浙江省自然科学基金(M303648)
- 作品数：14 被引量：130H指数：8
- 相关作者：张怀勤黄伟剑徐力辛杨德业季亢挺更多>>
- 相关机构：温州医学院附属第一医院温州医学院附属第二医院宁波市第二医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 川芎嗪对内皮祖细胞氧化应激损伤的保护作用研究被引量：3
- 2009年
- 目的观察川芎嗪(TMP)对过氧化氢(H2O2)诱导的内皮祖细胞(EPCs)氧化应激损伤的保护作用及机制。方法通过密度梯度离心分离脐静脉血单个核细胞,利用血管内皮生长因子(VEGF)诱导纯化方法培养EPCs。CCK-8细胞计数试剂盒、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测TMP对细胞氧化应激损伤的保护作用及机制探讨。结果200mg·L–1TMP抑制内皮祖细胞增殖功能;但是25mg·L-1TMP显著减少H2O2致细胞凋亡和细胞生长停滞在G0/G1期,而L-单甲基精氨酸(L-NMMA)抵消TMP的保护作用。结论TMP对氧化应激损伤诱导细胞凋亡和生长停滞具有明显的保护作用,eNOS受体拮抗剂L-NMMA能抵消TMP这种保护作用,说明TMP对EPCs抗氧化应激损伤的保护作用可能是通过eNOS途径。
- 林杰黄伟剑徐力辛杨德业林捷张怀勤
- 关键词：川芎嗪内皮祖细胞细胞周期氧化应激
- 复方丹参注射液对内皮祖细胞数量和功能的影响被引量：30
- 2006年
- 目的:观察复方丹参注射液对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量和功能的影响。方法:采用密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,接种到包被有人纤维连接蛋白的培养皿,分为对照组(未加细胞因子)、VEGF组(加血管内皮生长因子10 ng.mL-1)、复方丹参50组、复方丹参10组及复方丹参2组(分别加入复方丹参注射液50,10,2μg.mL-1),培养3 d后,倒置显微镜下观察集落形成,采用流式细胞术测定各组EPCs数,采用黏附能力测定试验测定黏附能力。结果:VEGF组、复方丹参10组及复方丹参2组的EPCs数显著高于对照组(分别P<0.01,P<0.05,P<0.01),且复方丹参2组显著高于复方丹参10组及VEGF组(均P<0.01);复方丹参50组的EPCs数显著低于对照组(P<0.01)。复方丹参10组及复方丹参2组的集落数及黏附细胞数显著高于对照组,而复方丹参50组则显著低于对照组。结论:低剂量复方丹参显著提高培养EPCs数量和功能,高剂量复方丹参则反之。
- 季亢挺张怀勤杨鹏麟李海鹰杨德业黄晓燕
- 关键词：复方丹参注射液内皮祖细胞细胞培养
- 两种内皮祖细胞修复兔颈动脉内膜损伤血管的对比研究被引量：10
- 2007年
- 目的观察比较外周血两种内皮祖细胞（EPC和EOC）移植对内膜球囊损伤血管的修复作用。方法密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞（MNC）。以不同的分离培养方法，获得兔外周血EPC和EOC。并将相同数量（5×10^5个）的EPC和EOC分别移植至兔内膜球囊损伤血管局部，对照组仅注入100μl生理盐水。同时用亲脂性碳青染料标记两类细胞，进行细胞示踪。术后4周，处死动物，荧光显微镜下观察标记细胞的分布，并测量各组内膜损伤血管段再生内皮覆盖率和新生内膜增生程度。结果术后4周，荧光显微镜下，在血管中膜、新生内膜层和内膜表面均可见荧光标记的细胞。EPC移植组和EOC移植组的再内皮化区域面积均显著大于对照组，差异有统计学意义（91．6％±3．6％、89．1％±6．3％vs62．1％±7．5％，P〈0．01），但移植细胞组之间比较差异无统计学意义。结论EPC移植或EOC移植均可显著加速内膜损伤血管的再内皮化，并减少新生内膜的形成，相等数量的两种内皮祖细胞移植表现出相近的效果。
- 黄伟剑肖方毅张怀勤林以诺蔡雪黎周浩林杰杨德业
- 关键词：细胞移植内皮祖细胞
