科技部基础研究重大项目前期研究专项([2001]50)
- 作品数：8 被引量：31H指数：3
- 相关作者：田聆魏于全胡兵刘继彦杨莉更多>>
- 相关机构：四川大学华西医院四川大学南京医科大学更多>>
- 发文基金：科技部基础研究重大项目前期研究专项国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼠表皮生长因子受体胞外段原核表达、纯化与复性被引量：3
- 2003年
- 用多聚酶链反应 (PCR)方法从既往构建质粒扩增鼠表皮生长因子受体 (EGFR)胞外段基因及适宜酶切位点 ,进而构建原核表达载体。克服质粒丢失的不足 ,在大肠杆菌中表达目的蛋白 ,并在变性条件下通过 Ni2 +柱亲和层析纯化表达蛋白 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)示纯度在 95 %以上。去除组氨酸标记的纯化蛋白在梯度尿素中透析复性。复性蛋白在表皮生长因子的作用下可以同源二聚化而在非还原 SDS- PAGE及蛋白印迹分析中呈二聚体状态 ,其所产生抗体可以识别复性蛋白及表达于肺癌细胞上的 EGFR,提示复性后大肠杆菌表达鼠EGFR胞外段重组蛋白已获得一定空间结构 ,并具有免疫原性 ,可以进一步用于
- 胡兵田聆卢铀杨莉赵霞刘继彦魏于全
- 关键词：表皮生长因子受体原核表达免疫原性基因扩增胞外段
- 异种血管内皮细胞生长因子重组蛋白质疫苗联合阿霉素治疗淋巴瘤的研究被引量：2
- 2005年
- 目的探讨重组非洲爪蟾血管内皮细胞生长因子(Xenopuslaevisvascularendothelialgrowthfactor,xVEGF)肿瘤疫苗免疫治疗,联合阿霉素抗小鼠淋巴瘤的作用。方法采用C57BL/6小鼠建立EL4淋巴瘤模型。实验小鼠随机分成4组xVEGF联合阿霉素组(简称联合用药组)、阿霉素组、xVEGF组、生理盐水对照组。观察肿瘤生长、小鼠生存率和毒副反应,并检测分泌抗自身VEGF抗体的B细胞、肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)和肿瘤细胞凋亡等。结果联合用药组肿瘤明显小于其他3组(P<0.05),其中有3只小鼠肿瘤完全消退;接种肿瘤后48d,联合用药组小鼠生存率为100%,明显高于生理盐水对照组(0%)(P<0.01)。ELISPOT检测发现,异种蛋白质疫苗免疫的小鼠(联合或单用)产生了分泌抗自身VEGF抗体的B细胞,其数量与阿霉素组或生理盐水对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。联合用药组肿瘤MVD明显低于其他3组(P<0.05),肿瘤细胞凋亡指数明显高于其他3组(P<0.05)。结论采用异种同源蛋白质疫苗xVEGF免疫治疗,与阿霉素化疗联合有协同增强的抗小鼠淋巴瘤的作用。
- 牛挺刘霆贾永前刘继彦吴扬胡兵田聆杨莉阚兵魏于全
- 关键词：血管内皮细胞生长因子阿霉素淋巴瘤化学治疗
- 氰戊菊酯对小鼠精子体外获能的影响及机制探讨被引量：15
- 2004年
- [目的 ]观察氰戊菊酯 (fenvalerate ,Fen)对小鼠精子体外获能的影响并探讨其作用机制。 [方法 ] 2 0 0 μl小鼠精子细胞悬液加入不同终浓度Fen染毒后 ,CO2 孵箱 3 7℃培育 2h ,以金霉素 (chlortetracycline ,CTC)荧光染色后涂片观察小鼠精子体外获能培养后B型精子的发生率。[结果 ]以终浓度为 0、0 .62 5、1.2 5、2 .5、5 .0、10 .0、2 0 .0 μmol·L-1的Fen处理小鼠精子 ,其B型精子发生率分别为 ( 5 5 .0 5± 0 .43 ) %、( 5 2 .0 2± 1.2 9) %、( 4 7.13± 0 .87) %、( 4 0 .0 8± 0 .3 2 ) %、( 3 5 .79± 0 .88) %、( 2 8.66± 0 .96) %、( 2 7.89± 1.5 6) % ,半数有效剂量 (ED50 )为 5 μmol·L-1,其作用呈剂量 反应关系。