国家自然科学基金(30500558) 作品数:6 被引量:13 H指数:2 相关作者: 李萃 陈主初 汤参娥 易红 段朝军 更多>> 相关机构: 中南大学 暨南大学 中南大学湘雅三医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 教育部“新世纪优秀人才支持计划” 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
急性脑外伤后的比较蛋白质组学研究 2008年 目的 研究脑损伤前后人脑皮层蛋白质组分差异表达的情况。方法对10例重型脑外伤患者和4例对照的皮层组织进行比较蛋白质组学研究,即利用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳(two—dimensional electrophoresis,2-DE)分离人脑外伤后皮层组织及对照的皮层组织的总蛋白质,蓝银显色后经图像分析识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix—assisted laserdesorption/ionization time—of—flightmass spectrometry,MALDI—TOF—MS)和电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱(electrospray ionization—quadrupole time—of—flight,ESI—Q—TOF)鉴定差异表达的蛋白质点。结果得到了分辨率较高、重复性较好的人脑外伤后皮层组织及对照的皮层组织的2-DE图谱;图像分析识别差异蛋白质点21个;通过质谱分析鉴定出一些与代谢反应、氧化应激反应、信号转导等有关的差异蛋白17个。结论成功鉴定17个与脑外伤相关的蛋白,为进一步阐明脑外伤后的病理生理作用机制及其诊断和治疗、预后监测提供了新的思路。 李学军 袁贤瑞 李萃 彭泽峰 袁盾关键词:脑损伤 蛋白质组学 人肺腺癌组织的血清蛋白质组学研究 被引量:2 2006年 目的采用以肿瘤免疫学与蛋白质组学研究技术有机地结合为基础的血清蛋白质组学研究体系(SERPA)筛选肺腺癌相关抗原。方法应用SERPA对4例人肺腺癌组织进行研究,分析肺腺癌组织总蛋白分别与肺腺癌患者的自身血清以及正常对照血清反应的W estern b lot图谱,识别鉴定差异反应的蛋白质。结果获得了分辨率较高的人肺腺癌组织与患者的自身血清以及正常对照血清的W estern b lot图谱,共识别27±5个差异反应的蛋白质。对其中的部分差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析,鉴定出一些与细胞生长增殖、细胞代谢、细胞周期调控、信号转导等有关的肺腺癌相关抗原。结论本研究为进一步筛选用于肺腺癌诊断、治疗和预后评估的肺腺癌分子标志物奠定了坚实的基础。 李萃 肖志强 段朝军 汤参娥 易红 陈主初关键词:蛋白质组学 趋化因子对调节性NK细胞归巢的诱导作用 2008年 调节性T细胞和调节性NK细胞都可能在维持妊娠方面发挥关键作用。研究显示,同种异基因妊娠非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胚胎丢失率显著增高,而注射抗唾液酸神经节苷脂清除其残存的NK细胞,可使胚胎丢失率进一步增高。相反,过继性输注来源于正常小鼠的CD49b+CD25+NK细胞可显著降低胚胎丢失率。检测了CXCL12的特异性受体CXCR4在NK细胞表面的表达模式,并采用体外和体内迁移实验研究了NK细胞的迁移规律。由于以往研究证实小鼠胎盘滋养层细胞表达CXCL12,研究结果提示:孕期动员子宫外表达CXCR4的CD49b+CD25+NK细胞向妊娠子宫内迁移,可能对于调节母胎免疫耐受具有重要意义。 王慧琪 李萃 林羿 王文静 曾山关键词:细胞迁移 免疫调节 双链RNA和咪喹莫特联合刺激的协同作用研究 2009年 目的研究双链RNA(double—stranded RNA,dsRNA)和咪喹莫特联合刺激是否具有协同效应。方法在Toll样受体3(TLR3)的特异性刺激剂dsRNA、TLR7的特异性刺激剂咪喹莫特(R837)单独刺激或二者联合刺激条件下,检测BALB/c×C57BL/6和NK细胞缺陷的非肥胖型糖尿病(NOD)×C57BL/6小鼠胚胎吸收率。采用小鼠体内注射上述刺激剂的方法,流式细胞术检测子宫CD45^+细胞内细胞因子表达水平。为进一步鉴定CD45^+细胞身份,在体外培养系统中采用dsRNA和咪喹莫特刺激胎盘和底蜕膜来源的子宫CD3^+T细胞和CD49b^+NK细胞,并检测细胞内细胞因子表达水平。采用丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen—activated protein kinase,MAPK)抑制剂SP600125和PD98059阻断细胞因子表达水平的增加。