南京医科大学科技发展基金资助(2012NJMU253)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：同济大学附属东方医院南京医科大学更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金南京医科大学科技发展基金资助更多>>
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- 犬成肌细胞复合聚乳酸聚乙酸共聚物支架在裸鼠体内异位成软骨的实验研究
- 2013年
- 目的探讨与聚乳酸聚乙酸共聚物[poly(lactide-co-glycolide),PLGA]支架复合后的成肌细胞体外经软骨来源形成蛋白2(cartilage-derived morphogenetic protein 2,CDMP-2)联合TGF-β1诱导后,能否在裸鼠体内异位构建组织工程软骨。方法取1岁龄雄性比格犬股直肌肌肉分离培养成肌细胞,取第4代成肌细胞接种于PLGA支架,加入含CDMP-2与TGF-β1的软骨诱导液体外培养2周。实验分为4组:A组为经软骨诱导的成肌细胞-PLGA复合物组,B组为未经软骨诱导的成肌细胞-PLGA复合物组,C组为经软骨诱导的单纯PLGA支架组,D组为单纯PLGA支架组。于24只裸鼠背部皮下两侧制备4个皮下腔隙,分别植入4组材料。术后8、12周处死裸鼠,取材行大体观察、HE及甲苯胺蓝染色、Ⅰ型胶原及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察,RT-PCR检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、蛋白聚糖(Aggrecan)、Sox9mRNA表达,阿利新蓝染色检测糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAG)含量,生物力学试验检测标本压缩弹性模量。结果 A组标本术后8周呈类软骨样,乳白色,表面光洁,有弹性;12周时外观和弹性与正常软骨相似。B组术后8周仅残余少许组织,12周已完全降解;C、D组标本术后8周均降解消失。HE染色示A组8、12周时有成熟软骨陷窝形成;B组8周时组织内未见软骨陷窝形成。甲苯胺蓝染色示A组8、12周时组织内新生软骨细胞形成,细胞椭圆,排列整齐,细胞陷窝形成,细胞质和细胞外基质均蓝染阳性;B组8周时组织内未见蓝染的细胞外基质。Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示A组8、12周时均呈阳性表达;B组8周时呈阴性表达。RT-PCR检测示术后8、12周A组均可见Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Aggrecan和Sox9 mRNA表达,B组均呈阴性。术后12周A组压缩弹性模量为(90.79±1.78)MPa,GAG含量为(10.20±1.07)μg/mL与正常半月板相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外CDMP-2联合TGF-β1软骨诱导的比格犬成肌细胞复合PLGA�
- 顾羊林王予彬施克勤杨玉生陈鹏朱文辉朱国兴
- 关键词：组织工程软骨成肌细胞裸鼠
- 改良比格犬成肌细胞的体外分离纯化培养及其生物学特性研究被引量：1
- 2014年
- 目的:建立一种体外分离、纯化、培养成年犬骨骼肌成肌细胞的简便有效方法,观察其生长增殖情况,并鉴定其生物学特征。方法:以成年比格犬为研究对象,采用机械分解法与IV型胶原酶和胰蛋白酶的二步酶消化法相结合分离获取犬成肌细胞,并采用差速贴壁法与免疫磁珠分选法相结合纯化成肌细胞。镜下观察分离纯化后的成肌细胞的细胞形态、生长状况,绘制细胞生长曲线,并采用流式细胞仪和免疫细胞化学等方法鉴定成肌细胞纯度。结果:原代培养6 h后可见呈圆形的单核细胞贴壁生长,起初为小圆形,48 h后可见梭形贴壁细胞,3 d后贴壁细胞明显增多,5 d左右进入对数增长期,9 d左右细胞单层融合接近90%。流式细胞仪检测纯化后的第4代(P4)成肌细胞显示,95%细胞表达CD56,Desmin免疫细胞化学染色显示细胞呈阳性反应。结论:该法可获取高纯度、高产量,具有良好增殖、分化能力的成肌细胞,并且获得的成肌细胞的生长增殖能力较强,符合半月板组织工程种子细胞的基本条件。
- 顾羊林王予彬朱文辉陈鹏杨正杰朱国兴
- 关键词：成肌细胞细胞培养生物学特性
