河南省基础与前沿技术研究计划项目(072300430010)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 相关作者：徐廷生雷雪芹韦光辉索剑飞李振红更多>>
- 相关机构：河南科技大学河南科技大学第一附属医院河南科技学院更多>>
- 发文基金：河南省基础与前沿技术研究计划项目河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 牛生长激素BGH基因的克隆及其真核表达载体pEGFP-N1-BGH的构建被引量：1
- 2010年
- 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从11月龄的牛脑垂体组织中扩增出BGH基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-BGH重组质粒。通过PCR扩增、酶切电泳分析和测序的方法对重组DNA进行鉴定,结果表明,成功构建了pEGFP-N1-BGH真核表达载体。
- 韦光辉徐廷生雷雪芹索剑飞
- 关键词：克隆
- 转人抑癌基因p53鸡的研究
- 2019年
- 【目的】探索MAR调控序列对外源人抑癌基因p53在转基因鸡体内整合稳定性的影响,为转基因禽类输卵管生物反应器的建立奠定基础。【方法】利用脂质体包埋法,将pEGFP-N1-p53/MAR重组真核表达载体转染人肝癌细胞(Hep3B),荧光显微镜和透射电镜检测转染含人野生型p53基因的Hep3B细胞形态及超微观结构的变化情况;显微注射法将脂质体介导的重组载体注入鸡X期胚盘的明区和暗区,制备G0代转基因鸡。以EGFP为报告基因,人工授精法制备G1代转基因鸡,对G0代和G1代鸡体外源基因p53进行PCR检测,并对G1代转基因鸡进行小动物活体成像检测。【结果】转染含人p53基因重组载体的Hep3B细胞明显皱缩变圆;微观结构层面,粗面内质网不明显,线粒体肿胀,细胞核中异染色质边集明显,并出现凋亡小体。G0代转基因鸡暗区组孵化率(45%)显著高于明区组孵化率(0)(P<0.05),但均显著低于对照组孵化率(82.5%)(P<0.05);获得4只基因组中含有外源p53基因的G0代转基因鸡,外源基因转染率为22.2%(4/18);获得2只G1代转基因鸡,转基因世代遗传率为3.08%(2/65)。【结论】重组真核表达载体pEGFP-N1-p53/MAR可以促进人肝癌细胞Hep3B的凋亡;脂质体介导的含MAR序列调控元件的pEGFP-N1-p53/MAR质粒,可以提高p53在转基因鸡基因组中的整合稳定性,并可遗传给后代。
- 李鹏姗雷雪芹徐廷生王攀林宋祯李振红史明艳韦光辉张广平李俊堂
- 关键词：HEP3B转基因鸡P53基因转染率
- 河南地方鸡种mtDNA的遗传多样性及其进化关系分析
- 引言我国大约有地方鸡种108个,而在河南省有4个:固始鸡、卢氏鸡、正阳三黄鸡和河南斗鸡。通过对河南4个地方鸡种的mtDNA D-Loop区的序列测定和分析,探讨其遗传多样性和遗传分化关系,为进一步探讨河南地方鸡种的起源进...
- 雷雪芹徐廷生闫义清李振红
- 文献传递
- 人类胰岛素基因的克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 从胎儿胰腺细胞中提取出总RNA作为模板,用特异性引物和RT-PCR法扩增INS基因的cDNA,PCR产物T-A克隆到T载体构建中间重组体pUC57-INS,其测序结果和Genbank公布的序列一致。HindIII和BamHI双酶切pUC57-INS后,将INS基因亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,经PCR扩增、酶切分析和序列测定后证实了重组表达质粒pEGFP-N1-INS构建成功。这将为转人类胰岛素基因动物模型的建立及人类糖尿病的基因治疗奠定必要的基础。
- 索剑飞雷雪芹徐廷生赵绍杰韦光辉
- 关键词：克隆真核表达载体增强型绿色荧光蛋白
- 转基因鸡的染色体核型分析被引量：1
- 2016年
- 为了研究外源基因p53对鸡自身染色体核型是否有影响,以含有外源基因p53的转基因公鸡为试验组,以同种非转基因公鸡作为对照组,通过外周血淋巴细胞培养法和骨髓法,制备了鸡染色体标本片。在油镜下随机选择50个染色体分散良好的细胞,测量染色体的条数、相对长度、臂比值和着丝粒指数,确定并比较转基因鸡和非转基因鸡的染色体形态。研究结果表明：试验组和对照组公鸡的染色体条数均符合2n=78条,均包括10对大染色体和29对微小染色体,且微小染色体基本为端着丝粒染色体。两组的染色体核型均由38对常染色体和1对同配型性染色体ZZ组成,1号染色体、2号染色体和1对性染色体（ZZ）均为中央着丝粒（m）染色体,3号染色体均为端着丝粒（t）染色体,4号染色体均为亚中央着丝粒（sm）染色体,6~10号染色体均为端着丝粒（t）染色体。
- 李鹏姗雷雪芹徐廷生赵淑娟王攀林
- 关键词：转基因鸡染色体核型分析
- 早期肺癌病人血液中p53的克隆及其pEGFP-N1-p53的构建被引量：1
- 2011年
- 首先用RT-PCR方法从早期肺癌病人的外周血中克隆出人抗癌基因p53,经测序确认为野生型后,通过酶切、连接、转化构建出扩增质粒pMD18-T-p53,然后构建出含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达质粒pEGFP-N1-p53。pEGFP-N1-P53经限制性内切酶Hind III和BamH I酶切,酶切产物电泳结果显示的两个片段(1 188 bp和4 695 bp)和实验预期相符,测序结果表明:获得野生型人抗癌基因p53并构建了真核表达载体pEGFP-N1-p53。
- 李振红雷雪芹徐廷生张广平韦光辉索剑飞
- 关键词：克隆增强型绿色荧光蛋白
