上海市自然科学基金(ZR07150046)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- 超低温冷冻过程引起猪精子产生“似凋亡”变化被引量：5
- 2013年
- 测定超低温冷冻保存过程能否诱导猪冻融精子产生"似凋亡"变化,探讨猪冻融精子活力降低的分子机理。利用Annexin-V/PI及JC-1荧光抗体试剂盒与流式细胞术相结合的方法,检测猪精子冷冻前后及不同培养时间冻融精子质膜中磷脂酰丝氨酸(PS)位置及线粒体膜电位(Δψm)变化;蛋白免疫印迹分析方法测定猪精子Bcl-2、Caspase-9及Caspase-3等"凋亡"因子含量变化。猪精子超低温冷冻保存后活性精子的比例(54.4%)显著低于鲜精组(87.9%)(P<0.05),其中PS移位的精子"似凋亡"比例约为26.8%,同鲜精组(5.6%)相比增加21.2个百分点(P<0.05);降温平衡及冷冻复苏后猪精子线粒体膜电位变化显著,其中低Δψm精子比例显著增加(P<0.05);同新鲜精子(19.6%)相比,冷冻复苏后(79.4%)低Δψm精子比例提高59.8个百分点(P<0.05);冻融精子中Bcl-2、Caspase-9及Caspase-3等凋亡因子活性显著高于鲜精子及降温平衡后的精子(P<0.05),由此证明冻融过程能诱导猪精子进入凋亡状态。超低温冷冻保存能导致猪冻融精子质膜磷脂酰丝氨酸(PS)移位及线粒体膜电位降低,同时激发精子Bcl-2、Caspase-9及Caspase-3等凋亡因子活性,诱导成活冻融精子提前进入"似凋亡"状态,明显缩短冻融精子存活时间,这可能是猪冻精繁殖力降低的又一诱因。
- 赵娜甄林青胡启蒙王亮亮李新红
- 关键词：线粒体膜电位精子
- 猪精子获能前后细胞亚组分蛋白分离及酪氨酸磷酸化蛋白的鉴定
- 2012年
- 本研究对猪精子获能前后细胞亚组分蛋白进行分离以及对酪氨酸磷酸化蛋白进行鉴定,旨在为哺乳动物精子受精生物学研究奠定理论基础。利用动物精子体外获能培养、细胞亚组分分离技术及蛋白免疫印迹的方法,分离猪精子细胞亚组分蛋白及酪氨酸磷酸化蛋白鉴定。结果表明,猪精子经过获能培养后各项活力指标均得到显著提高,且与精子蛋白发生酪氨酸磷酸化修饰密切相关;获能精子中126、108、79ku的高分子量蛋白磷酸化程度明显高于未获能精子;分子质量约为25、47、50ku的膜蛋白及47ku胞浆蛋白发生酪氨酸磷酸化,其中25、47ku的膜蛋白酪氨酸磷酸化程度显著高于未获能精子(P<0.05);分子量约为23、37、42～50ku的核蛋白发生酪氨酸磷酸化,获能精子中23ku的核蛋白酪氨酸磷酸化程度显著高于未获能精子(P<0.05)。结果提示,猪精子细胞不同亚组分中,发生酪氨酸磷酸化修饰的蛋白以膜蛋白及核蛋白为主,同时有少量的胞浆蛋白。
- 胡启蒙张媛媛陈振亮王亮亮李新红
- 关键词：精子获能酪氨酸磷酸化
- 哺乳动物精子磷酸化蛋白质组学研究进展被引量：4
- 2012年
- 蛋白质的表达、修饰及相互作用的研究已成为后基因组学时代蛋白质组学中的重要内容。蛋白质磷酸化和去磷酸化作为最普遍的翻译后修饰之一,是精子细胞信号转导和酶调控、表达的主要分子机制,亦是精子、卵细胞信号识别及完成受精作用的关键环节。对精子磷酸化蛋白功能的研究有助于深入理解精子的获能、超激活运动的维持、发生顶体反应及精卵结合等受精过程的分子调控机理。对哺乳动物精子磷酸化蛋白质组学的研究进展,包括动物精子磷酸化蛋白质组学研究的技术方法、磷酸化蛋白质种类的鉴定、定量及其功能分析进行了综述,为进一步发掘与受精相关的重要生物标志物,揭示精子发育、繁殖潜能变化及受精分子机理奠定基础。
- 张媛媛胡启蒙王亮亮李新红
- 关键词：精子磷酸化蛋白质组学哺乳动物
