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茶树两个MYB转录因子基因的克隆及功能验证被引量：7: 2014年; 第4亚组R2R3-MYB可能参与木质素合成的调控,从而影响植物的生长发育。本文利用RACE技术,克隆了两个茶树第4亚组MYB转录因子(CsMYB4-5和CsMYB4-6)。生物信息学分析发现CsMYB4-5氨基酸序列与金鱼草中的AmMYB330一致性为48.45%,与拟南芥中的AtMYB3一致性为44.79%;CsMYB4-6氨基酸序列与金鱼草中的AmMYB308一致性为69.80%,与拟南芥中的AtMYB4一致性为62.41%。实时荧光定量PCR分析表明两个基因均在根中高表达而在茎中低表达。原核表达分析表明,CsMYB4-5和CsMYB4-6的分子量分别为32 kD和27 kD左右。烟草转化实验表明,与野生型烟草相比较,转CsMYB4-6基因的烟草叶片的叶脉紧缩而脉间凹凸不平,老叶有白色斑点,而转CsMYB4-5基因的烟草老叶发黄。; 贡年娣郭丽丽王弘雪赵磊王婕王文钊刘亚军王云生高丽萍夏涛; 关键词：茶树 MYB转录因子

茶树根原花青素提取工艺及检测方法的优化被引量：7: 2013年; 茶树（Camellia sinensis（L．）O．Kuntze）中含有丰富的多酚类化合物，统称为荼多酚，包括黄烷醇、黄酮、黄酮醇、花青素、原花青素和酚酸类等。对茶树根中原花青素的提取工艺进行优化，筛选出最佳的提取工艺条件：丙酮浓度80％、提取时间35min、提取温度50℃、加酸量0．25％。对多酚的检测方法-香草醛法、对二甲氨基肉桂醛（DMACA）法进行了系统性的优化，结果表明香草醛法最优条件：0～25℃、反应时间15min、硫酸体积分数为50％、香草醛浓度为10g·L^-1。对二甲氨基肉桂醛（DMAcA）法最优条件：0℃、5min内、盐酸浓度1．2mol·L^-1、DMACA浓度2g·L^-1。; 蒋晓岚孟菲刘亚军万根文吴珂夏涛高丽萍; 关键词：茶树提取工艺优化

茶树类黄酮合成与积累的组织器官特异性研究被引量：1: 2013年; 类黄酮是茶树的主要次生代谢产物,对决定茶叶品质及其健康功效具有重要作用。利用LC-TOF/MS、qRT-PCR等技术研究了茶树类黄酮合成积累的组织器官特异性。结果显示,茶树不同器官中,鲜叶中的酚酸、儿茶素和黄酮醇化合物种类较多且含量较高,原花青素含量低但种类多,而在根中则相反。从基因表达差异上看,从鲜叶到茎到根,4CL、CHI、F3H and F3’5’H表达依次降低。酶学实验显示,从鲜叶到茎到根,DFR/LAR和ANR酶活在鲜叶和茎中无明显差异,而在根中只检测到微弱的DFR/LAR活性。在不同发育时期鲜叶中,儿茶素含量在一叶中最高,芽其次;黄酮醇的含量在一叶和二叶中较高;花青素的含量随着鲜叶发育依次减少。qRT-PCR结果显示,PAL、C4H、CHS、F3’H、F3'5'H、DFR、LAR和ANR基因的表达与不同发育时期鲜叶中儿茶素和黄酮醇积累规律一致。酶学实验显示,随着鲜叶的发育,DFR/LAR的活性依次降低,ANR的活性呈增高趋势,它们的变化与酯型C和EGC含量趋势相吻合。; 刘亚军蒋晓岚李伟伟赵磊王云生刘莉高丽萍夏涛; 关键词：茶树类黄酮

