长三角科技联合攻关项目(1101c0603065)
- 作品数：8 被引量：26H指数：4
- 相关作者：李郁魏建忠孙裴赵洪武殷宗俊更多>>
- 相关机构：安徽农业大学中国科学院近代物理研究所更多>>
- 发文基金：长三角科技联合攻关项目安徽省“十一五”科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学核科学技术更多>>
- 猪2型链球菌安徽分离株的毒力基因、溶血性及耐药性分析被引量：4
- 2014年
- 目的了解猪2型链球菌（S.suis 2）安徽分离株的毒力基因分布特征以及溶血性和耐药性。方法对19株S.suis 2安徽分离株,采用PCR方法检测cps2J、mrp、epf、sly4种毒力基因,PA法和micro-ELISA法检测溶血类型和溶血价,K-B法检测对25种抗生素的敏感性。结果 11株毒力基因型为cps2J＋/mrp＋/epf＋/sly＋,占总菌株的57.9%,为毒力优势基因型;19株均呈α或β溶血,溶血价为1∶4~1∶128;对利福平、头孢他啶、氟苯尼考、头孢唑啉的敏感率较高,平均为84.2%,对强力霉素、四环素、杆菌肽和磺胺异恶唑的耐药率较高,平均为82.9%,且对该4种抗生素的多重耐药率为63.2%。结论安徽猪群中流行的S.suis 2毒力基因的分布特征与国内相似,与国外存在一定差异,CPS、MRP、EPF和SLY是重要的毒力因子;S.suis 2的溶血类型与其SLY有关,但sly基因的不完整性并不一定改变S.suis 2的溶血性;S.suis 2安徽分离株的多重耐药性严重,耐药谱与其他地区存在一定差异。
- 焦安心许大文赵洪武程谦郑浩马建华魏建忠孙裴李郁
- 关键词：猪2型链球菌安徽分离株毒力基因溶血性耐药性
- 猪呼吸道疾病综合征4种病原菌复合PCR方法的建立及其初步应用被引量：4
- 2013年
- 目的建立检测猪呼吸道疾病综合征(Porcine respiratory disease complex,PRDC)中肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,Mhp)、猪链球菌(Streptococcus suis,SS)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的四重PCR方法。方法根据GenBank中登录的Mhp的P36基因序列设计引物,同时参考文献分别合成SS、HPS和Pm的特异性引物,通过4因素(Taq酶、Mg2+、引物、dNTPs)4水平的L16(44)正交试验优化PCR反应体系,建立检测Mhp、SS、HPS和Pm的四重PCR方法,并进行特异性、敏感性及重复性验证。运用该方法及单一PCR方法,对PRDC猪的鼻腔拭子及肺脏组织样品进行检测,另对肺脏组织样品进行SS、HPS和Pm的常规分离鉴定。结果确立了四重PCR方法最适反应体系及反应条件;应用建立的四重PCR方法在568、294、821和457 bp处均可见与预期相符的特异性条带,8次重复扩增后的电泳结果一致,最低检测限量分别为560、260、280和200 pg,表明该方法特异性、敏感性及重复性较好;PRDC猪的鼻腔拭子及肺脏组织样品的四重PCR方法检测结果与单一PCR方法相比,差异无统计学意义(P>0.05),四重PCR及单一PCR方法的HPS的检出率则显著高于常规细菌分离鉴定(P<0.05)。结论所建立的四重PCR方法,可直接用于临床PRDC 4种病原菌的鉴定,为开展PRDC流行病学调查提供了有效的技术手段。
- 赵洪武李郁孙裴刘文赵东魏建忠
- 关键词：链球菌属多杀性巴氏杆菌聚合酶链反应
- 碳离子辐照对猪链球菌部分生物学特性的影响
- 2015年