结果dsRNA和咪喹莫特联合刺激对胚胎吸收率的增高具有协同作用,同时对CD45^+细胞内TNF—α和IFN-γ的表达增强具有协同刺激作用。进一步细胞鉴定研究显示,虽然在BALB/c小鼠CD3^+细胞和CD49b^+NK细胞中均可发现这种协同效应,但是在NOD小鼠,这种细胞因子水平的增高应主要归因于CD3^+T细胞,因为在CD49b^+NK细胞不显示这种细胞因子增高趋势。上述刺激剂合用的协同效应可部分地被JNK(Jun N-terminal kinase)MAPK抑制剂SP600125阻断,而几乎被ERK(extracellular signal—regulated kinase)MAPK抑制剂PD98059所完全阻断。结论增强的TLR3和TLR7联合信号可能是通过NOD小鼠Th1型T细胞,而不是NK细胞所传导。ERK MAPK途径可能在TLR3和TLR7参与的细胞信息传递过程中发挥关键性作用。 李萃 王慧琪 王文静 狄静芳 曾山 林羿关键词:动物模型 免疫缺陷 免疫调节 TOLL样受体 筛选喉癌相关基因LCRG1的有效沉寂序列 2008年 目的:拟采用RNA干扰技术筛选有效的针对LCRG1基因的打靶序列。方法:首先采用PCR定点突变技术改造pSuper载体,而后利用该改造后的载体构建针对LCRG1基因的5对打靶序列的真核表达载体。将构建的重组pSuper362,398,432,789,903表达载体和pSuper空白载体分别转染He-la细胞,经抗性药物筛选获得抗性细胞克隆和池克隆;通过RT-PCR及荧光定量PCR鉴定阳性克隆,进行平板克隆集落形成试验,以检测打靶序列沉寂LCRG1基因mRNA表达水平的效果。结果:应用PCR定点突变技术改造的pSuper载体,可被BglⅡ酶切;利用RT-PCR和荧光定量PCR检测各重组载体转染细胞池克隆LCRG1mRNA的表达发现,362组,398组,432组的基因均能封闭内源性LCRG1基因表达,尤以362组为显著;鉴定362组筛选的各个抗性克隆,发现A2和A5克隆的LCRG1mRNA表达水平明显降低。平板克隆实验结果提示362组的A2,A5和池克隆的细胞增殖能力明显强于载体和空白对照组(P<0.05)。结论:成功改建了pSuper真核表达载体;362siRNA相对其他siRNA具有较好的打靶效果,这对于应用RNAi方法研究LCRG1基因的功能和其作用分子机制具有重要的指导意义。 段朝军 蒋铁斌 李萃 章晓鹏 李茂玉 肖志强 汤参娥 易红 陈主初关键词:RNAI Comparative Proteome Analysis of Human Lung Squamous Carcinoma Tissue 被引量:11 2006年 客观:与高分辨率建立二维的电气泳动侧面;从人的肺的重制度有鳞的癌织物;配对的正常肿瘤邻近的支气管的上皮,;识别微分表示由使用 proteome 分析的联系肿瘤的蛋白质。方法:有 20 人的肺的比较 proteome 分析有鳞的癌纸巾;邻近肿瘤的配对的正常支气管的上皮被执行。人的肺的全部的蛋白质有鳞的癌织物;配对的正常肿瘤邻近的支气管的上皮借助于使不能调动的 pH 被分开基于坡度的二维的胶化电气泳动(2-DE ) ;染色的银。微分表示蛋白质被分析;然后到飞行团分光术(MALDI-TOF-MS ) 的帮助矩阵的激光解吸附作用 / 电离时间识别了。结果:(1 ) 人的肺的解决得好的、可再现的 2-DE 模式有鳞的癌;邻近的正常支气管的上皮被获得。为肿瘤织物, 3 胶化的平均的点是 1567 ± 4 6,;4 看到的 1436 ± 5 与 91.6% 的平均匹配率被匹配。为控制, 3 胶化的平均的点是 1349 ± 5 8,;5 看到的 1228 ± 3 与 91.03% 的平均匹配率被匹配。匹配的点的平均位置偏差是在 IEF 的 0.924 ± 0 .128 公里方向,;在 SDS 页方向的 1.022 ± 0 .205 公里;(2 ) 6 看到的 1178 ± 5 的一个总数在 20 人的肺的电泳地图之间被匹配有鳞的癌纸巾;配对正常肿瘤邻近的支气管的上皮。76 差别表示了蛋白质被屏蔽;(3 ) 68 微分蛋白质被 PMF 识别,一些蛋白质是 oncogenes 的产品,;涉及房间的规定的其它骑车;信号转导变异;(4 ) 以便验证识别结果的可靠性, 3 蛋白质 mdm2 的表示, c-jun;EGFR,它与肺被相关有鳞的癌,被免疫检测组织化学的染色;西方的污点分析。结果揭示了那 mdm2, c-jun;EGFR 在肺是起来调整的有鳞的癌而他们在邻近的正常支气管的上皮是下面调整的,正常的肺纸巾;煽动性的假肿瘤,它与我们的 proteome 分析一致结果。结论:人的肺的解决得好的、可再现的 2-DE 模式有鳞的癌� LI Cui TANG Can'e DUAN Chaojun YI Hong XIAO Zhiqiang CHEN Zhuchu关键词:肿瘤组织 蛋白质