国家自然科学基金(81000016)
- 作品数：7 被引量：43H指数：3
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- 双水平气道正压通气对老年慢性肺源性心脏病合并Ⅱ型呼吸衰竭患者血浆N-端脑利钠肽前体水平的影响被引量：25
- 2014年
- 目的 探讨血浆N端脑利钠肽前体（NT proBNP）在慢性肺源性心脏病（CPHD）合并Ⅱ型呼吸衰竭中的作用及双水平气道正压（BiPAP）对其的影响. 方法 将80例CPHD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者分为常规治疗组和BiPAP通气组各40例,分别在治疗前及治疗120 h后进行慢性阻塞性肺疾病患者自我评估测试（CAT）、急性生理与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHEⅡ）和血气分析,以电化学发光法检测血浆NT-proBNP水平. 结果 CPHD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者治疗前血浆NT-proBNP与CAT评分（r=0.506,P=0.002）、APACHEⅡ评分（r=0.603,P=0.003）和PaCO2（r=0.539,P＝0.003）均呈正相关,与PaO2均呈负相关（r=-0.465,P=0.014）.与治疗前比较,两组患者治疗120 h后CAT评分、APACHEⅡ评分、血氧分压（PaO2）和血二氧化碳分压（PaCO2）均有明显改善;且与常规治疗组比较,BiPAP通气治疗能更明显改善APACHEⅡ评分（t=5.55,p＝0.002）、提高PaO2（t=5.92,P＝0.001）及降低PaCO2（t=4.12,P=0.000）.常规治疗组和BiPAP通气组治疗120-h血浆NT-proBNP分别为（341.2±107.6）ng/L和（273.3±82.2） ng/L,均较治疗前（823.8±149.0）ng/L和（832.7±163.0）ng/L显著下降（t＝21.72、28.19,均P=0.000）;且与常规治疗组比较,BiPAP通气组治疗120 h后血浆NT-proBNP下降更为显著（t=4.17,P＝0.002）.结论 血浆NT-proBNP水平能反映CPHD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者病情的严重程度;BiPAP通气治疗能降低CPHD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者血浆NT-proBNP水平,是治疗CPHD合并Ⅱ型呼吸衰竭的有效手段.
- 李亚清严建平许武林任卓超
- 关键词：呼吸功能不全连续气道正压通气
- 干细胞在慢性阻塞性肺疾病治疗中的作用被引量：2
- 2013年
- 慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一种以进行性不可逆性气流受限为特征的慢性气道炎症性疾病，具有全球性高发病率和病死率。如何修复损伤的肺组织、使丢失的肺泡再生是COPD治疗的关键所在。肺脏再生治疗包括刺激内源性成体肺干细胞及引入胚胎干细胞、骨髓源性干细胞或羊水源性间质干细胞等外源性干细胞两种途径。目前已有全反维甲酸激动剂及骨髓间质干细胞治疗COPD的临床试验研究，其安全性及有效性仍有待于观察。随着对干细胞定向分化及调控机制的深入研究，干细胞治疗将为COPD等疾病的治疗带来新希望。
- 李亚清严建平许武林
- 关键词：慢性阻塞性肺疾病肺泡上皮细胞干细胞
- Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡在肺气肿大鼠肺功能下降中的作用研究被引量：4
- 2017年
- 目的探讨Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）凋亡在被动吸烟肺气肿大鼠肺功能下降中的相关作用。方法选取907,清洁级雄性sD大鼠，完全随机平均分成6组，A组正常对照组，B、C、D、E、F组大鼠被动吸入不同浓度香烟烟雾。采用小动物肺功能仪测定各组大鼠肺功能、肺组织病理学检测、Real-timePCR测定肺泡表面活性蛋白A（SPA）和SPCmRNA水平、免疫组织化学法检测SPA和SPC蛋白表达水平，TUNEL与SPC双重免疫荧光染色分析AECⅡ凋亡情况。结果 当香烟烟雾中一氧化碳（CO）浓度达到（300±10）ppm以上时，大鼠肺功能中气道阻力（AR）明显增加、肺动态顺应性（Cdyn）及呼气峰值流速（PEF）降低（P〈0．05）；大鼠肺组织出现明显肺气肿样表现，肺泡平均内衬间隔（MLI）和平均肺泡面积（MAA）显著增加（P〈0．05）；肺组织中SPA和SPCmRNA及蛋白表达水平明显下降（P〈0．05），AECⅡ凋亡百分比显著增高（P〈0．05）。结论AECII凋亡在被动吸烟建立的大鼠肺气肿发生发展过程中起重要作用。