同时Fen以时间依赖方式抑制B型精子发生率。进一步观察到 2 .5、5 .0、10 .0、2 0 .0 μmol·L-1的Fen组小鼠精子 ,与对照组相比 ,其精子细胞膜脂质流动性下降 [以 1,6 二苯已三烯 ( 1,6 diphenyl 1,3 ,5 hexatriene ,DPH )为荧光探针 ] ,作用呈剂量 反应关系。 [结论 ]氰戊菊酯抑制小鼠精子体外获能 ,其作用机制主要是氰戊菊酯降低了精子细胞膜脂质流动性。
- 龚伟张习春高蓉程洁肖杭
- 关键词：氰戊菊酯小鼠精子神经细胞膜体外获能膜脂质
- N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂氯胺酮抑制大鼠吗啡戒断症状的表达被引量：5
- 2002年
- 目的 :观察N 甲基 D 天冬氨酸 (N methyl D aspartate ,NMDA)受体拮抗剂氯胺酮 (ketamine)在不影响运动功能的条件下 ,是否能抑制吗啡依赖大鼠的戒断症状。方法 :给大鼠连续注射递增剂量吗啡 5d ,造成其对吗啡的依赖 ,用纳洛酮催促戒断症状的出现。应用行为药理学的研究方法 ,经腹腔 (2～ 16mg·kg-1)、侧脑室 (4～ 10 0μg)及相关核团 (0 .4～ 10 μg)给予不同剂量的氯胺酮。结果 :反复 4次 (1)腹腔注射 8mg·kg-1,最后一次注射 3h后 ,能显著抑制 2种戒断症状 ;16mg·kg-1能显著抑制 3种戒断症状。 (2 )反复 4次脑室注射 10 0 μg氯胺酮 ,能显著抑制 2种戒断症状。 (3)伏核内注入 0 .4～ 10 μg的氯胺酮可显著抑制 4种戒断症状 ,但注入杏仁核则无效。 结论 :在不影响大鼠运动功能的条件下 ,氯胺酮对吗啡戒断症状有明显抑制作用 。
- 冀栋隋滋野崔彩莲罗非韩济生
- 关键词：氯胺酮吗啡戒断症状
- 人EGFR胞外段原核表达及免疫原性研究被引量：1
- 2003年
- 目的 :研究人EGFR胞外段在原核本系的表达、纯化条件以及对小鼠的免疫原性。方法 :以既往构建包含人EGFR胞外段基因的表达质粒为基础 ,采用基因工程方法构建pET原核表达载体。在大肠杆菌中表达目的蛋白 ,表达蛋白在变性条件下 ,通过Ni2 + 柱亲和层析纯化以包涵体形式存在的His -Tag融合蛋白 ,SDS -PAGE检测其纯度。去余His-Tag的纯化蛋白在梯度尿素中透析复性。以复性蛋白免疫小鼠获得抗血清 ,westernblotting及流式细胞仪检测特异抗体的存在。结论 :通过限制酶切分析及测序鉴定表明获得了人EGFR胞外段基因的pET原核表达载体 ,SDS -PAGE分析表明在IPTG诱导下可以表达 90Kd目的蛋白其纯度大于 95 % ,所产生抗体可以识别复性蛋白及表达于A5 4 9细胞上的EGFR。提示在大肠杆菌中表达的人EGFR胞外段重组蛋白具有免疫原性 。
- 胡兵田聆刘健卢铀赵霞魏于全
- 关键词：EGFR原核表达免疫原性
- 重组非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达、纯化及鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的 构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子重组表达载体,进行蛋白质原核表达,并对表达产物进行分离、纯化和鉴定。方法 首先通过限制性核酸内切酶酶切及连接反应,构建非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达载体p ET- x VEGF和p ET- m VEGF。