教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-05-0684)
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
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- 原发性先天性青光眼CYP1B1基因新变异被引量：4
- 2009年
- 目的探讨CYP1B1基因变异在湖南地区原发性先天性青光眼患者中的分布。方法病例对照研究。收集来自湖南地区的13例原发性先天性青光眼患者的临床资料进行分析，对13例患者的CYP1B1基因编码外显子进行直接测序和聚合酶链反应一限制性内切酶技术检测。结果13例原发性先天性青光眼患者中，有1例发现一种基因新突变（c．C319G，L107V），是位于外显子2的错义突变。100例正常人中未见L107V突变。同时发现已报道的4种单核苷酸多态位点，分别为R48G、A119S、V432L、D449D。结论CYP1B1基因L107V突变可能是导致湖南地区原发性先天性青光眼患者的致病原因之一。
- 黄菊芳周瑾王慧陈旦曾乐平童建斌夏晓波胡正茂
- 关键词：青光眼突变
- 转化生长因子α对鼠视网膜Muller细胞谷氨酸转运体调控作用的研究被引量：4
- 2008年
- 目的 观察转化生长因子α（TGFα）对鼠视网膜Muller细胞谷氨酸转运体（GLAST）mRNA、蛋白质表达及摄取活性的调控作用。方法取出生后7～10d的新生昆明小鼠视网膜组织，体外进行Muller细胞的培养。同一原代细胞的第3～4代细胞培养后随机分为2组：①TGFα干预组：分别加入浓度为50、75、125、150ng／ml的TGFα，每种浓度3孔；②对照组：仍用含20％胎牛血清的Dulbeccon改良Eagle培养基培养。采用L-3H-谷氨酸摄取分析方法观察不同浓度TGFa对Muller细胞GLAST摄取活性的影响；逆转录聚合酶链反应方法分析MOiler细胞GLAST mRNA表达的差异；免疫组织化学染色方法检测Muller细胞GLAST蛋白质表达的变化。结果随着TGFα浓度的增加，L-3H-谷氨酸的摄取量及GLAST mRNA表达量均逐渐增加，TGFα浓度为125ng／ml时，L-3H-谷氨酸的摄取量达到最大值，为对照组的266％，同时GLAST mRNA表达量也达到最大值，为对照组的近4倍。免疫组织化学染色显示当TGFα浓度为125ng／ml时，干预组Muller细胞内的GLAST蛋白表达量明显高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论TGFα可通过上调GLAST mRNA和蛋白质的表达增加视网膜Muller细胞谷氨酸转运体GLAST的摄取活性。
- 曾琦夏晓波
- 关键词：MULLER细胞
- 脑源性神经营养因子对鼠视网膜Müller细胞GLAST蛋白表达及功能的调控
- 2011年
- 目的 研究脑源性神经营养因子（BDNF）对鼠视网膜Müller细胞L-谷氨酸/L-天门冬氨酸转运体（GLAST）蛋白表达及功能的调控作用.方法 实验研究.取出生3～7 d的新生昆明小鼠视网膜组织进行Müller细胞培养,取传代后第3代Müller细胞进行后续试验.实验分为BDNF干预组和空白对照组：BDNF干预组小鼠视网膜Müller细胞分别加入50、75、100、125和150 ng/ml的BDNF培养24 h：空白对照组培养的Müller细胞不加BDNF.采用Western blot方法检测Müller细胞GLAST蛋白的表达.采用L-[3,4-H3]-谷氨酸检测100 ng/ml的BDNF干预组与空白对照组Müller细胞对谷氨酸的摄取功能的差异.对各组视网膜Müller细胞GLAST蛋白表达水平的比较采用单因素方差分析,100ng/ml的BDNF干预组与空白对照组对谷氨酸摄取量的比较采用独立样本t检验.结果 Western blot检测结果显示,空白对照组GLAST蛋白的相对表达量为0.151±0.025,50、75、100、125和150 ng/ml的BDNF干预组蛋白相对表达量分别为0.331±0.076、0.413±0.110、0.497±0.080、0.411±0.072、0.319±0.084,不同浓度的BDNF均能上调GLAST蛋白的表达水平（F=6.793,P=0.003）.当BDNF浓度为100 ng/ml时,CLAST蛋白表达量最大.100 ng/ml的BDNF组与空白对照组对谷氨酸的摄取量分别为（81 213±5982）和（68 743±2688）cpm/（mg·ml）,100 ng/ml的BDNF组能够增加Müller细胞对谷氨酸的摄取,两组差异有统计学意义（t=6.462,P=0.023）.结论 BDNF能够上调GLAST蛋白的表达,并增加细胞对谷氨酸的摄取.