- 普伐他汀对内皮祖细胞培养中扩增及黏附能力的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:观察普伐他汀对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)培养中扩增及黏附能力的影响。方法:采用密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,接种到包被有人纤维连接蛋白的培养皿,分为对照组(未加细胞因子)、V组(加VEGF10 ng/m1)、P0.1组(加普伐他汀0.1 μmol/L)、P0.01组(加普伐他汀0.01μmol/L),培养6d后,采用流式细胞术PE-CD34及FITC-VE-Cadherin双标法测定各组扩增细胞数, 采用黏附能力测定试验测定黏附能力。结果:V组、P0.1组、P0.01组的扩增EPCs数显著高于对照组(P< 0.01),且P0.1组、P0.01组均显著高于V组(P<0.001)。P0.1组、P0.01组的黏附EPCs数显著高于对照组(P<0.001)。结论:普伐他汀可显著提高培养EPCs的扩增能力及黏附能力。
- 季亢挺张怀勤杨德业黄小燕黄伟剑林捷徐力辛
- 川芎嗪对内皮祖细胞的功能影响被引量：9
- 2008年
- [目的]观察川芎嗪(TMP)对体外培养内皮祖细胞(EPCs)功能影响和损伤保护作用,探讨它对冠心病的治疗作用。[方法]密度梯度离心法获取脐血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞,流式细胞仪、荧光显微镜法、matrigel试剂鉴定EPCs。收集贴壁细胞并分组为正常对照组,TMP(5mg/L、25mg/L、100mg/L、200mg/L)干预组,H2O2(500μmol/L)氧化应激模型组,TMP(5mg/L、25mg/L、100mg/L、200mg/L)和H2O2共同干预组,培养24h。分别观察EPCs增殖、粘附能力及凋亡率。[结果]与正常对照组相比,(5mg/L、25mg/L、100mg/L)TMP干预组对脐血来源的EPCs增殖、粘附功能无显著影响,(200mg/L)TMP干预组显著抑制脐血来源的EPCs增殖、粘附;与H2O2氧化应激损伤组相比,(5mg/L、25mg/L、100mg/L)TMP能显著降低H2O2对EPCs增殖、粘附抑制作用及细胞凋亡。[结论]低浓度TMP能保护EPCs氧化应激损伤,改善增殖、粘附能力,减少细胞凋亡,但对正常培养的EPCs增殖和粘粘功能无显著的促进或抑制作用。
- 林杰徐力辛杨德业黄伟剑林捷张怀勤
- 关键词：川芎嗪内皮祖细胞过氧化氢缺血性疾病冠心病
- 非对称性二甲基精氨酸对肉皮生长晕细胞生物学功能的影响
- 2009年
- 目的 观察非对称性二甲基精氦酸（ADMA）对内皮生长晕细胞（EOC）及其生物学功能的影响。方法分离脐血中单个核细胞，采用贴壁培养法培养EOC，以免疫细胞化学染色及荧光染色法鉴定其内皮细胞特性。以10μmol／LADMA及配制ADMA的溶剂（含0.5％DMSO的EBM-2培养基），分别与第二代细胞孵育72h，检测并对比细胞的凋亡率、增殖能力及血管生成能力。结果免疫细胞染色后可见细胞表面Ⅷ因子相关抗原、CD34以及FIk-1均阳性表达，Dil-ac—LDL和FITC—UEA—Ⅰ荧光染色后可见双染色阳性细胞均为正在分化的EOC。ADMA组细胞凋亡率[（5.96±0．12）％]显著高于正常组[（1．48±0．03）％]（P〈0.01），而细胞增值活性及血管生成活性（0．27、0.02、8．25、0.96）均明显弱于正常组（8.25、0．96、16.25、1.71）（P〈0．05或0.01）。结论ADMA能促进EOC凋亡，抑制其增值活性及血管生成活性，其对EOC细胞功能的损伤作用可能是通过氧化应激机制实现的。
- 郦铮铮张怀勤林以诺
- 关键词：非对称性二甲基精氨酸氧化应激增殖能力
- 内皮祖细胞作为组织工程瓣膜内皮种子细胞的可行性研究被引量：3
- 2007年
