广东省自然科学基金(9251008901000017)
- 作品数：8 被引量：41H指数：4
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- 相关机构：中山大学附属第一医院广州中大医疗器械有限公司更多>>
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- 富血小板血浆对大鼠许旺细胞生物学行为的影响被引量：8
- 2013年
- 目的观察不同浓度的富血小板血浆（PRP）对体外培养的许旺细胞（SCs）增殖、分泌功能及迁移的影响，探讨其促进周围神经再生的可能作用机制。方法从SD大鼠心脏穿刺取血，利用二次离心法制备PRP，对全血和PRP中血小板计数和血小板源性生长因子BB（PDGF—BB）和转化生长因子（TGF-B1）浓度测定；取3～5d龄的大鼠坐骨神经培养纯化SCs，将P1细胞分为实验组与对照组分别进行处理，实验组以含40．0％、20．0％、10．0％、5．0％和2．5％PRP的条件培养液干预，并设立空白对照组。于干预不同时间点采用CCK-8法测定SCs增殖活性情况，用实时荧光定量PCR方法检测细胞神经生长因子（NGF）和胶质细胞源神经营养因子（GDNF）mRNA表达的变化，ELISA检测SCs分泌NGF和GDNF的水平，Transwell小室检测各组SCs的迁移能力。结果PRP血小板回收率达65％，PDGF．BB和TGF-β1浓度明显高于血清（P〈0．01）；与空白对照组相比，低于20．0％浓度的PRP呈浓度依赖性促进SCs增殖和迁移，而40．0％浓度组细胞增殖和迁移受到抑制；SCs分泌的NGF和GDNF和其mRNA表达均较对照组明显增加，同样在低于20．0％浓度的范围内呈现量效关系，40．0％浓度组则显示抑制作用。结论PRP在适当浓度范围可以促进SCs的分裂增殖，合成分泌NGF和GDNF以及迁移的能力，具有潜在的促周围神经再生的作用。
- 郑灿镔朱庆棠刘小林黄喜军何彩凤江丽周翔朱昭炜
- 关键词：富血小板血浆神经生长因子许旺细胞细胞迁移周围神经
- 周围神经缺损修复材料临床适应证的考虑被引量：24
- 2013年
- 由于严重创伤、肿瘤切除、先天性畸形等原因造成的周围神经缺损的修复与重建是当前周围神经外科领域的一大难题。随着社会经济的快速发展、机械化程度的增加、交通日益发达和人口流动倍增，周围神经的损伤急速上升。据统计，欧洲每年有约30万周围神经损伤患者，美国有将近20万，我国也有此类残疾患者可能达数百万。
- 朱庆棠郑灿镔刘小林
- 关键词：周围神经缺损临床适应证先天性畸形严重创伤肿瘤切除外科领域
- 复合异体脂肪干细胞的异种去细胞神经修复猕猴周围神经缺损被引量：8
- 2014年
- 目的 探讨复合异体脂肪干细胞（ADSCs）的去细胞异种神经修复猕猴桡神经缺损的效果.方法 于2010年3月至2012年5月,从雄性猕猴腘窝脂肪组织中分离出ADSCs,采用显微注射法将ADSCs种植在经化学萃取的去细胞猪胫神经上.用10只健康雌性猕猴,制成15侧上臂桡神经25 mm缺损模型,分为A、B、C三组（5侧/组）,分别用复合了雄性猕猴ADSCs的去细胞猪胫神经、未复合ADSCs的去细胞猪胫神经、自体神经进行修复.术后5个月进行伸腕功能评定及电生理学检测,并取材作神经移植体和伸腕肌组织学检查. 结果 术后5个月A、B、C三组伸腕角度恢复率分别为（80.53±15.30）％、（69.06±7.02）％和（99.91±22.16）％,电生理学检测显示桡神经恢复电传导功能,组织学检查显示移植体内有再生神经纤维通过,各项检测指标显示A组的修复效果优于B组,而C组则优于A组和B组,但各组的差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 去细胞猪胫神经能有效修复猕猴25 mm长的桡神经缺损,复合异体ADSCs的去细胞猪胫神经其修复效果可能更优.
