艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2013ZX10004804-007)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：马学军张丹聂凯关丽袁晔更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心广州医科大学河北省儿童医院更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项河北省科技支撑计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 内含中东呼吸综合征冠状病毒部分N基因病毒样颗粒构建和表达被引量：1
- 2015年
- 目的 构建耐RNase酶内含中东呼吸综合征冠状病毒（middle east respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV）部分N基因的病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）.方法 将MS2噬菌体包膜蛋白和成熟酶蛋白基因编码序列插入到表达载体pET32a,构建成pET32MS中间载体,再将MERS-CoV N基因和beta-actin基因片段连接到成熟酶蛋白基因的下游,获得的重组载体p32MS-EMC-Beta转化到E.coli BL21 （DE）感受态细胞中进行诱导表达,表达产物进行纯化,然后进行耐酶实验及稳定性实验.结果 获得含MERS-CoV N基因片段的颗粒,可抵抗RNase降解,在37℃保存30d.结论 成功构建了含MERS-CoV N基因VLPs且稳定良好,可作为MERS-CoV的标准品和质控品。
- 张丹聂凯关丽陆丽马学军
- 关键词：噬菌体MS2冠状病毒属病毒样颗粒
- 呼吸道病毒感染患儿外周血淋巴细胞亚群测定及临床意义被引量：5
- 2015年
- 目的分析呼吸道合胞病毒（humanrespiratorysyncytialvirus，HRSV）、副流感病毒3型（humanparainfluenza virus Ⅲ，HPIV3）和鼻病毒（humanrhinovirus，HRV）感染患儿外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞的变化，并探讨其临床意义。方法病例对照研究。收集2014年2月-2014年11月河北省儿童医院146例急性呼吸道感染患儿标本，应用GeXP多重基因表达系统及RT—PCR扩增技术检测20种常见呼吸道病毒，选择呼吸道合胞病毒感染50例，副流感病毒III型感染46例，鼻病毒感染50例。50名健康儿童作为对照组。采用流式细胞仪检测病毒感染患儿及健康对照组儿童外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞和NK细胞值。病毒感染组与正常对照组的比较采用两独立样本比较的Mann-WhitneyU检验，不同病毒感染组间的比较采用多个独立样本比较的Kruskal-WallisH检验。结果HRSV组、HPIV3组和HRV组患儿外周血CD3＋、CD8＋、CD3＋CD4＋CD8＋、CD56＋水平均明显低于健康对照组（PI均分别为〈0．001，〈0．001，〈0．001，和0．002；P2分别为〈0．001，〈0．001，0．002和0．043；P3分别为〈0．001，〈0．001，0．001和〈0．001），CDl9＋水平及CD4＋／CD8＋比值较对照组均显著升高（P1为0．004和〈0．001；P2、P3均〈0．001）。HRSV组和HPIV3组患儿的外周血CD4＋水平较对照组明显升高（P分别为〈0．001和0．001），但HRV组患儿外周血CD4＋水平与对照组相比，差异无统计学意义（P=0．319）；三组病毒感染组分别比较，HRSV组和HRV组CD4＋水平（P=0．034）和CD4＋／CD8＋比值（P=0．018）差异有统计学意义，其他均无统计学意义。结论HRSV、HPIV3及HRV感染均可导致机体细胞免疫功能明显紊乱，且三种病毒感染后外周血淋巴细胞亚群变化趋势一致，均可使病情恶化或病程延长。及时准确的了解病毒感染患儿外周血淋巴细胞亚群的变化能更好�
- 冯志山赵梦川李贵霞石仲仁王乐袁晔郭巍巍李军杨硕严小桐马学军
- 关键词：呼吸道感染淋巴细胞亚群流式细胞仪
- 基于颜色判定的环介导逆转录等温扩增技术检测柯萨奇病毒A6型被引量：3
- 2015年
- 目的建立基于羟基萘酚蓝（hydroxynaphtholblue，HNB）颜色变化的简单、灵敏和快速的环介导逆转录等温扩增技术（RT—LAMP）检测方法，应用于柯萨奇病毒A6型（coxsackievirusA6，CV-A6）的检测。方法针对CV-A6的VPl基因设计6条特异引物，在等温条件下（63℃）进行50min扩增反应。扩增前在反应体系中加入HNB，通过观察颜色变化进行检测结果判定。使用多种肠道病毒进行特异性验证，使用梯度稀释的体外转录CV-A6全VP1基因RNA进行灵敏度分析，同时与实时荧光定量逆转录PCR（rRT—PCR）检测结果进行比较，并对92份手足口病患者临床标本进行检测。结果本研究建立的RT-LAMP方法对除CV-A6外的23种肠道病毒的检测结果均为阴性，灵敏度为100拷贝／反应，与rRT—PCR方法相当。在对92份手足口病临床标本的检测中，检测结果与rRT-PCR方法相符，Kappa值为1，灵敏度和特异性均为100％。结论本研究建立的针对CV-A6的LAMP检测方法，特异度高，灵敏度与rRT—PCR相当，有望应用于CV—A6感染的快速筛选，具有在基层医疗卫生机构和现场推广与应用的潜力。
- 关丽许松涛聂凯张丹李鑫娜许文波马学军
- 关键词：聚合酶链反应柯萨奇病毒感染
