浙江省重点科技创新团队项目(2009R50043-06)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：王亚军罗希郑裕国许贤恩王仁凤更多>>
- 相关机构：浙江工业大学教育部更多>>
- 发文基金：浙江省重点科技创新团队项目国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- E.coli BL21(DE3)/pET28a(+)-cr羰基还原酶分离纯化及酶学性质研究被引量：3
- 2015年
- 利用强酸型阳离子交换层析和疏水作用层析技术,从实验室构建的羰基还原酶工程菌E.coli BL21(DE3)/p ET28a(+)-cr细胞中分离得到电泳纯NADP(H)依赖型的羰基还原酶,LC-MS-QTOF分析揭示其相对分子质量为35.4 k Da。该酶能不对称还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯(CHOHB)、4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)合成阿托伐他汀关键手性合成子6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯、(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯,对丙酮酸乙酯、丁二酮也表现出较高的还原能力。该羰基还原酶的最适作用条件为:30℃,p H7.5;且活性不依赖于金属离子。它催化CHOHB还原反应的最大反应速度vmax 54.3μmol·mg-1·min-1,KmCHOHB值4.4 mmol·L-1;作用于COBE时,最大反应速度vmax 36.5μmol·mg-1·min-1,KmCOBE值1.2×10-1 mmol·L-1。E.coli BL21(DE3)/p ET28a(+)-cr羰基还原酶在他汀手性侧链制造上具有广阔的应用前景。
- 王亚军吴配配罗希郑裕国
- 关键词：分离纯化
- 生物转化液下游预处理工艺开发被引量：1
- 2014年
- 生物转化液中大量菌体细胞、蛋白、细胞碎片的存在导致产物回收困难,本文考察了运用混凝技术、破乳技术去除转化液中的菌体及蛋白质的可行性。实验结果揭示,添加铝盐、铁盐及其高聚物有助于去除转化液中的菌体及蛋白质;对于已发生乳化现象的转化液,则需要添加少量表面活性剂如十二烷基硫酸钠后再进行混凝处理。处理过的生物转化液,蛋白质、菌体去除率接近100%,方便后续产物回收。工作为工业生物催化过程下游产品回收提供借鉴。
- 许贤恩王仁凤王亚军
- 关键词：乳化混凝破乳
- 反-Prelog规则羰基还原酶产生菌Debaryomyces castellii ZJB-12032产酶条件优化研究
- 2014年
- 6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯是合成阿托伐他汀的关键手性前体。实验室保藏菌株Debaryomyces castellii ZJB-12032能够不对称还原6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯β羰基,生成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯,该生物还原反应符合反-prelog规则。通过优化D.castellii ZJB-12032发酵产酶条件,包括碳源、氮源、磷源、接种量、接种时间、发酵时间,获得其最佳培养基配方:麦芽糖50 g/L、NaNO315 g/L、NaH2PO4·2H2O 0.5 g/L、Na2HPO4·12H2O 0.5 g/L,最适发酵条件:接种量10%,种龄8 h,培养温度30℃,发酵时间24h。在上述最佳发酵条件下,发酵液体积酶活达到10.2 U/L,比酶活1.20 U/g dcw,产物d.e.值99.6%,D.castellii ZJB-12032表现出高差向选择性。
- 姚震罗希王亚军郑裕国
- 关键词：羰基还原酶