茶树丝氨酸羧肽酶基因的克隆及表达分析被引量：1: 2013年; 近年来,人们发现丝氨酸羧肽酶类蛋白(SCPL)参与植物次生代谢产物的酰基转移过程,即具有转酰基功能。本研究采用RT-PCR技术,获得了3个茶树丝氨酸羧肽酶基因的全长序列;生物信息学分析表明,3个CsSCPL蛋白均包含了1个底物结合位点、3个催化作用保守区和多个N-糖基化位点,及其Ser-Asp-His三联体催化中心等SCPL家族的典型特征;进化树分析表明,3个CsSCPL可能具有酰基转移酶的功能。实时荧光定量PCR结果表明3个基因在芽叶茎根中都有表达,其中,CsSCPL1和CsSCPL3在叶中的相对表达量明显高于茎和根,而CsSCPL2则在根中高表达。本研究成功地将CsSCPL重组到表达载体pET32a(+)上进行原核表达,并对诱导时间及诱导温度进行了优化;经IPTG诱导、SDS-PAGE检测,目标蛋白条带分子量为70 kD,与预测大小相符。; 仇传慧李伟伟王云生李明卓骆洋刘亚军高丽萍夏涛; 关键词：茶树生物信息学分析原核表达

茶树花青素还原酶的酶学特性研究被引量：4: 2013年; 茶树花青素还原酶(CsANR)作为原花青素生物合成途径中的关键酶,催化花青素为相应的2,3-顺式-黄烷-3-醇。为了研究该酶的酶学特性,本文采用原核表达及钴离子亲和柱纯化技术,表达并纯化出目的蛋白;重点对CsANR1酶学特性进行研究分析。结果表明,CsANR1的最适反应温度为40℃,最适pH值为6.5;对底物矢车菊色素的亲和力高于飞燕草色素。Cu2+、Co2+、Fe2+、Mn2+、Zn2+和Hg2+等金属离子对酶有抑制作用,存放15d后酶活下降50%。; 杨琴赵磊刘亚军刘莉王云生高丽萍夏涛; 关键词：茶树原核表达酶学特性

茶树愈伤诱导及不同儿茶素含量细胞系筛选被引量：2: 2014年; 茶树组织培养是开展茶树次生代谢及调控研究重要的研究平台。在建立茶树愈伤组织培养体系的基础上,开展了茶树含不同儿茶素含量的细胞系筛选方法的研究。结果表明,在H、S和B 3种诱导培养基中,只有B培养基适合于诱导生长迅速、组织疏松、质地均一且具有一定儿茶素合成能力的愈伤组织。从外植体方面考虑,种子诱导出的愈伤组织具有较强的植株再生能力;幼茎和叶片诱导出的愈伤组织,其生长速度快、组织疏松,但再生能力弱。在此基础上,采用目视法和二分法,结合HPLC分析,对B培养基诱导的细胞系"yunjing63Y"进行了筛选,得到含不同儿茶素含量的细胞系"yunjing63Y"和"yunjing63X"。分析结果显示,细胞系"yunjing63Y"和"yunjing63X"的儿茶素组分与鲜叶相似,且二者儿茶素含量(干重)差异较大,前者为7.77 mg·g-1,后者为0.13 mg·g-1。; 刘亚军王正荣王婕杨冬青郭丽丽孙美莲王云生高丽萍夏涛; 关键词：茶树儿茶素细胞系

蔗糖对茶树儿茶素生物合成的影响被引量：2: 2014年; 儿茶素是茶树重要的次生代谢产物,也是茶叶的重要功能物质,具有多种药理活性。因此正确评价茶叶及其制品中儿茶素含量,了解儿茶素生物合成及其调控手段具有重要的意义。利用香草醛盐酸比色法、HPLC等方法,研究蔗糖诱导子处理对茶儿茶素生物合成的影响,并通过qRT-PCR技术分析蔗糖处理对茶树儿茶素生物合成过程中基因表达的影响。结果显示,无论是茶树愈伤组织还是茶树幼苗经蔗糖处理后其儿茶素含量及组分都有所增加,但是高浓度的蔗糖会抑制茶树愈伤组织的生长,特别是在液体培养的早期添加蔗糖。添加适当浓度的蔗糖能增加茶树愈伤组织中非酯型儿茶素C和EC的含量;蔗糖处理后茶树幼苗中非酯型儿茶素EGC和EC含量明显上升,而酯型儿茶素EGCG相对含量有所下降。qRT-PCR分析显示蔗糖诱导了茶树幼苗中C4H、CHS、CHI、F3H、LAR、ANR、DFR、F3’H、F3’5’H基因表达,其中变化最明显的是F3H,其次是ANR、CHS。这进一步证实了F3H、ANR为茶树儿茶素合成的关键基因。; 刘亚军王正荣孙美莲王云生高丽萍夏涛; 关键词：茶树愈伤组织基因表达

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安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2012A110)