- 顾超刘元顺吕云曹林峰李亚清李娜
- 关键词：被动吸烟肺泡上皮细胞
- 靶向ADAM17基因RNA干扰慢病毒载体的构建及慢病毒包装被引量：1
- 2012年
- 目的构建靶向ADAM17基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体及包装慢病毒。方法根据人ADAM17mRNA序列设计4个靶序列,合成4对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列;将以上5对寡核苷酸序列退火后连入pLVTHM质粒,经酶切和测序鉴定。将重组慢病毒质粒转染至A549细胞,以Real-time PCR检测A549细胞中ADAM17 mRNA表达。将干扰效果最佳的质粒载体和包装质粒共转染至293T细胞,包装产生病毒颗粒。以流式细胞术检测重组慢病毒的滴度。结果酶切和测序证实干扰靶序列已被准确克隆到pLVTHM质粒载体。pLVTHM-ADAM17-siRNA1-4均可显著抑制A549细胞ADAM17 mRNA的表达,其中pLVTHM-ADAM17-siRNA4的抑制效果最佳。LV-ADAM17-siRNA4重组慢病毒的滴度为2.16×108TU/ml。结论成功构建了靶向人ADAM17基因RNAi慢病毒载体及包装了重组慢病毒。
- 李亚清严建平许武林王宏任卓超陈瑜
- 关键词：RNA干扰慢病毒
- 大鼠羊水间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞定向分化的体外实验被引量：2
- 2014年
- 目的：观察体外诱导大鼠羊水间充质干细胞（ AF-MSCs ）向Ⅱ型肺泡上皮细胞的定向分化。方法选取10只清洁级妊娠SD大鼠，收集羊水标本，分离、培养AF-MSCs，以流式细胞术分析其表型标记、实时荧光定量聚合酶链反应（ qRT-PCR）检测Oct-4 mRNA表达（以大鼠胚胎干细胞作为阳性对照）；根据不同体外诱导培养方法，将AF-MSCs分为A（空白对照组）、B、C、D、E共5组，各组体外不同诱导方法处理后qRT-PCR检测肺表面活性蛋白（ SP） A、SPB、SPC、SPD和TTF1 mRNA表达水平，免疫荧光法检测SPA、SPC蛋白水平以及电镜观察嗜锇性板层小体。结果大鼠AF-MSCs在含20％胎牛血清、4μg/L碱性成纤维细胞生长因子的L-DMEM培养基中呈旋涡状生长，第3代AF-MSCs表型标记中 CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和 CD166阳性表达率分别为（99.1±7.9）％、（99.2±7.4）％、（75.6±5.2）％、（98.9±8.1）％、（92.9±7.3）％和（89.3±6.7）％，而CD34和CD45表达阴性；Oct-4 mRNA相对表达量（0.690±0.059）显著低于大鼠胚胎干细胞阳性对照（1.000±0.002）（P＜0.01）；体外诱导分化后，A组SPA、SPB、SPC、SPD和TTF1 mRNA及SPA、SPC蛋白均为阴性表达，而B组SPA、SPB、SPC、SPD和TTF1 mRNA相对表达量分别为0.426±0.043、0.368±0.028、0.492±0.058、0.327±0.024和0.183±0.018，均显著高于其他各组（均P＜0.01），SPA、SPC蛋白绿色荧光呈强阳性表达；同时，在B组中观察到嗜锇性板层小体。结论 AF-MSCs在体外能通过特定的诱导定向分化为Ⅱ型肺泡上皮细胞。
- 顾超严建平许武林李亚清夏英捷陈淳
- 关键词：间质干细胞肺泡上皮细胞
- SPC及EGFP共表达载体跟踪人羊水间充质干细胞体外定向分化
- 2014年
