广东省自然科学基金(8151051501000005)
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
- 相关作者：王海红董为人李妍张琳刘忠英更多>>
- 相关机构：南方医科大学佛山科学技术学院湘南学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金佛山市卫生局医学科研立项课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 多因子联合诱导脂肪组织源性干细胞分化为神经元样细胞
- 2011年
- 背景:国内均可见有探讨脂肪干细胞向神经元诱导分化的相关研究报道,但运用差速贴壁法纯化脂肪组织源性干细胞,多因子联合诱导脂肪组织源性干细胞分化为神经元样细胞的研究鲜有报道。目的:观察多因子联合诱导和分步诱导方案诱导大鼠脂肪组织源性干细胞体外分化为神经元样细胞的可行性。方法:取SD雄性大鼠腹股沟和附睾脂肪垫脂肪组织,酶消化法分离、差速贴壁法纯化脂肪组织源性干细胞。免疫荧光细胞化学法鉴定脂肪组织源性干细胞(CD44,CD49d,CD106);"鸡尾酒"式神经元诱导培养基对脂肪组织源性干细胞进行诱导分化,并用免疫荧光细胞化学法鉴定(Nestin和NeuN)分化结果。结果与结论:大鼠腹股沟和附睾脂肪垫脂肪组织内分离、原代培养的脂肪组织源性干细胞形态均一,呈长梭形,细胞核椭圆形,核仁明显,细胞质染色浅,呈旋涡状克隆样生长;CD44和CD49d阳性表达而CD106阴性;诱导培养基内培养6h后脂肪组织源性干细胞呈锥体形或不规则,有短而细的指状突起;24h后多数细胞显示类神经元的形态学特征,且Nestin和NeuN阳性。提示肪组织源性干细胞在多因子"鸡尾酒"式培养基内可向神经元方向分化。
- 张丽华汤银娟董为人郭家松陈小艳王海红陈盼盼叶泉英冯淑兰张易
- 关键词：分化神经元免疫细胞化学
- 新生血管可视化转基因小鼠的建立被引量：2
- 2011年
- 目的建立新生血管的内皮中有绿色荧光蛋白(GFP)表达的转基因动物。方法构建含巢蛋白第二内含子和GFP的载体nestin-hsp68-gfp,转入U251细胞,验证其在真核细胞中的表达。然后用显微注射的方法,建立转基因动物。小鼠出生后,剪尾提基因组,用PCR初筛,然后对初筛阳性的小鼠检测GFP的表达。结果出生13只小鼠,初筛2只阳性。能检测到GFP在出生后和胚胎小鼠中有表达。结论成功制作标记新生血管的转基因小鼠。
- 李振林高毅贾俊双陈宋钦王海红安靓
- 关键词：巢蛋白新生血管转基因小鼠绿色荧光蛋白
- 细胞周期重启与阿尔茨海默病被引量：2
- 2011年
- 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是最常见的神经退行性疾病,占成人痴呆症的60%以上。研究表明在受到异常刺激时分化成熟的细胞可以跨过G0/G1检查点进入G1期,并在S期发生DNA复制,有的细胞甚至能够到达G2期,但是最终却不能进入M期完成有丝分裂的整个过程。中枢神经元通常被认为处于终末分化状态,意味着它们不再进入细胞周期。然而,越来越多的研究显示AD患者脑中神经元存在细胞周期的重启,细胞周期重启可导致神经元死亡,细胞周期重启与AD的病理变化关系密切。
- 李妍王海红董为人
- 关键词：阿尔茨海默病TAU蛋白
- Tau蛋白过度表达促进细胞重新进入细胞周期
- 2011年
- 目的探讨tau蛋白过度表达对细胞重新进入细胞周期的影响。方法采用免疫印迹和免疫荧光细胞化学的方法,分别检测稳定转染质粒pcDNA3.1-tau和空载体pcDNA3.1的HEK293细胞(HEK293/tau和HEK293/vec)中tau的表达,用细胞周期抑制剂Aphidicolin处理细胞抑制细胞周期,在Aphidicolin处理20h和撤药6h时应用流式细胞术检测细胞周期。结果 tau蛋白在HEK293/tau细胞中过度表达;Aphidicolin作用20h使62.33%的HEK293/tau和69.98%的HEK293/vec细胞停留在G0/G1期,两者之间差异没有统计学意义;撤药6h时,与HEK293/vec细胞相比,HEK293/tau细胞处于G0/G1期的比率显著减少,处于S期的比率显著增多。结论 Tau蛋白过度表达促进细胞重新进入细胞周期。
- 王海红张琳董为人刘忠英张磊李妍
- 关键词：TAU蛋白细胞周期阿尔茨海默病
- 真核表达质粒pcDNA3.1-tau的构建及在HEK293细胞中的稳定表达
- 2011年
- 背景:阿尔茨海默病患者的痴呆症状严重程度与脑组织中的神经原纤维缠结数量呈正相关,神经原纤维缠结的主要蛋白成分为过度磷酸化的蛋白tau,tau蛋白的病理改变出现在痴呆症状之前并独立于β-淀粉样多肽的异常。目的:构建tau基因的真核表达质粒,建立稳定表达tau的稳转细胞株。方法:采用反转录-聚合酶链反应方法,从反转录反应合成的人成神经瘤细胞(SH-SY5Y)的总cDNA中,扩增出约1.0kb的tau cDNA片段,用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;用脂质体介导法将质粒转染入培养的人胚肾细胞,并利用G418进行稳定表达tau的稳转细胞株的筛选,免疫印迹和免疫荧光细胞化学方法检测tau基因的表达。结果与结论:人tau cDNA已克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中;免疫印迹和免疫荧光细胞化学结果显示人tau基因在人胚肾细胞中获得表达,tau蛋白表达的阳性信号主要位于细胞胞质,说明成功构建了pcDNA3.1-tau的真核表达质粒,建立了稳定表达tau的稳转细胞株。
- 王海红董为人张琳晏芳刘忠英李妍
- 关键词：基因克隆TAU转染真核表达质粒
