国家自然科学基金(20090964)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
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- 耐热β-1,3-1,4-葡聚糖酶的分子改造研究进展
- 2013年
- 3-葡聚糖酶是一种重要的工业用酶,广泛应用于啤酒和饲料工业中。热稳定性差是目前β-葡聚糖酶在工业应用中普遍存在的问题,构建耐热的β-葡聚糖酶成为近年来的研究热点。本文主要从定点突变、基因缺失、定向进化、构建杂合酶和双功能酶等分子改造方面,综述了改造β-葡聚糖酶的耐热性研究进展。
- 孙军涛肖付刚王洪新吕文平
- 关键词：耐热性分子改造
- 乳糖诱导基因工程菌产β-葡聚糖酶及其酶学特性的研究被引量：3
- 2011年
- 考察了乳糖替代IPTG诱导重组大肠杆菌产β-葡聚糖酶的可行性,分别对乳糖作为诱导剂时的终浓度、诱导时机、诱导时间和温度等方面进行了研究。结果表明,工程菌培养6h(OD600达到0.7左右)后,加入终浓度为10mmol/L的α-乳糖,升温至41℃,诱导6h,酶活可达到830.7U/mL。与IPTG相比,酶活提高2倍左右,发酵周期缩短70%。该酶pH稳定范围较宽,热稳定性良好,在生理温度(70℃左右)下活性高,说明乳糖可以作为基因工程菌的高效诱导剂。
- 戴易兴王洪新吕文平孙军涛秦晓娟
- 关键词：基因工程菌Β-葡聚糖酶乳糖IPTG酶学特性
- 1，3-1，4-β-葡聚糖酶基因克隆表达及其耐热性研究进展被引量：2
- 2010年
- 1,3-1,4-β-葡聚糖酶(E.C.3.2.1.73)是一类降解β-葡聚糖中与β-1,3糖苷键相邻的β-1,4糖苷键的酶,因其主要分解大麦中的1,3-1,4-β-葡聚糖和细菌地衣多糖(又称地衣多糖酶),广泛应用于发酵和饲料工业。但其高温条件下酶活较低,构建高温下活性高的1,3-1,4-β-葡聚糖酶成为近年来研究的热点。文中介绍了1,3-1,4-β-葡聚糖酶的生化特性,综述了1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因的克隆表达、耐热性及其应用方面的研究进展,并对其研究前景进行了展望。
- 孙军涛王洪新吕文平马朝阳戴易兴
- 关键词：基因克隆基因表达耐热性
- β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2011年
- 依据GenBank中收录的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)β-1,3-1,4葡-聚糖酶基因序列,设计特异性引物,以提取的解淀粉芽孢杆菌基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增获得758 bp的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bgl),将此目的基因克隆至pTG19-T Easy载体中,经PCR、限制性内切酶鉴定和克隆片段的序列测定、比较,结果表明该克隆片段扩增准确、可靠。序列比较发现,此片段与解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefacines,M15674)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis,D00518)和地衣芽孢杆菌(B.licheniformis,AY365256)分别有99%、95%和94%的同源性。
- 孙军涛王洪新吕文平马朝阳戴易兴姚红
- 关键词：解淀粉芽孢杆菌Β-1,3-1,4-葡聚糖酶克隆
- 产β-葡聚糖酶基因工程菌发酵条件的优化被引量：2
- 2011年
- 目的以1株酶产量高、耐热性好的重组大肠埃希菌BL21为材料发酵生产β-葡聚糖酶。方法选用麸皮、豆粕等农副产品配制复合碳源、氮源,优化半合成发酵培养基,并通过正常试验确定最佳培养条件。结果研究得到摇瓶水平产β-葡聚糖酶的最佳培养基(g/L)为:麸皮6.7,玉米粉1.7,豆粕13.8,豆粉13.8,酵母粉7.0,NH4Cl 7.0,Na2HPO4.12H2O3.0,MgSO4.7H2O0.75,CaCl20.5,吐温80 0.8%。通过正交试验确定了产酶最佳初始pH为6.2,装样量为35 mL/250 mL,接种量为1%。采用优化后的工艺,在37℃200 r/min培养过夜,经乳糖诱导6 h后,最高酶活可达到830.7 U/mL,是初始产酶条件的3.4倍。结论该半合成培养基在重组大肠埃希菌产β-葡聚糖酶方面具有很大优势。
- 戴易兴王洪新吕文平孙军涛田洪芸
- 关键词：基因工程菌Β-葡聚糖酶培养基
- 耐热β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆、表达及其酶学特性
- 2011年
- 为了获得耐热的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,利用PCR技术从解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)中扩增β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bgl),构建重组表达质粒pET30a-bgl转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷酸(IPTG)诱导表达获得重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶,并对纯化后的β-1,3-1,4-葡聚糖酶进行酶学特性研究。结果表明,摇瓶培养的重组基因工程菌的酶活力为80 U/ml,纯化后酶的比活力为4 969 U/mg,是纯化前的54.6倍;酶的分子量为2.6×104左右,最适温度为50℃,最适pH为6.0,在pH 5.0和pH 8.0之间有很好的稳定性,90℃下酶的半衰期(t1/2)为21 min;该酶对燕麦葡聚糖和地衣多糖有很好的专一性。重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶有较好的耐酸、耐热性,在酿造和饲料加工过程中能够保持较高的活性,具有很好的工业应用价值。
- 孙军涛王洪新吕文平马朝阳娄在祥戴易兴
- 关键词：Β-1,3-1,4-葡聚糖酶克隆纯化酶学特性
