国家科技重大专项(2008ZX10003-012)
- 作品数：14 被引量：66H指数：4
- 相关作者：程小星廖明凤陈心春邓少丽庄玉辉更多>>
- 相关机构：解放军第309医院深圳市第三人民医院第三军医大学大坪医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核分枝杆菌PPE19的克隆及其GST融合蛋白的表达和鉴定
- 2012年
- 目的构建结核分枝杆菌PPE19的GST融合蛋白表达载体,并鉴定其在大肠杆菌中的表达。方法以结核杆菌H37Rv基因组为模板,根据PPE19基因序列设计引物,运用PCR的方法获得PPE19基因,并将其克隆到pGEX-kg载体中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性菌落进行质粒的酶切和序列分析;将构建正确的克隆进行诱导表达,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析;用western-blot鉴定融合蛋白的表达。结果正确构建了pGEX-PPE19原核表达载体,载体上基因序列正确;载体能在大肠杆菌中表达分子量约为70 kDa的重组蛋白;该蛋白能与GST抗体结合。结论成功构建了GST-PPE19融合蛋白的表达载体,为进一步进行PPE19蛋白的功能研究奠定了基础。
- 熊志红朱琰李仁德庄玉辉程小星
- 关键词：结核分枝杆菌GST融合蛋白
- MIF水平及MIF-173 G/C多态性与结核病关系研究被引量：3
- 2010年
- 目的研究结核病患者巨噬细胞移动抑制因子(migration inhibitory factor,MIF)表达水平,分析MIF-173G/C多态性与结核杆菌易感性关系。方法选取第三军医大学大坪医院野战外科研究所呼吸科2009年9月至2010年9月结核病患者68例及70例健康体检者,采用RFLP-PCR的方法分析2组MIF-173基因型,ELISA法检测血清中MIF水平。结果结核病组中MIF-173 CC纯合基因型及MIF-173*C等位基因频率较正常对照组明显升高(OR值分别为3.99和1.58,P=0.003和0.02),结核组MIF水平明显高于对照组[(705.21±67.98)pg/mlvs(355.31±57.29)pg/ml,P<0.01],表达水平平均升高1倍左右。结论 MIF-173*C基因型与结核杆菌易感有关,在结核病发病中可能发挥重要作用。
- 邓少丽李艳林陈鸣陈伟黄恒柳夏季张海峰
- 关键词：巨噬细胞移动抑制因子单核苷酸结核
- 结核分枝杆菌PE和PPE家族蛋白抗原性的生物信息学分析被引量：3
- 2010年
- 目的应用生物信息学工具预测结核分枝杆菌PE和PPE家族的分泌性蛋白及分析其抗原性,减少抗原选择的盲目性,增加可靠性。方法应用多种生物信息学工具SignalP、SecretomeP、DAS、NetMHC等分析结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组中PE和PPE家族成员的蛋白序列,找出可能的分泌性蛋白以及其抗原决定簇序列。结果在共168个PE和PPE家族成员中预测出23个可能的分泌性蛋白(PE家族20个,PPE家族3个),其中19个包含有与MHCⅠ和Ⅱ类分子高亲和力的肽段。结论结核分枝杆菌PE、PPE家族蛋白可以通过生物信息学工具分析预测其抗原性,辅助指导实验。
- 樊博王巍程小星
- 关键词：分枝杆菌结核计算生物学抗原变异
- 结核抗原特异性IFN-γ ELISPOT检测技术用于诊断HIV感染者人群中结核潜伏感染的研究被引量：6
- 2009年
- 目的探讨结核分枝杆菌抗原特异性IFN-γ酶联免疫斑点（ELISPOT）检测技术在HIV感染者中用于诊断结核潜伏感染的应用价值。方法运用自行研发的结核分枝杆菌抗原特异性IFN-γ ELISPOT检测方法对110例确诊的HIV感染者及205例HIV阴性健康志愿者的外周血结核特异性IFN-γ释放水平进行检测，并同时进行结核菌素皮肤试验（TST）。结果ELISPOT在HIV感染和HIV／AIDS正在接受抗病毒治疗人群中的阳性率分别为24．5％和29．8％，明显高于HIV阴性健康人群7．3％（P〈0．001）；对多种不同部位多肽抗原刺激以P8．10的敏感性最高，但与其他抗原的差异无统计学意义（P〉0．05）；不同CD4细胞计数水平对ELISPOT检测结果无影响（P〉0．05）；PPD试验在HIV感染人群中的阳性率远远低于ELISPOT检测方法，其差异有统计学意义（P〈0．0001）。结论结核分枝杆菌抗原特异性IFN-γ ELISPOT检测技术在艾滋病合并结核潜伏感染的早期诊断中有很大的应用价值，推荐用于艾滋病合并结核潜伏感染的辅助诊断。
- 王辉谭艳朱秀云廖明凤张洁云刘艳刘水腾张路坤周映刘映霞周伯平陈心春卢洪州
- 关键词：人类免疫缺陷病毒酶联免疫斑点技术结核菌素皮肤试验
- 结核分枝杆菌PE35基因真核表达载体的构建及其表达
- 2011年
- 目的获得带FLAG标签的结核分枝杆菌PE35的真核表达载体,并在293T细胞中检测其表达。方法用PCR方法从质粒上获得PE35基因全长,克隆到pCDNA3-FLAG真核表达载体上;用脂质体介导的基因瞬时转染法,将构建正确的表达载体转染293T细胞;Western-blot法检测细胞中的FLAG融合蛋白的表达。结果酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的FLAG-PE35真核表达载体,并能在真核细胞中表达相对分子量大小相符的重组蛋白。结论成功构建了FLAG-PE35真核表达载体,并在真核细胞中得到表达。为研究PE35蛋白在结核分枝杆菌中的功能研究奠定了基础。