- 戴敏夏晓波
- 关键词：脑源性神经营养因子谷氨酸转运体谷氨酸
- 缺氧对鼠视网膜Müller细胞GLAST和GS表达及功能的影响被引量：1
- 2011年
- 研究了缺氧对鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体(L-glutamate/L-aspartate transporter,GLAST)和谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)表达的影响,及对谷氨酸摄取的作用.采用出生3～7天的小鼠视网膜组织进行Müller细胞培养,采用125μmol/L的氯化钴(CoCl2)溶液分别进行缺氧干预6、12、24、48和72 h,不加CoCl2溶液培养的Müller细胞为正常对照.采用RT-PCR法、Western blot法和免疫细胞化学染色法检测GLAST和GS的表达,并检测谷氨酸摄取及细胞凋亡情况.结果显示,缺氧早期GLAST表达较正常对照组增强(P<0.001),CoCl2溶液干预12 h后达到最强(P<0.05),之后逐渐降低.CoCl2溶液干预72 h后GLAST表达与正常对照组相比无明显差异(P>0.05).而缺氧也使GS的表达较正常对照组增加(P<0.001),CoCl2溶液干预48 h后GS表达最强(P<0.001),之后开始下降.缺氧促进Müller细胞对谷氨酸的摄取,CoCl2溶液干预48 h后L-[3,4-3H]-谷氨酸的摄取量最大(P<0.005),之后开始下降.CoCl2溶液干预后,Müller细胞死亡数较正常对照组无明显差异(P>0.05).结果表明,在一定时间范围内缺氧能够增强Müller细胞GLAST及GS的表达,增加谷氨酸的摄取.但持续缺氧最终会引起Müller细胞功能失代偿,从而导致谷氨酸的代谢能力降低.
- 戴敏夏晓波
- 关键词：缺氧视网膜MULLER细胞谷氨酸转运体谷氨酰胺合成酶谷氨酸
- 脑源性神经营养因子对小鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体表达的调控被引量：1
- 2010年
- 谷氨酸是视网膜主要的兴奋性神经递质,然而在病理性浓度升高时,对视网膜神经节细胞（RGC）具有兴奋毒性作用.L-谷氨酸/L-天门冬氨酸转运体（GLAST）是表达在视网膜Müller细胞上最主要的谷氨酸转运体,在维持谷氨酸平衡和保护RGC免受谷氨酸兴奋毒性作用中发挥着重要作用.
