教育部留学回国人员科研启动基金(2008987)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 巢式PCR法检测大鼠卡氏肺孢子虫的敏感性
- 2011年
- 目的探讨mtLSU-巢式PCR法检测大鼠卡氏肺孢子虫的敏感性以及应用于早期检测的可行性。方法大鼠随机分为7组(6组实验组,1组对照组),每组10只,采用地塞米松免疫抑制法诱导实验组大鼠感染肺孢子虫;自第三周开始每周剖杀一组实验鼠,收集第三周至第八周实验组大鼠肺组织(LT)和支气管肺泡灌洗液(BAL)标本,同时采用镜检法和mtLSU-巢式PCR法对大鼠肺组织和肺泡灌洗液标本进行检测。结果采用GMS染色镜检法于第五周开始检出肺孢子虫包囊,第六、七周包囊数最多。而采用mtLSU-巢式PCR法对实验感染大鼠LT和BAL进行检测,卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为第三周100%(10/10)、100%(10/10);第四周100%(10/10)、80%(8/10);第五周100%(10/10)、50%(5/10);第六周90%(9/10)、100%(10/10);第七周100%(10/10)、80%(8/10);第八周100%(8/8)、87.5%(7/8)。结论 mtLSU-巢式PCR法可在无症状的实验大鼠中检出卡氏肺孢子虫并且比镜检法早两周,其敏感性明显高于镜检法。
- 张小娟杨芳芳欧阳颐王鸽林睿黎学铭
- 关键词：卡氏肺孢子虫巢式PCR敏感性
- 巢式PCR早期检测实验大鼠卡氏肺孢子虫被引量：2
- 2011年
- 目的探讨ITS1-5．8S rRNA—ITS2巢式PCR法检测大鼠卡氏肺孢子虫的敏感性及早期检测的评估。方法采用地塞米松免疫抑制法诱导大鼠感染肺孢子虫，大鼠分为7组，6组实验组和1组对照组，每组10只，实验组采用地塞米松免疫抑制法诱导大鼠感染肺孢子虫，对照组则不予激素处理。自诱导开始第3周至第8周每周收集1组实验组大鼠肺组织（1ungtissue，LT）和支气管肺泡灌洗液（bronchoal veolar lavage fluid，BALF）标本，采用ITSl-5．8SrRNA—ITS2巢式PCR法扩增卡氏肺孢子虫ITSI-5．8SrRNA—ITS2，同时采用六亚甲基四胺银（GMS）染色镜检法对第3周到第8周的大鼠肺组织和肺泡灌洗液标本进行检测，并将两种方法进行比较以评估巢式PCR技术的敏感性。结果采用ITSI-5，8SrRNA—ITS2巢式PCR法对实验感染卡氏肺孢子虫的大鼠¨和BALF进行检测，卡氏肺孢子虫DNA阳性率依次为第3周20％（2／10）、0（0／10），第4周70％（7／10）、10％（1／10），第5周90％（9／10）、30％（3／10），第6周90％（9／10）、80％（8／10），第7周100％（10／10）、80％（8／10），第8周63％（5／8）、63％（5／8）。而GMS染色镜检法仅于第5周开始检出卡氏肺孢子虫包囊，第6、7周包囊数最多。实验组大鼠诱导后的前4周无明显卡氏肺孢子虫肺炎体征，第5周后症状趋于明显。结论ITSI-5．8SrRNA-ITS2巢式PCR法敏感性高，可在第3周后和无症状阶段实验大鼠中检出卡氏肺孢子虫，并且比镜检法早两周。
- 张小娟杨芳芳欧阳颐王鸽黎学铭林睿
- 关键词：卡氏肺孢子虫内转录间隔区巢式PCR
- mtLSU-巢式PCR检测实验大鼠卡氏肺孢子虫的实验研究
- 2011年
- 目的对mtLSU-巢式PCR方法检测大鼠卡氏肺孢子虫的应用价值以及基因序列进行评价。方法采用地塞米松免疫抑制法诱导大鼠感染肺孢子虫;实验组10只,对照组1只;诱导至第7周时收集实验组及对照组大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,采用mtLSU-巢式PCR方法对人源与鼠源肺孢子虫共有的基因进行扩增和序列测定,同时采用镜检法对实验组大鼠肺组织和肺泡灌洗液标本进行检测,评估两种方法的敏感性。结果采用mtLSU-巢式PCR方法对实验感染大鼠肺组织和BAL进行检测,卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为100%(10/10)、90%(9/10)。而GMS染色镜检法检测的阳性率分别为80%(8/10)、60%(6/10)。所测Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU基因序列长度为155bp,与GenBank的大鼠源肺孢子虫(U20170)及人源肺孢子虫(DQ473446)同源性均为100%(154/154、155/155)。结论 mtLSU-巢式PCR方法应用于大鼠卡氏肺孢子虫检测敏感性高,特异性强;获得与人源耶氏肺孢子虫相同的Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU的基因序列。
- 张小娟杨芳芳欧阳颐王鸽黎学铭林睿
- 关键词：卡氏肺孢子虫巢式PCR基因序列
