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磷酸化蛋白质组学中的分离富集方法研究进展被引量：8: 2009年; 蛋白质的磷酸化是一种可逆性的翻译后修饰,在细胞的增值、分化、信号转导以及转录与翻译调控、蛋白质复合体的形成、蛋白质降解等方面发挥着极为重要的作用。因此磷酸化蛋白的鉴定成为翻译后修饰研究的重要内容。但由于磷酸化蛋白的丰度较低,难以用质谱直接检测。为了解决这个问题,改善质谱对磷酸肽的信号响应,需要对磷酸化蛋白质或磷酸肽进行富集。本文系统地介绍了磷酸化蛋白组学研究中应用较为广泛和最新建立的各种分离富集方法的原理、特点、应用研究进展,包括抗体富集法、激酶特异富集法、亲和富集法、化学修饰法、多种色谱分离富集方法以及MALDI靶盘富集法。; 柏兆方王红霞; 关键词：磷酸化蛋白质组

乙肝表面抗体和抗人红细胞单克隆抗体的F(ab′)_2偶联与鉴定被引量：1: 2010年; 制备人红细胞非凝集型单克隆抗体,形成双功能抗体试剂,用于临床诊断。用人O型红细胞膜蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,制备非凝集型单克隆抗体,通过化学偶联法将非凝集性单克隆抗体和乙肝表面抗体的F(ab′)2片段偶联,制备出双功能抗体,用直接凝集法检测乙肝表面抗原。获得5株分泌非凝集型杂交瘤细胞,利用戊二醛一步法制备出双功能抗体,形成全血凝集检测试剂,并进行了初步鉴定。; 王云龙李兆学李恒思李玉林李忠信孙新城; 关键词：人红细胞单克隆抗体双功能抗体

一种麦芽酸性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究被引量：2: 2011年; 经硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose CL 4B和DEAE-Sepharose CL 4B离子交换柱层析等步骤,从麦芽中分离提纯到一种酸性磷酸酶(ACPase,E.C.3.1.3.2),纯化倍数为33.06,酶液比活为88.27 U/mg.通过动力学方法测得其最适pH为5.4,酸碱稳定性较差,仅在pH6.0左右的缓冲液中较稳定;最适温度为50℃,40℃以下有较好的稳定性;在最适条件下,该酶催化pNPP的米氏常数(K_m)为4.696×10^(-4)mol/L.同时研究了一些金属离子和有机化合物对该酶活性的影响.; 杨彩兰陈巍苟春宝王勇魏炜; 关键词：麦芽酸性磷酸酶分离纯化动力学性质

Flag标签抗原的偶联及其单克隆抗体的应用研究被引量：1: 2011年; 探讨不同免疫原制备抗Flag标签单克隆抗体的效果,以及Flag标签单克隆抗体在融合蛋白纯化中的应用。通过碳化二亚胺分别合成Flag-BSA、Flag-OVA、Flag-KLH3种完全抗原,采用SDS-PAGE和免疫效价对比方法确定偶联效果,选最优者利用杂交瘤技术制备抗Flag标签单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水,并对其纯化、分析和鉴定。制备交联抗Flag-mAb的亲和层析柱,纯化带Flag标签的融合蛋白,经SDS-PAGE电泳后薄层扫描分析纯度,用Western blot检测mAb对融合蛋白的反应性。Flag-KLH偶联效果最好,小鼠免疫效价在104以上,共制备3株抗Flag标签单克隆抗体杂交瘤细胞株2B-7、3C-5、5F-2,分泌抗体均为IgG1类型,与其他融合蛋白标签无交叉反应,经亲和层析纯化融合蛋白纯度达85%,且都可用于融合蛋白的Western blot检测,建立了带Flag标签的融合蛋白纯化和检测方法。成功偶联了Falg完全抗原并制备单克隆抗体,为带Flag标签的融合蛋白纯化提供重要工具。; 王云龙李忠信李恒思李玉林王继美刘旺根李兆学; 关键词：偶联单克隆抗体

一种新的加权功能相似性算法在蛋白质相互作用研究中的应用: 2010年; 基于GO术语衡量基因产物之间的相似性主要是通过语义相似性进行,此类方法主要是先计算GO术语之间的相似性,然后再通过与GO术语相关的基因产物的相似性两步来实现的.第一步GO术语之间的相似性已经有了大量的研究,但是关于第二步的功能相似性研究却很少,针对平均化计算功能相似性的一些缺陷,提出了一种新的加权的功能相似性计算方法——wfcSim方法.应用DIP数据库中人类和线虫的蛋白质相互作用数据,通过ROC曲线对基于平均化、基于最大化、Wang和wfcSim等4种功能相似性研究方法进行了评估,结果表明,与前人通常使用的基于平均的方法相比,wfcSim方法在功能相似性分析方面具有较高的优越性.; 王东须涛李令锦杜林方; 关键词：语义相似性蛋白质相互作用

超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱鉴定重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白被引量：1: 2009年; 采用超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱对重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白进行了分析。样品经胰蛋白酶酶切后,进行液相色谱-串联质谱分析和数据库检索。结果表明,分别有5个和7个肽段匹配于人肿瘤坏死因子受体和人Iggamma-1chainCregion。比对分析表明,重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白中检测到的人IgG的7个肽段完全与人IgG1的序列匹配,与其它3个亚型只有部分肽段匹配。说明重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白一级结构正确,Fc片段确实为人IgG1的Fc片段。; 柏兆方林碧蓉李萍李卫华刘炳玉王红霞; 关键词：电喷雾串联质谱蛋白鉴定

玉米细菌性枯萎病菌改良Dot-ELISA检测研究被引量：11: 2008年; 通过激光切割技术加工出硝酸纤维素膜小圆片并粘贴在已打孔的塑料胶条上,制成包含8个圆片的NCM条(NCM test strip),进一步在NCM条上建立了玉米细菌性枯萎病菌的Dot-ELISA检测方法。研究发现,在NCM圆片上的Dot-ELISA检测灵敏度与点样量密切相关,采用10μL/点的加样量比通常的1μL/点可提高检测灵敏度10-100倍;间接Dot-ELISA的检测灵敏度是双抗夹心dot-ELISA的10倍,该结果进一步在微孔板ELISA的检测中得到证实。玉米细菌性枯萎病菌的改良Dot-ELISA检测是一种较为灵敏、快速、稳定、规范的实验方法,为进一步研究该病菌的微流控芯片斑点免疫检测方法奠定了前期工作基础。; 王岭田世民高海霞邹明强蒋继志崔霞胡秀丽陈立本; 关键词：玉米细菌性枯萎病菌

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“十一五”国家科技支撑计划(2006BAF07B01)