筛选的重组质粒经酶切和DNA序列测定等证实正确性后,再转染感受态大肠杆菌BL 2 1(DE3) ,经IPTG诱导蛋白质表达。表达产物经Ni- NTA亲合层析及肠激酶特异性酶切进行分离纯化,最后用SDS- PAGE和蛋白免疫印迹法进行鉴定。结果 限制性核酸内切酶酶切和DNA序列测定等显示目的基因片段和阅读框架正确无误,表明非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达载体p ET-x VEGF和p ET- m VEGF构建成功。重组蛋白质在大肠杆菌中获得稳定表达,分离纯化的表达产物x VEGF和m VEGF 的纯度达到95 %以上,其相对分子质量与预期值一致。抗小鼠VEGF抗体可特异性识别x VEGF和m VEGF。结论 重组非洲爪蟾和小鼠血管内皮细胞生长因子的原核表达、分离纯化及鉴定成功,为进一步研究异种VEGF蛋白质疫苗抗小鼠肿瘤模型奠定了基础。
- 牛挺刘霆贾永前杨莉田聆刘继彦胡兵吴扬魏于全
- 关键词：血管内皮细胞生长因子重组蛋白质原核表达
- 非洲爪蟾VEGF肿瘤疫苗治疗小鼠纤维肉瘤的研究被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨非洲爪蟾VEGF肿瘤疫苗免疫抗小鼠纤维肉瘤的作用。方法:采用BALB/c小鼠建立MethA小鼠纤维肉瘤模型。实验肿瘤小鼠随机分成3个治疗组:非洲爪蟾VEGF(xVEGF)组、小鼠VEGF(mVEGF)组、生理盐水对照(NS)组。观察小鼠肿瘤生长、生存率和治疗的毒副反应,并检测抗自身mVEGF抗体、肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)。结果:xVEGF组肿瘤明显小于mVEGF组或NS对照组(P<0.05),xVEGF组小鼠生存率也明显高于mVEGF组或NS对照组(P<0.01)。WesternBlot检测发现异种蛋白质疫苗免疫的小鼠体内产生了抗自身mVEGF抗体,xVEGF组肿瘤MVD明显低于mVEGF组或NS对照组(P<0.01)。结论:非洲爪蟾VEGF疫苗治疗可诱导纤维肉瘤小鼠产生抗自身VEGF免疫反应及抗肿瘤作用。
- 牛挺向兵黄杰文艳君田聆贾永前刘霆魏于全
- 关键词：血管内皮细胞生长因子免疫治疗
- 异种VEGF疫苗免疫治疗联合化疗抗实体瘤的实验研究
- 2005年
- 目的探讨重组非洲爪蟾血管内皮细胞生长因子(Xenopuslaevisvascularendothelialgrowthfactor,xVEGF)肿瘤疫苗免疫治疗,联合小剂量阿霉素化疗抗小鼠纤维肉瘤的作用。方法实验小鼠随机分成4组xVEGF联合阿霉素组(简称联合用药组)、单用阿霉素组、单用xVEGF组、生理盐水对照组。观察各组肿瘤生长、小鼠生存率和毒副反应,并检测抗自身VEGF抗体、肿瘤微血管密度(Microvesseldensity,MVD)和肿瘤细胞凋亡等。结果联合用药组肿瘤明显小于单用阿霉素组和单用xVEGF组(P<0.05),或生理盐水对照组(P<0.01),联合用药组有3只小鼠肿瘤完全消退;接种肿瘤后48d,联合用药组小鼠生存率为100%,明显高于单用阿霉素组和单用xVEGF组生存率(P<0.05),或生理盐水对照组(P<0.01)。WesternBlot和ELISPOT检测发现,联合组或单用xVEGF组小鼠产生了抗自身VEGF抗体,其分泌抗自身VEGF抗体的B细胞数量,与阿霉素组或生理盐水对照组相比,有显著性差异(P<0.01)。联合用药组肿瘤MVD减少和细胞凋亡指数升高与三个对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论异种同源蛋白质疫苗xVEGF与小剂量阿霉素联合治疗有协同增强的抗小鼠实体瘤的作用。
- 牛挺刘霆贾永前刘继彦吴扬胡兵田聆杨莉阚兵魏于全
- 关键词：血管内皮细胞生长因子阿霉素实体瘤化学治疗
