国家自然科学基金(31200661)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 过表达CD133对脑胶质瘤U251细胞生物学行为的影响
- 2013年
- 目的:构建稳定表达人CD133基因的脑胶质瘤U251细胞株,并探讨CD133对U251细胞生物学行为的影响。方法:将人CD133全长cDNA构建入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term,包装成逆转录病毒pEGZ-Term-CD133,进而感染脑胶质瘤U251细胞株。流式细胞术及Real-time PCR检测感染后U251细胞CD133分子的表达。细胞计数法、神经球形成实验观察CD133过表达对U251细胞体外的增殖和神经球形成的影响。裸鼠皮下成瘤法检测感染后U251细胞的体内致瘤性。结果:成功构建pEGZ-Term-CD133逆转录病毒表达载体,并获得稳定表达CD133的U251细胞。相比U251-mock、U251细胞,U251-CD133细胞高表达CD133 mRNA[(7 400.2±5 003.4)vs(2.0±1.1)、(1.0±2.2),均P=0.0007)和蛋白。感染pEGZ-Term-CD133对U251细胞的体外增殖并无影响(P>0.05);但在无血清神经干细胞培养条件下,U251-CD133细胞所形成的神经球数量显著高于U251-mock和U251细胞[(34.0±7.5)vs(14.6±2.3)、(11.5±1.3)个,均P<0.01]。接种量为1×105个细胞时,U251-CD133细胞在裸鼠体内的成瘤时间(32 d)少于U251-mock细胞(38 d)、成瘤率更高(100%vs 30%),在第41天时,肿瘤体积显著增大[(180.3±146.8)vs(4.0±0.0)mm3,P=0.003]。结论:CD133分子不影响脑胶质瘤U251细胞的体外增殖,但可促进U251细胞神经球的形成和致瘤性。
- 马晓花葛彦陆婷邓云居颂光张学光
- 关键词：CD133脑胶质瘤U251细胞逆转录病毒致瘤性
- Rspo1基因转染间充质干细胞株的构建及生物学活性鉴定
- 2013年
- 目的：构建稳定表达Rspo1的基因转染间充质干细胞株。方法将人Rspo1全长cDNA重组入逆转录病毒载体pEGZ-Term，通过与辅助病毒载体共转染293T细胞，包装为具有感染力的完整重组病毒载体，收集培养上清感染间充质干细胞C3H10 T1/2细胞株，筛选获得G418抗性的基因转染细胞，通过RT-PCR与流式细胞术检测感染后C3H10 T1/2细胞Rspo1分子的表达，并采用细胞计数法观察其上清对SW480结肠癌细胞增殖能力的影响。结果成功构建pEGZ-Term/Rspo1逆转录病毒表达载体，获得了稳定表达人Rspo1的基因转染细胞株C3H10/Rspo1，该细胞株上清能促进SW480结肠癌细胞增殖。结论建立了稳定表达Rspo1的基因转染间充质干细胞株，为进一步利用Rspo1和间充质干细胞靶向作用于肠道干细胞救治肠上皮损伤的研究奠定了基础。
- 陆婷葛彦邓云陈伟宋莉曹莎莎居颂文居颂光
- 关键词：间充质干细胞基因转染细胞