- 黄喜军朱庆棠江丽郑灿镔朱昭炜路庆森许银峰顾立强刘小林
- 关键词：去细胞神经脂肪干细胞异种移植猕猴
- PKH26标记法在组织工程神经种子细胞体内示踪中的应用被引量：2
- 2010年
- 目的探讨PKH26标记骨髓间充质干细胞（BMSCs）的效果及其应用于组织工程神经种子细胞体内示踪实验的可行性。方法取Wistar大鼠股骨和胫骨的骨髓，用全骨髓贴壁的方法分离、培养BMSCs。用PKH26荧光染料进行标记，荧光显微镜下观察标记效果，流式细胞仪检测荧光标记率，MTT法测定细胞的活性，体外成脂和成骨诱导鉴定细胞的分化能力，并与未标记细胞进行比较；使用显微注射的方法将BMSCs植入去细胞神经支架内制备成组织工程神经，于体外培养3d、5d,7d、14d，行组织切片，观察BMSCs在支架内存活、迁移的情况。另外．将体外构建组织工程神经桥接Wistar大鼠坐骨神经15mm的缺损，于术后1周、d周、6周、8周取出移植物，行组织切片观察植入的BMSCs在支架内的存活情况。结果PKH26能有效地标记BMSCs，标记率达95％以上．标记后细胞活性及诱导成骨成脂分化能力与未标记细胞无明显差异。在体外培养的环境下，BMSCs能在去细胞神经支架里粘附生长，并沿着支架迁移；在体内外周围神经再生的微环境下，BMSCs可存活8周以上。结论PKH26荧光染料标记法是一种有效的标记BMSCs的方法．可用于组织工程神经种子细胞体内示踪的研究。
- 黎建文李智勇朱庆棠胡军何彩凤刘小林江丽
- 关键词：周围神经
- 去细胞异种神经复合同种异体脂肪干细胞修复猕猴周围神经缺损的免疫反应研究被引量：6
- 2012年
- 目的观察去细胞异种神经复合同种异体脂肪干细胞修复猕猴周围神经缺损后的全身及局部免疫排斥反应,评价该修复材料的安全性。方法健康成年雄性长白猪1只,体重48 kg,取胫神经制备去细胞异种神经;健康成年雄性猕猴1只,体重4.5 kg,分离培养脂肪干细胞;健康成年雌性猕猴10只,体重3～5 kg,制备25 mm长桡神经缺损动物模型,随机分为复合细胞组和无细胞组(n=5),前者采用去细胞异种神经复合第3代脂肪干细胞移植修复,后者采用去细胞异种神经移植修复。于术前及术后14、60、90 d抽取外周静脉血行淋巴细胞分析;术后5个月取材观察移植物组织免疫反应和神经再生情况,并与自体神经移植组作比较。结果复合细胞组与无细胞组术前及术后各时间点外周静脉血淋巴细胞数量、T淋巴细胞百分率及其数量、CD8+T淋巴细胞百分率、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);术后14 d,复合细胞组CD4+T淋巴细胞百分率低于其余时间点,差异有统计学意义(P<0.05);同一时间点两组间比较,除术后14 d复合细胞组CD4+T淋巴细胞百分率低于无细胞组,差异有统计学意义(P<0.05)外,其余各时间点各指标组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后5个月,去细胞异种神经与周围组织有轻度粘连,神经外膜较自体神经厚,未见组织坏死、纤维瘢痕形成,移植物内见再生神经纤维,复合细胞组、无细胞组均有稀疏的CD3+、CD4+、CD8+、CD68+、CD163+T淋巴细胞散在分布,细胞浸润情况与自体神经移植组类似。结论去细胞异种神经移植修复猕猴周围神经缺损后未产生全身及局部免疫排斥反应;复合同种异体脂肪干细胞移植后也未发现免疫排斥反应,且术后早期可能抑制CD4+T淋巴细胞增殖。
- 黄喜军朱庆棠江丽郑灿镔朱昭炜路庆森许银峰顾立强刘小林
- 关键词：脂肪干细胞异种移植同种异体移植猕猴
- 灵长类动物桡神经缺损修复模型的功能学评价
- 2013年
- 目的 探讨灵长类动物桡神经缺损修复后功能学的评价方法.方法 解剖3只猕猴桡神经,建立5只猕猴双侧桡神经25 mm缺损的模型,分别用自体神经（A组）及去细胞猪神经（B组）桥接神经缺损（5侧/组）.术后观察猕猴一般情况及伸腕活动;于术前、术后1周、术后5个月,诱导、测量并计算术后累积最大伸腕角度（DEmax）和伸腕角度恢复率（R）以评价神经功能的修复效果.结果 桡神经在桡侧腕长伸肌第一肌支发出点以近可显露长度为52 ～ 62 mm,直径为3.3～4.1 mm;术后猕猴即时出现垂腕、垂指畸形,一般情况好,术后5个月A、B组DEmax和R的均值分别为120°、96°和99％、69％.结论 该模型安全、简便,可动态、定量评价神经功能恢复情况.
