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转基因防龋生菜叶片转化体系的优化被引量：9: 2012年; 目的:优化生菜的基因转化系统,为下一步防龋用转基因植物表达载体质粒转化生菜工作提供实验基础。方法:以6种不同的生菜种子为试材,以1/2 MS为基础培养基,经对出芽率比较,苗龄及直接分化培养基的确定以及抗生素敏感性测试,获得正常再生抗性生菜植株。结果:3～4 d的"意大利"生菜子叶在1/2 MS+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA培养基上直接分化率最高,生根培养基为1/2 MS,抗生素巴龙霉素(Paromomycin)选择压浓度为50 mg/L。结论:成功确立了防龋用转基因植物表达载体质粒的生菜叶片转化体系,获得了较高的转化频率。; 陈筑刘建国张燕马欣荣吴家媛唐琳管晓燕顾瑜白国辉; 关键词：生菜叶片植株再生龋病

变异链球菌葡糖基转移酶植物表达质粒p2355-gtfB的构建: 2012年; 目的构建含变异链球菌葡糖基转移酶多个免疫显性抗原表位的植物表达质粒p2355-gtfB,为其转化植物研究奠定物质基础,为可食防龋疫苗研究提供条件。方法以真核表达质粒pcDNA3-gtfB为模板,通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增含编码变异链球菌葡糖基转移酶抗原表位的目的基因gtfB。将回收纯化的PCR产物经T-A克隆技术克隆于中间载体pMD18-T,双酶切鉴定插入方向后,将目的基因从中间载体释放,再克隆至高效的植物表达载体p2355,用电转化法转化根癌农杆菌EHA105,对重组质粒阳性克隆株进行筛选与鉴定。结果通过对重组质粒T-gtfB进行酶切图谱分析,获得2.9 kb和3.7 kb的2个片断,将重组质粒p2355-gtfB进行酶切、PCR及测序分析,显示p2355-gtfB中插入基因长度为3 675 bp,基因序列与双脱氧链终止法的测定结果相同,证明植物表达质粒p2355-gtfB构建成功,开放阅读框架正确。结论本研究成功构建了含变异链球菌多个葡糖基转移酶免疫显性抗原表位编码基因的植物表达质粒p2355-gtfB,为可食性防龋疫苗的研究奠定了基础。; 陈筑刘建国马欣荣张燕唐琳吴家媛张剑; 关键词：防龋疫苗变异链球菌质粒质粒

转基因番茄可食用防龋疫苗免疫BALB/c小鼠的实验研究被引量：4: 2016年; 目的：观察含PAcA/CTB的转基因番茄可食用防龋疫苗的免疫原性及免疫反应性。方法：将18只6-8周龄的雄性BALB/c小鼠,随机分为3组,每周分别灌胃含有PAcA/CTB嵌合蛋白的转基因番茄果汁（实验组）、非转基因番茄果汁（阴性对照组）、灭活全菌疫苗（阳性对照组）。于首次免疫前和免疫后第1、2、3、4周采集血液、唾液样品。ELISA检测其血清和唾液样本中的抗变异链球菌PAcA的IgG、IgA抗体效价。结果：阳性对照组和实验组小鼠血液和唾液中特异性抗体从免疫后1周开始升高,初始免疫后第4周达高峰,分别与阴性对照组比较存在统计学差异（P〈0.05或P〈0.01）。免疫后第2、3、4周阳性对照组与实验组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：转基因番茄所表达的外源目的蛋白具有抗原性,能够诱导BALB/c小鼠产生免疫应答。; 关薇薇顾瑜管晓燕吴家媛白国辉田源陈筑杨德琴刘建国; 关键词：转基因番茄 BALB/C鼠

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贵州省高层次人才科研条件特助经费项目(TZJF--30)