- 目的探讨利用外周血内皮祖细胞(EPCs)制备组织工程瓣膜的可行性。方法分离人外周血EPCs,采用酶-去垢剂法去除新鲜猪主动脉瓣细胞制备去细胞瓣膜支架,将培养的人外周血EPCs接种到去细胞瓣膜上。结果经酶-去垢剂法去除新鲜猪主动脉瓣细胞后,细胞成分全部去除,纤维支架保存完好。去细胞处理后瓣膜无明显细胞毒性。人外周血EPCs与去细胞瓣膜共孵育2周后,细胞紧贴瓣膜表面生长形成一层连续的单细胞层,初步生物力学测定示去细胞前与再内皮化后,瓣膜力学特性无明显改变。结论外周血分离培养扩增得到的EPCs能够再内皮化去细胞猪主动脉瓣构建组织工程瓣膜,外周血EPCs是组织工程瓣膜内皮种子细胞的新的来源。
- 张怀勤肖刚峰孙成超杨德业徐力辛黄伟剑林捷
- 关键词：细胞培养内皮祖细胞组织工程瓣膜
- 丹参的两种主要成分对培养内皮祖细胞药理作用研究被引量：24
- 2006年
- 目的:观察丹参的两种主要成分丹参素和丹参酮IIA对体外培养内皮祖细胞(EPC)数量和功能的影响。方法:密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞并分别加入丹参素5mg/L、10 mg/L及20mg/L,丹参酮IIA0.05mg/L、0.2mg/L及0.8mg/L干预72h。荧光显微镜、流式细胞仪及免疫组化法鉴定EPC,分别观察EPC的数量、增殖、迁移及黏附能力。结果:与对照组相比,丹参素干预组促进外周血EPC扩增,并显著改善外周血EPC的黏附、迁移及增殖能力,丹参酮IIA组对内皮祖细胞数量和功能无明显影响。结论:在丹参的两种主要成分中,丹参素可增加培养EPC的数量并改善其功能,丹参酮IIA则无明显影响。
- 肖刚峰张怀勤黄晓燕黄伟剑徐力辛
- 关键词：丹参丹参素细胞培养
- 罗格列酮对内皮祖细胞增殖、黏附及迁移能力的影响被引量：8
- 2008年
- 目的:观察罗格列酮(rosiglitazone,Ros)对体外培养内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖、黏附及迁移能力的影响。方法:以密度梯度离心法获取脐血单个核细胞,培养7d后收集贴壁细胞并分为正常对照组、单独Ros(1μmol/L、5μmol/L及10μmol/L)组、H2O2(500μmol/L)氧化应激模型组、Ros(1μmol/L、5μmol/L及10μmol/L)和H2O2共同干预组,培养24h。用流式细胞仪检测细胞表达CD34、CD133、VEGFR-2、VE-Cadherin并用荧光显微镜观察细胞吞噬DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1来鉴定EPCs。分别用CCK-8、普通光学倒置显微镜、改良的Boyden小室检测EPCs的增殖、黏附和迁移能力。结果:与正常对照组相比,单独Ros干预组呈浓度依赖性促进脐血来源的EPCs增殖、黏附及迁移能力(均P<0.05),但是Ros5μmol/L和10μmol/L组间没有显著差异(P>0.05);与H2O2氧化应激损伤组相比,Ros能呈浓度依赖性改善H2O2对EPCs增殖、黏附及迁移功能的抑制(均P<0.05),Ros5μmol/L和10μmol/L干预保护组之间没有显著差异(均P>0.05)。结论:噻唑烷二酮(TZDs)类药物Ros除具有激动PPAR-γ受体降糖作用外,还具有抗氧化应激损伤作用。Ros能促进EPCs功能,改善H2O2致EPCs功能的氧化应激损伤。
- 林杰张怀勤杨德业徐力辛黄伟剑林捷
- 关键词：罗格列酮内皮祖细胞过氧化氢氧化应激
- 利用内皮祖细胞制备组织工程血管的实验研究被引量：2
- 2005年
- 目的:观察内皮祖细胞(endothelial progen itor cells,EPCs)在去细胞血管段上的再内皮化效果,探讨其组织工程学应用前景。方法:采用贴壁选择法培养人外周血EPCs,VEGF扩增分化,流式细胞仪分析培养细胞CD34、VE-Cadherin的表达,D iI-ac-LDL吞噬试验、Ⅷ因子相关抗原免疫组化及细胞形态观察证实培养细胞的内皮属性。采用球囊损伤法制备去内膜兔腹主动脉段,去内皮兔腹主动脉段体外培养3周使之去细胞,与人外周血EPCs共孵育制备再内皮化异种去细胞血管段。结果:体外成功培养出人外周血内皮祖细胞,EPCs与去细胞血管段共培育使之再内皮化,形成新内膜。结论:体外培养EPCs可制备再内皮化的异种去细胞血管段,提供了一种制备组织工程血管的新方法。
- 季亢挺张怀勤杨德业黄晓燕林捷黄伟剑李海鹰徐力辛
- 关键词：内皮祖细胞细胞培养再内皮化
