国家自然科学基金(30530190)
- 作品数：5 被引量：7H指数：1
- 相关作者：苏晓东李兰芬梁宇和董宇辉侯海峰更多>>
- 相关机构：北京大学中国科学院北京大学口腔医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家教育部“211”工程更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- 龋齿致病菌变性链球菌蛋白Smu_195c的制备、结晶及初级晶体学分析(英文)
- 2007年
- 变性链球菌(Streptococcus mutans)是最主要的龋齿致病菌.其中Smu_195c为一个约10ku(86个氨基酸)的蛋白质,序列比对结果显示,它没有包含保守的结构域,功能也是未知的.为揭示其功能,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了N端结合了6个His的编码Smu_195c的DNA片段.通过悬滴法得到了两种不同晶系的晶体.第一种属于空间群P6122或P6522,晶格参数为a=b=62.93!,c=90.63",γ=120°;第二种属于空间群P41212或P43212,晶格参数为a=b=57.97#,c=103.51$.N端带有His的蛋白质长出的晶体属于第一种,而切掉N端的6个His后的蛋白质长出的晶体两种都有.
- 高增强侯海峰李丽琴许锐梁宇和李兰芬苏晓东董宇辉
- 关键词：X射线衍射
- 蛋白质晶体学技术的发展与展望被引量：7
- 2007年
- 从50年前英国科学家解析出第一个蛋白质晶体结构以来,蛋白质晶体学历经数个里程碑式的发展,已经成为一门成熟的高科技学科,是结构生物学的主要研究手段。近年来结构生物学发展迅速并和其他学科相互渗透交叉,特别是受到结构基因组学等热点学科的极大带动。作为结构生物学的基本手段和技术,蛋白质晶体学从解析简单的蛋白质三维结构延伸到解决各类生物大分子及复合物结构,并更加注重研究结构与功能之间的相互关系,派生出诸如基于结构的药物设计等应用性很强的分支。生物技术及计算机技术的飞速发展,尤其是高通量技术在生物学领域的应用,为蛋白质晶体学带来了全新的概念和更加广阔的前景。文章将主要介绍蛋白质晶体学技术的一些历史发展以及对未来的展望。
- 李兰芬南洁苏晓东
- 关键词：X射线晶体学蛋白质三维结构结构基因组学高通量技术
- 致龋变形链球菌全基因组的蛋白表达及三维结构研究
- 《致龋变形链球菌全基因组的蛋白表达及三维结构研究》是北大结构生物学实验室承担的NFSC重点项目。龋齿病是世界性的细菌感染性疾病,变形链球菌(S.mutans)是最主要的致龋细菌。对S.mutans进行系统性蛋白结构与功能...
- 李兰芬南洁Erik Brostromer雷剑李桂澜刘晓艳侯巧明王开拓马令龙傅天民刘跃华梁宇和刘祥曹晓芳王子曦叶朝阳侯海峰高增强高雄卓展秀荣赵望泓陆永志李华唐德伟吴常伟魏世成董宇辉苏晓东张晓嫣李丹刘聪
- 关键词：结构基因组学
- 致龋变异链球菌N-乙酰谷氨酸激酶的表达、纯化和生化特性研究
- 2009年
- 探讨了在大肠杆菌中实现致龋变异链球菌N-乙酰谷氨酸激酶基因(argB)的表达、蛋白纯化和生化特性研究。以变异链球菌基因组DNA为模板,设计特异引物,PCR扩增argB基因。经消化和连接构建重组载体pET28a-argB,测序确认后转化表达菌E.coli BL21(DE3)。SDS-PAGE鉴定argB基因能诱导表达,且表达物可溶。通过镍离子螯合层析和分子筛纯化成功获得N-乙酰谷氨酸激酶(NAGK)重组蛋白。NAGK酶促反应分析表明:精氨酸生物合成的乙酰化环式路径关键酶NAGK活性不受精氨酸反馈抑制,提示可能存在其他调节方式有待进一步研究。此外,分析型分子筛结果显示:具有催化活性NAGK以单体形式存在,显然不同于此前氨基酸激酶家族中的相关报道。
- 吴常伟李兰芬高雄卓赵晓军苏晓东
- 关键词：变异链球菌
- 口腔致病菌变形链球菌Smu.776蛋白的制备、结晶及初级晶体学分析(英文)
- 2007年
- 变形链球菌smu.776基因编码一段含有385个氨基酸的蛋白质,其功能可能为依赖于腺苷甲硫氨酸的甲基转移酶.smu.776的DNA片段被克隆到表达载体pET28a后,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中过量表达得到很好的产量.产物Smu.776蛋白通过Ni2+亲和柱和分子筛柱层析两步得到纯化.采用悬滴气象扩散法得到了Smu.776蛋白的晶体.X射线衍射分辨率达到2.0!,晶体属单斜空间群C2,晶格参数为a=168.47",b=50.66#,c=53.96$,β=104.22°.每个最小不对称单元内含有一个蛋白质分子,溶剂含量为51.3%.
- 王开拓李兰芬张晓嫣梁宇和魏世成苏晓东
- 关键词：变形链球菌龋齿
- 高通量基因克隆、表达技术平台建立以及对变形链球菌若干蛋白的晶体结构研究
- ＜正＞目的:为搭建适合于国内结构基因组研究的高通量、低成本基因克隆、蛋白表达、纯化、晶体筛选、X-射线晶体衍射技术平台,寻找适合于变形链球菌蛋白高效表达的体系和条件,对变形链球菌ATCC25175国际标准株中27个和全基...
- 李兰芬张晓嫣南洁梁宇和郭丽宏林久祥魏世成苏晓东
- 文献传递
- 变形链球菌色氨酸合成途径相关蛋白酶的结构生物学研究
- 变形链球菌(变链菌)是主要致龋病菌之一,从结构基因组学角度全面研究变链菌蛋白结构与功能的关系将加深对其致龋分子机理的理解。变链菌UA159可在不含氨基酸的基本培养基上生长,推测其具有合成全部氨基酸的能力(Ajdicet ...
- 李兰芬刘聪李丹傅天民苏晓东
- 来自于变性链球菌的脱氧胞嘧啶核苷酸脱氨酶的表达,纯化,结晶以及初步晶体学研究(英文)
- 2006年
- 脱氧胞嘧啶核苷酸脱氨酶属于脱氧胞苷酸脱氨家族.对来自于变性链球菌UA159的脱氧胞嘧啶核苷酸脱氨酶进行了克隆,在大肠杆菌中进行了表达,最后纯化.快速液相分子排阻色谱分析表明这种酶在溶液中形成六聚体.利用悬滴气相扩散技术获得了这个蛋白的晶体.在北京同步辐射的3W1A线站,收集了衍射分辨率到达3.1!的数据.这个晶体属于P213空间群,其晶胞参数为a=b=c=113.2",!="=#=90°.计算可得马修斯系数为3.6#3·Da-1,据此可估计在一个不对称单位中含有两个单亚基.据目前所知,这是第一个关于野生型的脱氧胞嘧啶核苷酸脱氨酶的结晶学报道.
- 侯海峰高增强徐建华许锐李丽琴李兰芬梁宇和苏晓东刘鹏冼鼎昌董宇辉
