浙江省自然科学基金(302670)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- VEGF165和VEGF121在MC3T3-E1细胞中的表达及生物学功能
- 2006年
- 目的:构建一个能在M C 3T 3-E 1细胞中稳定表达,并具有生物学活性的VEGF 165和VEGF 121基因表达载体。方法:采用RT-PCR技术从HL-60细胞中扩增人VEGF 165和VEGF 121基因,将获得的基因定向插入pcDNA 3.1(+)真核表达质粒中,测序正确后用脂质体将表达质粒转染入M C 3T 3-E 1细胞。细胞经G 418加压有限稀释筛选,采用EL ISA法、W estern b lot法及免疫荧光法检测VEGF蛋白表达,并用MTT法检测表达的蛋白对血管内皮细胞株(HUECV 304)的增殖活性影响。结果:通过基因测序表明获得的VEGF 165和VEGF 121与G eneBank登录的序列一致,构建的质粒分别为VEGF 165/pcDNA 3.1(+)质粒和VEGF 121/pcDNA 3.1(+)质粒,EL ISA及W estern b lot检测结果均表明VEGF 165和VEGF 121基因转染M C 3T 3-E 1后能在细胞中稳定表达,表达产物能明显促进HUECV 304细胞生长。结论:基因转染的M C 3T 3-E 1细胞能稳定、高效表达具有生物学活性的VEGF165和VEGF121重组蛋白。
- 贺俊王慧明姚航平
- 关键词：3T3细胞转染
- 骨形态发生蛋白-7真核表达载体的构建及其在MC3T3-E1细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建一个能在MC3T3-E1细胞中表达骨形态发生蛋白-7(bmp-7)基因表达载体。方法采用RT-PCR技术从人胚肾中扩增人bmp-7基因,将获得的基因定向插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒中,测序正确后用脂质体将表达质粒转染入MC3T3-E1细胞,转染后72h提取细胞全蛋白,采用Westernblot检测BMP-7蛋白表达。结果通过基因测序表明获得的bmp-7与GeneBank登录的序列一致,构建的质粒为bmp-7/pcDNA3.1(+)质粒,Westernblot检测结果表明bmp-7基因转染MC3T3-E1后能在细胞中表达。结论成功构建能在MC3T3-E1细胞中表达BMP-7的真核表达载体。
- 贺俊王慧明
- 关键词：骨形态发生蛋白-7成骨基因表达