- 为了解30 Gy和50 Gy 12C6+离子辐照对猪链球菌部分生物学特性的影响,采用微生物学法和毒理学法检测亲本株和突变株的溶血性、对18种抗生素的敏感性、生物被膜形成能力、表面疏水性及毒力。结果显示,与亲本株相比,30 Gy突变株的溶血性、对抗生素的敏感性、生物被膜形成能力,表面疏水性及毒力无显著差异(p≥0.05);50 Gy突变株对庆大霉素、复方新诺明、链霉素、甲氧苄啶和洁霉素的敏感性差异显著(p≤0.05),但溶血性、生物被膜形成能力、表面疏水性及毒力无显著差异(p≥0.05)。结果表明,30 Gy 12C6+离子辐照不能导致猪链球菌生物学特性显著改变,而50 Gy 12C6+离子辐照猪链球菌能够导致部分突变株对部分抗生素敏感性的显著改变,但不同突变株对不同种类抗生素的敏感性改变不同。
- 陆萍焦安心常沛玺胡步荣付谦孙裴魏建忠李郁
- 关键词：碳离子辐照猪链球菌生物学特性
- 种猪群猪圆环病毒病的净化技术研究被引量：2
- 2015年
- 为探究种猪群猪圆环病毒病(PCVD)的净化控制措施,通过对种猪群实施猪圆环病毒2型(PCV-2)灭活疫苗免疫(基础免疫2次,以后每隔4个月加强免疫1次),检测(基础免疫前、二免后20d和二免后3个月、加强免疫后3个月分别采集前腔静脉血,分离血清,采用ELISA检测PCV-2抗体、猪瘟抗体,PCR方法检测PCV-2核酸),淘汰加强免疫后PCV-2核酸仍为阳性的种猪,结合分析母猪PCV-2疫苗免疫前后繁殖性能的差异。为期1年净化措施实施的结果显示,种猪群的PCV-2核酸阳性率从33.33%显著下降到3.42%,其中后备猪的PCV-2核酸阳性率从39.02%下降到8.57%,种公猪从33.33%下降到0、经产母猪从15.38%下降到1.56%;母猪窝产仔数增加0.52头(P<0.05),窝产活仔数增加0.78头(P<0.01),窝产木乃伊胎数减少0.3头(P<0.01);种猪群猪瘟免疫抗体合格率从53.73%提高到83.49%,平均阻断率从43.31%升高到63.46%,与种猪群PCV-2核酸检测阳性率呈现负相关。结果表明,实施免疫、检测、淘汰措施对于种猪群PCVD的净化成效明显,该技术可为规模化猪场开展PCVD的净化提供科学依据,具有推广应用价值。
- 管亮华耀施雷李郁魏建忠
- 关键词：猪圆环病毒2型种猪免疫猪瘟抗体
- 猪链球菌2型安徽分离株毒力基因cps2J、mrp、epf、sly的检测及其序列分析被引量：3
- 2012年
- 为了解19株猪链球菌2型(S.suis 2)安徽分离株的毒力基因型及毒力基因变异情况,通过PCR扩增S.suis 2毒力基因cps2J、mrp、epf和sly,对这4种毒力基因的扩增片段进行序列测定,并与国内外其他分离株的基因序列进行比较。结果显示,cps2J、mrp、epf和sly基因在19株S.suis 2中的检出率分别为100%、68.4%、68.4%、78.9%;19个受试菌株共分为7个毒力基因型,其中cps2J+/mrp+/epf+/sly+占57.9%,为优势基因型;S.suis 2安徽分离株4种毒力基因的检测序列之间及其与国内其他地区S.suis 2分离株的相应序列同源性均在99.1%以上,与国外S.suis 2分离株的相应序列同源性在87.8%～100%之间;19株cps2J+菌株中有1株菌cps2J基因序列有变异,13株mrp+菌株中有6株菌mrp基因序列发生变异,检测的epf和sly基因序列没有变异。表明cps2J+/mrp+/epf+/sly+是S.suis 2安徽分离株优势毒力基因型,检测的S.suis 2安徽分离株cps2J、epf和sly基因部分序列较保守,mrp基因部分序列存在较大的变异。
- 许大文魏建忠孙裴殷宗俊赵洪武李郁
- 关键词：猪链球菌2型毒力基因
- 猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立被引量：6
- 2012年