- 目的构建肺泡表面活性蛋白C(SPC)及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体pcDNA3.1/SPC/EGFP,探讨其在体外跟踪人羊水间充质干细胞(AF-MSCs)定向分化为II型肺泡上皮细胞(AECII)的作用。方法采用PCR和DNA重组技术构建pcDNA3.1/SPC/EGFP表达载体,脂质体转染至AF-MSCs,G418稳定筛选;将AF-MSCs分为阴性对照组、未转染组和转染组,各组体外诱导培养后荧光显微镜观察SPC启动子调控下游EGFP基因表达活性,RT-PCR检测SPA和SPC mRNA表达水平,Western blot检测SPA和SPC蛋白表达以及电镜观察嗜锇性板层小体。结果成功构建pcDNA3.1/SPC/EGFP表达载体,测序结果与SPC启动子及EGFP序列一致;AF-MSCs体外诱导分化后,在阴性对照组中未见绿色荧光细胞,SPA和SPC mRNA及蛋白均为阴性表达,且未发现嗜锇性板层小体;在未转染组中亦未见绿色荧光细胞,而SPA和SPC mRNA(相对表达量为0.072±0.004和0.087±0.012)及蛋白(相对表达量为0.051±0.008和0.063±0.009)均为阳性表达,并发现嗜锇性板层小体;在转染组中可见绿色荧光细胞,SPA和SPC mRNA(相对表达量为0.109±0.011和0.126±0.017)及蛋白(相对表达量为0.075±0.012和0.081±0.006)均为显著表达,与未转染组相比差异均有统计学意义(t值分别为-5.50、-3.16、-2.90和-2.85,均P<0.05),亦可见嗜锇性板层小体。结论经pcDNA3.1/SPC/EGFP表达载体转染的AFMSCs在体外适当诱导下能定向分化为AECII,pcDNA3.1/SPC/EGFP表达载体可能成为跟踪AF-MSCs定向分化的工具,为肺组织再生的干细胞治疗提供研究基础。
- 顾超严建平许武林李亚清
- 关键词：间充质干细胞羊水分化肺泡上皮细胞
- 慢病毒介导的解整合素-金属蛋白酶17RNA干扰对气道上皮细胞MMP-9表达及NF-κB活性的影响被引量：9
- 2014年
- 目的探讨脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的TNF-α/NF-κB信号转导机制及慢病毒介导的解整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)RNA干扰(RNAi)对MMP-9表达的影响。方法构建ADAM17 siRNA慢病毒载体、包装重组慢病毒。以NF-κB抑制剂(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)或TNF-α拮抗剂(etanercept)预处理HBE4-E6/E7细胞,以LPS刺激HBE4-E6/E7细胞24 h。以重组慢病毒感染HBE4-E6/E7细胞72 h后,以LPS或TNF-α刺激HBE4-E6/E7细胞24 h。以半定量RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达;以酶联免疫吸附试验检测TNF-α蛋白含量;以Western blot检测MMP-9蛋白表达;以凝胶阻滞分析实验检测NF-κB活性。结果 LPS或TNF-α刺激均明显增加HBE4-E6/E7细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P<0.05);etanercept和PDTC均明显抑制LPS诱导的MMP-9表达及NF-κB活性(P<0.05)。慢病毒介导的ADAM17 RNAi明显降低LPS诱导的HBE4-E6/E7细胞上清液中TNF-α蛋白含量(P<0.05),亦明显降低MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P<0.05),但不能降低TNF-α诱导的MMP-9mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P>0.05)。PDTC明显抑制TNF-α诱导的MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P<0.05)。结论 TNF-α/NF-κB信号通路参与调控LPS诱导的气道上皮细胞MMP-9的表达,ADAM17通过调节TNF-α释放在其信号通路上游起到重要作用。
- 严建平李亚清钟晖陈淳顾超
- 关键词：RNA干扰气道上皮细胞DISINTEGRINMETALLOPROTEINASE
