上海市科技兴农重点攻关项目(20053-4) 作品数:3 被引量:17 H指数:3 相关作者: 王权 李安平 黄克和 曾晓华 李建 更多>> 相关机构: 中国农业科学院上海兽医研究所 南京农业大学 湖南农业大学 更多>> 发文基金: 上海市科技兴农重点攻关项目 国家质检总局科技计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫SYBR Green real time PCR检测方法的建立 被引量:9 2009年 根据GenBank中登录的隐孢子虫小亚基rRNA基因序列设计1对引物,并以标准基因组DNA为模板,初步建立了检测乳牛微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫的SYBR Green real time PCR方法,并对乳牛微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫阳性样品和上海40份乳牛粪便进行了检测。结果表明,此次建立的real timePCR对微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫均能扩增出曲线,且其他寄生虫(鸡贝氏隐孢子虫、刚地弓形虫、犬新孢子虫)和大肠杆菌均未检测到;标准基因组DNA的检测阈值达到5个拷贝,牛粪中卵囊的最低检测量为每克粪便5个卵囊,乳牛粪便阳性率为15%(6/40)。表明,建立的荧光定量PCR快速、特异、敏感,可用于乳牛隐孢子虫病的流行病学调查。 李安平 黄克和 王权 朱志宏 曹积生 巩新民 杨国柱关键词:SYBR 微小隐孢子虫 安氏隐孢子虫 巢式PCR-RFLP法检测奶牛隐孢子虫及虫种鉴定 被引量:6 2008年 采进口奶牛粪样200份,收集每份样品中的卵囊液,采用巢式PCR检测隐孢子虫(Cryptosporidium)18S rRNA基因,并用RFLP进行虫种鉴定,将目的片段克隆到pEGM-T easy vector,测序并进行同源性分析以进一步佐证虫种鉴定结果。结果表明,进口奶牛隐孢子虫阳性率为3.5%(7/200),514bp的目的片段不能被EcoT14 Ⅰ酶切。测序分析表明,获得的18S rRNA基因序列与NCBI上公布的微小隐孢子虫(C.parvum)相应序列同源性高达99.4%~100%,与安氏隐孢子虫(C.andersoni)同源性仅为91.1%。说明进口牛粪样中检测出的隐孢子虫为微小隐孢子虫。 曾晓华 陈铁桥 王权 李建 李安平关键词:隐孢子虫 奶牛粪便 利用SYBR Green检测牛隐孢子虫Rea1-Time PCR方法的建立及应用 根据GenBank公布的隐孢子虫SSU rRNA基因序列设计一对引物,并以标准基因组DNA为模板。初步建立检测奶牛隐孢子虫的基于SYBR Green的Real-Time PCR方法,对奶牛微小隐孢子虫(C.parvum)... 王权 李安平 朱志宏 王赞江 袁耀明关键词:实时荧光定量PCR 隐孢子虫 文献传递 Rea1-time qPCR检测安氏隐孢子虫卵囊方法的建立及应用 被引量:5 2009年 根据GenBank公布的安氏隐孢子虫SSU rRNA基因序列设计1对引物和TaqMan探针,建立了基于Taq-Man探针检测安氏隐孢子虫的实时荧光定量PCR方法,并对奶牛粪便进行了检测。结果显示,设计的探针对检测安氏隐孢子虫具有很高的特异性;质粒DNA和卵囊的检测阈值分别达到5个拷贝和10个卵囊,奶牛粪便阳性率为21.15%(11/52)。建立的安氏隐孢子虫TaqMan荧光定量PCR检测方法简便、快速,特异性强,敏感度高,可用于安氏隐孢子虫的快速定量检测。 李安平 王权 黄克和 朱志宏 王赞江 袁耀明 曾晓华关键词:实时荧光定量PCR SSU RRNA TAQMAN探针 安氏隐孢子虫