- 戴敏夏晓波曾琦
- 关键词：脑源性神经营养因子MÜLLER细胞
- 谷氨酸诱导对鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体的调控被引量：3
- 2008年
- 目的研究底物谷氨酸对视网膜Müller细胞L-谷氨酸和L-天门冬氨酸转运体（GLAST）的调控作用。方法采用L^-3H-谷氨酸摄取分析方法研究底物谷氨酸诱导对GLAST活性影响。并提取细胞总蛋白，采用免疫印迹法分析视网膜Müller细胞GLAST蛋白质表达量的差异。结果在培养的鼠视网膜Müiler细胞中加入不同浓度的谷氨酸培养30min后，发现随着底物谷氨酸浓度增加（5～1000μmol／L），L^-3H-谷氨酸的摄取量增加。平均摄取量分别为（3100．7±86．8）、（3247．0±84．2）、（3840．0±118．6）、（4493．7±229．2）、（6429．0±81．5）、（6305．3±31．0）、（6346．3±36．2）cpm·mg^-1·ml^-1。当谷氨酸浓度为100μmol／L时，L^-3H-谷氨酸摄取量最大。随着谷氨酸浓度的增加，谷氨酸转运体GLAST蛋白质的表达量增加，当谷氨酸浓度为100μmol／L时，GLAST蛋白质表达量达最大。结论谷氨酸的底物诱导可增加GLAST摄取活性，且上调GLAST蛋白质的表达。
- 夏晓波周霞曾琦
- 关键词：视网膜神经胶质生物转运谷氨酸细胞
- 脂质体介导增强型绿色荧光蛋白基因在鼠视网膜Müller细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的研究脂质体介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因对体外培养的鼠视网膜Müller细胞转染的有效性及安全性。方法采用视网膜组织块法培养鼠视网膜Müller细胞,振荡法分离纯化细胞,并对其进行免疫细胞化学鉴定。用阳离子脂质体Lipofectamine 2000负载pEGFP-N1质粒转染Müller细胞,荧光显微镜检测转染后12、24、48、72h的转染效率。台盼蓝排斥实验检测转染和未转染细胞的活力,明确脂质体Lipofectamine 2000对Müller细胞的毒性作用。结果成功培养视网膜Müller细胞,传代后90%以上的细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色阳性。Lipofectamine 2000介导质粒pEGFP-N1转染Müller细胞后12、24、48、72h的转染效率分别为(9.7±1.9)%、(18.1±16)%、(17.2±2.5)%、(16.9±1.7)%。台盼蓝排斥实验显示Lipofectamine 2000转染前后活细胞率分别为(98.2±5.6)%、(96.1±6.2)%。结论脂质体Lipofectamine 2000可安全有效地介导Müller细胞的转染,为进一步明确Müller细胞的病理、生理功能及靶向Müller细胞的基因治疗提供了新的手段。
- 熊思齐夏晓波
- 关键词：MÜLLER细胞脂质体转染
- 体外诱导大鼠视网膜Müller细胞向神经节细胞定向分化的研究被引量：5
- 2010年
- 目的 研究鼠视网膜Müller细胞经体外条件培养基诱导后去分化为神经干细胞及进一步定向分化成神经节样细胞的特性.方法 实验研究.体外培养出生后7-10 d的Sprague Dawley大鼠视网膜Müller细胞,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法及免疫荧光染色法鉴定Müller细胞纯度.取培养的第3或4代Müller细胞,用含有N2、碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的Delbeccon＇s modified Eagle＇s medium（DMEM）-F12干细胞条件培养基培养3～5 d后,再用含5%胎牛血清、脑源性神经营养因子和视黄酸的DMEM培养基诱导分化7～10 d,采用免疫荧光染色法分别鉴定去分化及再诱导分化后的细胞.结果 RT-PCR及免疫荧光染色结果显示,分离培养的视网膜Müller细胞纯度可达（95.17±2.68）%以上.干细胞条件培养基培养3～5 d后,大部分Müller细胞汇集形成细胞球,经免疫荧光染色法鉴定,显示细胞球内（95.26 ±1.35）%以上的细胞Nestin表达阳性,（90.33±4.12）%以上细胞BrdU表达阳性.将这些细胞球进一步诱导分化后,可见细胞球内细胞可向外扩展、铺开,分化出形态各异的细胞,其中约（21.14±1.49）%细胞表达神经节细胞特异性标记物Thy1.1阳性.结论 成年啮齿动物视网膜Müller细胞经体外条件培养基诱导后,可以产生具有增殖能力和分化潜能的神经干细胞,并可进一步定向分化为神经节样细胞,这为干细胞研究和视神经再生治疗等提供了新的方法和手段.
- 曾琦夏晓波
- 关键词：视网膜视网膜神经节细胞细胞分化细胞
