国家自然科学基金(30500573)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：蔡炯李方王世真郑连芳蒲圻更多>>
- 相关机构：北京协和医院中国科学院解放军第302医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 2-^(18)F-氟代丙酸的自动化合成及其Micro PET肺癌小鼠显像被引量：2
- 2015年
- 目的:利用国产PET-MF-2V-IT-I型氟多功能合成模块建立2-18F-氟代丙酸(2-18F-FPA)稳定合成方法,并评价其在肿瘤显像中的价值。方法:前体2-溴代丙酸乙酯与18F-发生氟代反应,中间体2-18F-FPA乙酯采用高压液相色谱法(HPLC)分离,收集保留时间在6.3~7.3 min的组分,将组分与Na OH溶液于100℃加热水解10 min,加入HCl调至中性,经过0.22μm除菌滤膜后得终产品。目测澄清度,测定p H值、放射化学纯度和稳定性后行C57BL/Micro PETJ荷瘤小鼠显像。结果:自动合成过程约40 min,放化收率(35±2)%(未经时间校正),产品放化纯度>98%。产品澄清无颗粒,p H值为6.0,在室温放置6 h稳定,小鼠肿瘤显像清晰。结论:利用国产PET-MF-2V-IT-I型氟多功能合成模块合成肿瘤显像剂2-18F-FPA,操作简便,合成时间短,收率及放射化学纯度高,稳定性好,在肿瘤显像中值得进一步的研究。
- 党永红蔡炯王玲李欣吕京桥李方
- 关键词：肿瘤显像剂自动化合成
- 阿尔茨海默病Aβ40人单链抗体在毕赤酵母的表达被引量：1
- 2006年
- 目的重组表达抗Aβ40的人单链抗体,为被动免疫治疗阿尔茨海默疾病提供研究材料。方法将从人噬菌体单链抗体文库中筛选获得的抗Aβ40人单链抗体基因,突变BamHI酶切位点,克隆连接到T载体,经过PCR和酶切鉴定。EcoRI和NotI双酶切pT-scFvAβ40质粒,连接到经过同样酶切的pPIC9K载体构建pPIC9K-scFvAβ40质粒,经过基因测序验证。线性化pPIC9K-scFvAβ40,转化GS115毕赤酵母,经0．5％甲醇诱导表达抗Aβ40的人单链抗体。结果基因测序证实pPIC9K- scFvAβ40序列正确,转化GS115获得重组菌株。经过0．5％甲醇诱导,重组菌株分泌表达分子质量大小约为33kD的蛋白质。结论成功构建pPIC9K-scFvAβ40质粒,Aβ40的人单链抗体在毕赤酵母系统得以重组表达。
- 蔡炯李方王世真郑连芳张迎强
- 关键词：阿尔茨海默病Β淀粉样肽单链抗体
- 阿尔茨海默病患者β淀粉样肽40人单链抗体在大肠杆菌的表达和纯化被引量：3
- 2006年
- 目的:重组表达并纯化抗β淀粉样肽40的人单链抗体,为被动免疫治疗阿尔茨海默疾病提供研究材料。方法:实验于2004-08/2005-03在核医学实验室完成。自制人单链抗体基因。将从人噬菌体单链抗体文库中筛选获得的抗β淀粉样肽40人单链抗体基因,克隆到pET22b(+)质粒,转化BL21-gold大肠杆菌,经0.5mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导表达抗β淀粉样肽40的人单链抗体。采用Ni2+-NTA-树脂柱亲和纯化尿素变性的包涵体内表达产物,经柱上复性,含咪唑缓冲液洗脱获得人单链抗体。应用Westernblot和酶联免疫吸附实验鉴定纯化的抗β淀粉样肽40的人单链抗体。用Branford法测定纯化抗体的浓度。结果:①抗β淀粉样肽40人单链抗体基因长度约为750bp,重组表达产物相对分子质量33000。②经过一次亲和柱纯化,从细菌包涵体中纯化出高纯度的抗β淀粉样肽40人单链抗体。③酶联免疫吸附实验分析表明纯化单链抗体和β淀粉样肽40结合的A595nm高于对照,差异显著(0.59±0.06,0.12±0.02,P<0.05),表明从包涵体中纯化出来β淀粉样肽40人单链抗体保持了结合抗原的免疫活性。纯化β淀粉样肽40人单链抗体浓度为96mg/L。结论:抗β淀粉样肽40的人单链抗体在大肠杆菌系统得以重组表达,利用亲和层析成功获得高纯度的重组单链抗体。
- 蔡炯李方王世真郑连芳蒲圻
- 关键词：阿尔茨海默病淀粉样Β蛋白基因表达
- Aβ单链抗体基因腺相关病毒的包装和纯化
- 2009年
- 目的包装和纯化携带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒,为阿尔茨海默病的基因治疗创造条件。方法用Li-pofectamine2000将pSNAV2.0-Abeta-scFv质粒转染BHK-21细胞,并用G418筛选稳定细胞系。培养稳定细胞系,用辅助病毒HSV1-rc/ΔUL2感染包装携带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒。用氯仿-PEG/NaCl-氯仿法和离子交换层析法纯化重组腺相关病毒,SDS-PAGE和PCR方法检测纯化的病毒。用地高辛标记探针测定重组腺相关病毒的物理滴度。利用水迷宫测试重组病毒对转基因阿尔茨海默病小鼠模型的治疗效果。结果带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒的纯度为98%,物理滴度为1×1012vg/mL。经过治疗的小鼠模型潜伏期明显缩短。结论利用HSV1系统成功包装和纯化了携带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒,动物实验表明对阿尔茨海默病具有治疗作用。
- 蔡炯钟彦伟李方王世真
- 关键词：阿尔茨海默病腺相关病毒
