：破伤风破伤风毒素单链抗体逆转录聚合酶链反应细菌噬菌体
