天津市高等学校科技发展基金计划项目(2006ZD10)
- 作品数：4 被引量：79H指数：2
- 相关作者：陈琛孟凡荣万海粟周清华李永文更多>>
- 相关机构：天津医科大学总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒载体及其研究进展被引量：70
- 2014年
- 慢病毒载体(lentivirus vector,LV)是目前分子及细胞生物实验中非常有效的工具,在基因转染方面有着许多独特的优势,例如,对细胞是否处于有丝分裂期没有特别的要求,基因转染效率高,可容纳较大基因片段等。本文将就慢病毒载体的来源、分子特征及研究进展等进行综述。
- 孟凡荣陈琛万海粟周清华
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰
- MicroRNAs与OCT4基因之间的相互作用被引量：8
- 2015年
- OCT4基因是POU转录因子家族中的一员,它能与含八聚体基序(ATGCAAAT)的DNA结合。OCT4是一个关键的转录因子,在未分化胚胎干细胞中参与维持多能性和自我更新性,在许多种癌症包括肺癌、生殖细胞肿瘤、乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌、胃癌、肝癌和卵巢癌中过表达。Micro RNAs(mi RNAs)是一种小的非编码RNA,通过和靶基因m RNA碱基配对来调控m RNA表达,降解m RNA或阻碍蛋白合成。一些mi RNAs被证实在癌细胞中调控干细胞因子如OCT4、NANOG、SOX2和KLF4,进而调控癌细胞的增殖、凋亡、分化、抗药性和免疫性。
- 陈琛孟凡荣万海粟周清华
- 关键词：MICRORNASOCT4肿瘤胚胎干细胞多能性
- 在长载体中引入定点突变的方法
- 2014年
- 背景与目的体外基因定点突变是分子生物学实验的常用方法。然而,虽然目前已经报道了多种基因突变的方法,但对于在长的载体序列中引入突变,一般的方法并不太容易实现。方法本研究在我们前期报告的基因突变方法的基础上,描述了一种简单易操作的可在长序列中引入定点突变的方法。这个方法的基本实验程序是:①确定待突变区域,合成一对均含有Type IIs类限制性内切酶位点载体引物,并合成一对互补的突变单链;②在突变区域之外的合适位置上,选择一个桥点,并合成一对均含有Type IIs类的限制性内切酶位点的桥点引物;③利用载体引物序列和桥点引物序列做PCR反应,以扩增载体序列中突变区域外的序列;④利用相应的Type IIs类的限制性内切酶,对以上扩增产物进行酶切;⑤将酶切产物和两个突变单链复性成的突变双链连接,形成突变载体,并转化进受体菌作克隆鉴定。结果为证明我们所报告的方法的有效性,我们在长的载体中进行了测试,结果显示,不但实验操作简单易行,而且突变效率可达到90%以上。结论我们提供了一种有效的在长载体中进行定点突变的方法。
- 孟凡荣陈琛万海粟周清华
- 关键词：定点突变TYPE
- 在基因序列中高效引入多位点突变的方法被引量：1
- 2014年
- 背景与目的在基因序列中引入点突变是研究基因结构和功能及其相关性的重要手段。目前已有多种对基因序列进行突变的方法,然而,这些方法大多对单一位置的基因突变有效,而对在基因序列中引入多位点突变,还有待方法的进一步改进。为适应这一需要,本研究提供了一种高效的可在基因序列的多个位点引入突变的方法。方法该方法依赖于一种Type IIs类的限制性内切酶,例如Esp 3I等。本研究所提供的方法中,针对每一个突变位点,合成一对含有突变点和所选择的Type IIs类的限制性内切酶位点的引物,当需要引入多位点突变时,则利用邻近的两个突变位点的引物做PCR反应,多个位点的突变,就可以得到多个扩增片段,将这些片段用和引物上的限制性内切酶位点对应的酶进行反应,然后用连接反应将片段连接形成突变基因。结果本研究所提供的方法非常简便,主要实验步骤可以在一天之内完成。我们已经利用这种方法,在绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecence protein,EGFP)和nm23基因中,引入3个或4个突变,突变效率几乎为100%。结论本研究所提供的方法可以成为研究基因功能的有用工具。
- 孟凡荣陈琛李永文万海粟周清华