- 黄喜军朱庆棠江丽郑灿镔朱昭炜胡军何波路庆森许银峰
- 关键词：周围神经损伤神经再生猕猴
- 猕猴脂肪干细胞体外多向分化潜能的实验研究
- 2014年
- 目的探讨猕猴来源的脂肪干细胞（ADSCs）的分离和培养方法及在体外多向分化的能力。方法健康成年雄性猕猴1只，年龄4岁，体质量4．5妇。从该猕猴胭窝深部脂肪组织中分离出成纤维样细胞，观察其生长特性，采用流式细胞仪检测其细胞表面标志，利用相应的诱导液分别诱导其向成骨细胞、脂肪细胞、施万细胞方向分化；观察诱导后细胞的形态变化，并分别用茜素红染色、油红0染色及细胞免疫荧光法检测诱导效果。结果猕猴脂肪组织分离、培养出的成纤维样细胞增殖迅速；细胞表面标志CD34、CD14、CD71、CD106、CD117、CD31、CD45、CD80、CD86及人白细胞DR抗原呈阴性表达；CD29、CD105、CD73、CD90呈阳性表达。在相应的诱导体系下可向成骨细胞、脂肪细胞、施万细胞分化，其中成脂诱导率为47．9％～61．5％（平均54．7％）；成施万细胞诱导后ADSCs胞体呈细小梭形，伸出2—3条细长突起；高表达神经胶质细胞标志蛋白S-100和胶质纤维性酸性蛋白质，平均诱导率分别为66．5％和60．6％，双重表达率平均为41．2％。结论从猕猴脂肪组织中可以分离并培养出具有较强的自我更新及多向分化潜能的ADSCs，在体外诱导条件下能分化为类施万细胞。
- 黄喜军朱庆棠江丽何彩凤郑灿镔刘小林
- 关键词：干细胞细胞分化猕猴属
- 猪与人去细胞神经结构与成分的对比研究被引量：2
- 2011年
- 目的 研究猪与人的周围神经脱细胞处理后其结构与成分的差别,为以猪去细胞神经替代人去细胞神经用于修复神经缺损作前期探索.方法 取健康成年猪和下肢截肢患者的胫神经,用化学去垢剂按一定程序进行脱细胞处理.通过大体观察、HE染色、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学染色和透射电镜检查,比较猪与人的周围神经去细胞处理前后其结构、许旺细胞与轴突标志蛋白以及细胞外基质的变化.结果 经脱细胞处理后,猪与人的神经结构均略变疏松,仍保留较好的弹性和伸展性.显微镜下观察,两者均未见细胞或其碎屑残留,髓鞘消失,纤维性支架结构保持良好,S-100蛋白和神经丝蛋白（neurofilament,NF）的表达较处理前显著减弱,而层粘蛋白（laminin,LN）的表达无显著变化,神经基底膜管和神经组织的支持结构保留完好.与人去细胞神经比较,猪去细胞神经结构更疏松,神经束间细胞间质更丰富,但成分差异无显著性.结论 猪去细胞神经与人去细胞神经的结构和成分相近,可能取代人去细胞神经用于修复神经缺损.
- 何彩凤朱庆棠江丽胡军吴捷欣黎建文杨俐敏刘小林顾立强朱家恺
- 关键词：周围神经化学萃取组织学