- 目的建立基于TaqMan探针的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)荧光定量PCR检测方法。方法根据PCV2 ORF2的相对保守序列,设计两对特异性引物及TaqMan探针,制备重组质粒标准品;优化反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立PCV2 TaqMan荧光定量PCR检测方法,并验证其敏感性、特异性及重复性;用建立的方法对50份临床样本进行检测,并与普通PCR检测结果进行比较。结果重组质粒标准品经PCR及测序鉴定构建正确;建立的定量标准曲线Ct值与模板拷贝数对数之间呈良好的线性关系,相关系数R2为0.993 85;该方法的敏感性为6×101拷贝/μl,比普通PCR高2个数量级;检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪瘟兔化弱毒均无扩增曲线;检测3份PCV2阳性模板的变异系数在0.07%～0.50%之间;临床样本的阳性检出率(64%)明显高于普通PCR(44%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论建立的PCV2 TaqMan荧光定量PCR检测方法具有较高的敏感性、特异性和重复性,适用于临床样本中微量PCV2的快速检测及其组织亲嗜性、细胞培养特性的研究。
- 陈蓉王艳魏建忠刘军军孙裴殷宗俊李郁
- 关键词：猪圆环病毒2型TAQMAN荧光定量PCR
- 猪圆环病毒2型疫苗免疫对母猪繁殖性能及仔猪母源抗体水平的影响被引量：5
- 2012年
- 为了解接种猪圆环病毒2型(PCV-2)疫苗对母猪繁殖性能及其仔猪母源抗体水平的影响,通过对合肥某猪场640头母猪的PCV-2疫苗免疫,统计其免疫前与免疫后各1年的繁殖性能数据,并分析其繁殖性能的差异,同时采用ELISA和PCR方法检测4头免疫母猪所产仔猪不同日龄血清中PCV-2抗体及其核酸。母猪PCV-2疫苗免疫后与免疫前的繁殖性能进行比较显示,窝产仔数和窝产活仔数分别增加0.36头和0.43头,差异极显著(P<0.01);窝产弱仔数减少0.11头,差异显著(P<0.05);仔猪吮初乳后10日龄时抗体水平高于其他检测日龄,至30日龄时迅速下降,之后随着日龄增长母源抗体逐渐下降,各组试验仔猪均未检测到PCV-2核酸。表明母猪接种PCV-2疫苗能显著提高母猪的繁殖性能,并能降低所产仔猪的PCV-2感染,仔猪20日龄左右首免PCV-2疫苗最佳。
- 张毅李郁刘文孙裴魏建忠
- 关键词：猪圆环病毒2型疫苗繁殖性能母源抗体
- 不同基因簇PCV2b安徽株对感染小鼠免疫应答的影响被引量：2
- 2015年
- 为探讨同一基因亚型不同基因簇的猪圆环病毒2型安徽株[PCV2-DY0801(PCV2b-1A)、PCV2-BH0801(PCV2b-1B)、PCV2-XC0801(PCV2b-1C)]对感染小鼠免疫应答的影响,将16只SPF级昆明小鼠随机分为4组,分别接种PCV2-DY0801、PCV2-BH0801、PCV2-XC0801以及PBS,初次感染后第7、14、21和28天采集血液,进行IgG水平、T细胞亚群含量及Th1型和Th2型细胞因子水平的动态检测。结果显示,3株PCV2安徽株感染小鼠后均产生较高水平的IgG,被感染小鼠的外周血中CD4+、CD8+和CD4+CD8+T淋巴细胞的含量显著减少(P<0.05),血清中IL-2、IL-4和IL-10的质量浓度显著升高(P<0.05),其中BH0801组在初次感染后第14天CD4+含量显著低于XC0801组(P<0.05),第21天IgG水平显著高于XC0801组(P<0.05),第14、21天IL-2的质量浓度显著高于XC0801组、DY0801组(P<0.05)。PCV2-BH0801诱导体液免疫反应最强,PCV2-XC0801诱导细胞免疫反应最强,而PCV2-DY0801均居中。结果表明,同一基因亚型不同基因簇的PCV2安徽株对感染小鼠的免疫应答有影响。
- 陆萍童彤王艳魏文涛魏建忠孙裴李郁
- 关键词：猪圆环病毒2型小鼠IGGCD4+T淋巴细胞CD8+T淋巴细胞