- 熊志红李仁德杨丽萍朱琰程小星
- 关键词：结核分枝杆菌真核表达
- 结核分枝杆菌PE和PPE家族研究进展
- 2011年
- 结核分枝杆菌的PE和PPE家族成员在结核分枝杆菌基因组中约占8％。且PE和PPE多基凶家族为分枝杆菌属所独有，在其他细菌基因组并未发现类似的如此庞大的多基因家族。对其序列结构、表达和调控的初步研究表明其成员可能表达于细胞表面，参与病原体与宿主间的相互作用，并且可能和结核分枝杆菌等致病分枝杆菌的抗原变异相关。一些家族成员蛋白或多肽可以诱导机体对结核分枝杆菌保护性的细胞免疫反应，是候选疫苗的成份。对其家族成员的各种研究在各个实验室里已广泛展开，本文就其研究现状作一综述。
- 樊博王巍程小星
- 关键词：结核分枝杆菌基因组学
- 人MIF基因-794CATT_(5-8)微卫星多态性与结核病易感性关系的研究被引量：1
- 2011年
- 目的:研究巨噬细胞移动抑制因子(Migration inhibitory factor,MIF)-794CATT微卫星多态性与结核病易感性的关系。方法:对151名确诊结核患者及149名健康体检者外周血DNA收集后,通过PCR扩增后对结核病人和正常人MIF基因启动子-794区CATT重复序列进行测序分析。结果:结核病人组MIF基因启动子-794区CATT重复序列拷贝数5/5:12人(7.95%),5/6:21人(13.91%),6/6:38人(25.17%),6/7:53人(35.10%),7/7:15人(9.93%),7/8:12人(7.95%):正常对照组5/5:12人(8.05%),5/6:33人(22.15%),6/6:40人(26.85%),6/7:52人(34.90%),7/7:6人(4.03%),7/8:6人(4.03%)。结核病人组拷贝数7/7和7/8的频率较对照组明显升高。结论:MIF-794CATT重复序列数为7/7和7/8可能与结核易感性相关,并在结核病的发病中起重要作用。
- 李艳林邓少丽曾照芳
- 关键词：巨噬细胞移动抑制因子结核病MIF基因多态性易感性
- 结核病患者T淋巴细胞亚群变化的影响因素分析被引量：8
- 2011年
- 目的:研究结核病患者T淋巴细胞亚群变化的影响因素。方法:用流式细胞术检测46例健康人(A组)、448例结核病患者[其中合并糖尿病的48例(B组),不合并糖尿病的400例(C组)]外周血中CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞比例,并计算CD4+/CD8+之比。根据健康人的CD4+/CD8+比值设定正常值范围。将患者分别按照不同的年龄段进行分组(B1组:≤50岁、B2组:>50岁;C1组:≤30岁、C2组:>30岁且≤50岁、C3组:>50岁),比较各组患者之间的CD4+/CD8+比值。结果:健康对照组CD4+/CD8+比值平均为1.43±0.45;B2、C2组该比值显著高于B1、C1组(P<0.01);B2组该比值显著高于C3组(P=0.011)。结论:CD4+/CD8+比值随年龄增加而升高,而在>50岁患者中,合并糖尿病患者中CD4+/CD8+比值显著增高(CD8+T细胞所占比例相对较低),可能与免疫力下降及易感性增高相关。
- 曹志红王心静程小星
- 关键词：结核病T淋巴细胞亚群糖尿病年龄
- 2011年尿路感染病原菌分布及其耐药性分析被引量：28
- 2012年
- 目的分析医院临床分离尿路感染病原菌的分布及其对抗菌药物的耐药性,指导临床合理用药。方法收集医院2011年1-12月尿路感染患者尿液标本中分离的病原菌308株,对其进行鉴定,并用K-B法对其进行药敏分析。结果尿路感染病原菌以革兰阴性杆菌为主,占63.0%,革兰阳性球菌86株占27.9%,所有分离的病原菌中,居前3位的为大肠埃希菌、粪肠球菌及肺炎克雷伯菌,分别占42.5%、17.2%及8.1%,真菌感染略有下降,占9.1%;部分病原菌出现多药耐药现象。结论革兰阴性杆菌仍然为尿路感染的主要病原菌,分析临床分离病原菌的分布及耐药性对临床合理使用抗菌药物及医院的感染控制具有重要意义。
- 陈栋刘智勇陈亮李泽刘星苗杰夏涵黄庆府伟灵
- 关键词：尿路感染病原菌耐药性
- 结核分枝杆菌PPE60的GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达和鉴定
- 2012年
- 目的构建结核分枝杆菌PPE60的GST融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板,经PCR技术扩增目的基因,将目的基因克隆到pGEX-4T-1载体中,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆。进行质粒的酶切鉴定和序列分析;对重组的大肠杆菌进行诱导表达,SDS-PAGE分析菌体蛋白,凝胶密度扫描分析目的蛋白的表达情况,Western-blot鉴定融合蛋白。结果正确构建了pGEX-PPE60融合表达载体,载体能在大肠杆菌中表达分子量约为70 kDa的重组蛋白,占菌体总蛋白的50%。该融合蛋白能与GST抗体产生阳性反应。结论成功构建了GST-PPE60融合蛋白的表达载体,并能在大肠杆菌中高效表达,为PPE60蛋白的功能研究奠定了基础。
- 熊志红朱琰李仁德庄玉辉程小星
- 关键词：结核分枝杆菌
