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X盒结合蛋白1-u的原核表达及纯化: 2009年; 目的构建X盒结合蛋白1-u(XBP1-u)基因原核表达质粒,表达并纯化XBP1-u蛋白。方法利用RT-PCR技术从肝癌细胞HepG2中扩增XBP1-u基因,先插入中间载体pGEM-Teasy,再将其克隆至原核表达载体pET32a,构建重组原核表达质粒pET32a-XBP1-u,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定。结果测序分析证实,克隆入pET32a的XBP1-u序列与GenBank中登录的XBP1-ucDNA序列一致。IPTG的最佳诱导浓度为0.5mmol/L,最佳诱导时间为6h。目的蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为33000。纯化的蛋白经SDS-PAGE分析显示单一条带,且具有良好的反应原性。结论已成功构建了XBP1-u基因原核表达质粒,表达并纯化了XBP1-u蛋白,为XBP1-u在肿瘤发病中的作用机制及在应激性疾病临床治疗中的研究奠定了基础。; 李婧林建炜张静郭风劲; 关键词：原核表达纯化

内质网应激反应时IRE1-依赖性XBP1剪接机制被引量：10: 2008年; 在哺乳动物细胞,X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)是一种具有重要作用的蛋白质。哺乳动物细胞中,当未折叠蛋白质在内质网蓄积时会激活一种细胞内信号转导系统,即未折叠蛋白质反应(UPR)。哺乳动物细胞定位于内质网膜的IRE1α,可通过二聚化而激活其自身的蛋白激酶及核糖核酸酶活性,从而部分地转导UPR信号。活化的IRE1α在XBP1 mRNA的两个位点对其进行切割反应,诱导一种非传统剪接反应。这种剪接反应会产生一种功能性XBP1转录因子,可作为内质网应激反应时的传感器。同时,在内质网应激反应时还有另一种转录激活因子6(ATF6)蛋白酶解系统发挥作用。; 李婧郭风劲

人类X盒结合蛋白1的融合表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：2: 2009年; 目的:将以构建的未剪接型X盒结合蛋白1(XBP1u)的原核表达,纯化及人XBP1多克隆抗体的制备.方法:重组质粒pET32a-XBP1u转化入宿主菌E.coliBL2l(DE3),在IPTG诱导下表达,经SDS-PAGE鉴定正确后,用Ni2+-NTA柱式亲和层析法纯化蛋白,将纯化后的目的蛋白经透析袋复性后进行蛋白质定量,再以此蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,末次免疫后心脏取血,采用ELISA法检测抗血清效价;免疫印迹和免疫组化法检测兔抗XBP1u血清的特异性.结果:XBP1u蛋白为包涵体表达,包涵体裂解后经过纯化、复性进行免疫,得到抗血清的效价大于1∶64000,免疫印迹结果出现特异Mr33×103XBP1u条带,免疫组化法在兔肝细胞中成功检测到XBP1u的表达.结论:成功表达和纯化人XBP1u蛋白,并得到高特异性、高效价兔抗XBP1u多克隆抗体.; 林建炜李婧刘平郭风劲; 关键词：效价纯化多克隆抗体免疫印迹

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重庆市教委科研基金(KJ070314)