青岛市科技发展计划项目(12-1-4-2-1)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：李荣贵刘晓宇刘超郭道森于洁更多>>
- 相关机构：青岛大学华中农业大学青岛奥克生物开发有限公司更多>>
- 发文基金：青岛市科技发展计划项目国家自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 黑松过氧化物酶cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达
- 2014年
- 采用RT-PCR的方法,从黑松愈伤组织中获得过氧化物酶cDNA,其开放阅读框全长981bp,编码326个氨基酸残基。将该开放读框克隆到表达载体pET-15,构建重组表达质粒pET-15b-POD,转化E.coli BL21(DE3)构建工程菌,IPTG诱导工程菌高效表达过氧化物酶,通过Ni 2+螯合亲和层析得到了电泳纯的重组过氧化物酶。生物信息学分析表明,该蛋白具有植物过氧化物酶的典型结构,以及具有过氧化物酶家族保守的活性位点。活性分析表明该蛋白的确是黑松过氧化物酶,这一结果为松萎蔫病抗性机理的研究奠定了基础。
- 刘国华窦维旺林璐璐纪旭艳王艳士李荣贵
- 关键词：黑松过氧化物酶CDNA克隆纯化
- 黑松银松素合成酶的cDNA克隆及表达研究
- 2014年
- 松萎蔫病是由松材线虫引起的一种危害性极大的森林病害,为研究黑松对松材线虫的抗性机制,本文利用RT-PCR技术对黑松体内经转录组分析获得的与银松素合成酶mRNA高相似度的序列进行扩增,获得了银松素合成酶cDNA,然后将此银松素合成酶基因(PSL)克隆到表达载体pET-15b上,构建了重组表达质粒pET-15b-PSL,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)后构建工程菌,通过IPTG诱导,工程菌高效表达重组蛋白,经Ni 2+螯合柱亲和层析得到了纯化重组银松素合成酶。该研究为了解黑松银松素合成酶的功能及松萎蔫病抗性松树的培育奠定了基础。
- 杨晓宋修明王艳士李荣贵
- 关键词：黑松CDNA克隆
- 荧光假单胞菌GcM5-1A重组鞭毛蛋白的表达及其对黑松细胞的毒性研究被引量：2
- 2013年
- 针对松萎蔫病的早期诊断及生物防治,本文利用PCR技术从荧光假单胞菌GcM5-1A的基因组中克隆了鞭毛蛋白编码基因fliC,再将该基因克隆到表达载体pET-15b的NcoI和XhoI位点,构建重组质粒pET-15b-fliC,再将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3),构建工程菌,IPTG诱导工程菌高效表达C-末端具有多聚组氨酸标签的重组鞭毛蛋白,重组蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经8mol/L尿素溶解,复性并经Ni2+螯合柱亲和层析得到了电泳纯的重组鞭毛蛋白。生测结果表明,重组鞭毛蛋白可引起黑松细胞的大量死亡,与天然鞭毛蛋白对黑松愈伤组织细胞有相似的毒性。该研究为松萎蔫病致病机理的研究奠定了基础。
- 肖莉张蕾牟卉李荣贵
- 关键词：荧光假单胞菌鞭毛蛋白
- 一株具有杀松材线虫活性海洋真菌的筛选和初步鉴定被引量：4
- 2013年
- 为了从分离得到的海洋真菌中筛选并鉴定具有杀松材线虫活性的菌株,本文采用稀释涂布平板法对采自青岛近海海域样品中的真菌进行分离,使用浸渍法对菌株的培养滤液和菌丝破碎液进行杀松材线虫活性测定,同时根据菌落形态、大小、色泽等特点的不同,经进一步纯化得到6个纯菌株,对这些菌株进行杀线活性测定,经初步筛选得到2株具有较强杀线活性的菌株,菌株HZ-1-1处理28h时杀线活性最高,其培养滤液和菌丝破碎滤液的线虫校正死亡率分别达到72.6%和84.1%;菌株HZ-1-2处理32h时杀线活性最高,其培养滤液和菌丝破碎滤液处理的线虫校正死亡率分别为46.3%和58.8%。选出活性表现最强的菌株HZ-1-1进行后续实验。实验结果表明,菌株HZ-1-1为轮枝孢属(Verticillium)的真菌。本研究对由松材线虫引起的松树萎蔫病的生物防治具有重要的理论意义。
- 徐中强于洁刘超刘晓宇郭道森
- 关键词：海洋真菌松材线虫杀线活性
