国家自然科学基金(31170759)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：张应玖李雁飞曹昊夏莹郝倩更多>>
- 相关机构：吉林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：理学生物学更多>>
- 信号肽对OPMA在枯草杆菌中的分泌表达及其催化活性的影响被引量：3
- 2013年
- 将编码枯草杆菌BS168的amyE信号肽(S)的基因与编码多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的基因重组,分别构建了分泌表达多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的重组载体pMA5-OPMA-SN和pMA5-OPMASG,并分别在枯草杆菌BS168中实现了OPMA-SN和OPMA-SG的有效分泌表达.SDS-PAGE分析表明,该信号肽的引入提高了异源蛋白的分泌量,OPMA-SN和OPMA-SG的分泌水平(53%和67%)比OPMA-N和OPMA-G(45%和58%)明显提高,但此信号肽在分泌表达OPMA-N或OPMA-G后不能被有效切除.活力分析表明,OPMA-SN(5.17 U/mg)和OPMA-N(4.57 U/mg)的活力水平与分泌水平一致,但OPMA-SG(4.50U/mg)和OPMA-G(4.65 U/mg)的活力水平却与分泌水平呈反相关性.通过分析OPMA-SN和OPMA-SG分子的空间构象发现,信号肽的存在不影响OPMA-N的活性部位构象,但影响OPMA-G的活性部位构象,从而导致OPOMA-G的催化活性下降.
- 李雁飞张金祥谷艳芹郝倩曹昊张应玖
- 关键词：信号肽
- 多功能淀粉酶OPMA在枯草杆菌中的分泌表达及发酵条件优化被引量：1
- 2014年
- 构建多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的分泌表达载体pMA5-OPMA-N和pMA5-OPMA-G,应用枯草杆菌表达系统实现了多功能淀粉酶OPMA-N与OPMA-G的表达与分泌,并分别对其发酵工艺进行优化.实验结果表明:OPMA-N适宜的表达与分泌条件为:质量分数为1%的MgSO4、质量分数为0.3%的尿素和质量分数为0.5%的酵母粉为培养液,pH=6.5,培养液装液量为16%,37℃发酵培养48h;OPMA-G的最适分泌表达条件为:质量分数为1%的NaCl、质量分数为1%的淀粉和质量分数为0.8%的酵母提取物为培养液,pH=7.0,培养液装液量为32%,37℃发酵培养36h;在上述条件下,OPMA-N和OPMA-G的分泌水平分别为发酵液中总蛋白的45%和58%,分泌酶的比活力分别为每毫克4.57和4.65酶活力单位.
- 李雁飞夏莹梁小博张应玖
- 关键词：枯草杆菌发酵
- 多功能淀粉酶固定化中的底物保护效应被引量：1
- 2015年
- 以壳聚糖为载体,通过正交实验确定了用壳聚糖凝胶微球固定多功能淀粉酶OPMA-N的最适条件：以20 mg/mL戊二醛交联,在25℃及pH=6.5条件下固定1.5 h,但需在引入底物淀粉介导的保护效应后,才能获得良好稳定性的固定化OPMA-N（ IOPMA-N）,显示了底物保护效应在催化部位占分子中较大区域的酶（如OPMA-N）固定化过程中的重要性.对比分析游离酶与固定化酶的性质与功能发现,在50℃及pH=6.0-7.0条件下, IOPMA-N的表观比活力比游离酶OPMA-N提高3倍以上,催化效率（ kcat/Km ）提高4倍以上,对弱酸性至中性及常温（30~50℃）环境的耐受性明显高于OPMA-N,并具有良好的操作稳定性和储存稳定性,重复使用15次后,酶活力仍然能够保持75%,在4℃下储存半衰期达31 d,而OPMA-N在4℃下储存5 d后活力基本丧失.催化产物的对比分析结果表明, OPMA-N固定化后,水解活性明显提高,但同时转苷活性有所下降,这与已报道的OPMA-N分子中2种催化活力存在平衡机制的结论一致,同时也表明在OPMA-N的固定化中底物淀粉对其水解活性有明显的保护作用,但对其转苷活性几乎无贡献.
- 夏莹曹昊张应玖
- 关键词：壳聚糖固定化底物
