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HCV抗体阳性样品核酸及核心抗原检测分析被引量：5: 2010年; 目的对90份临床检测为丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)阳性样品检测其核心抗原(HCV-cAg)、荧光定量PCR,观察3者间的相关性。方法采集临床诊断为HCV-Ab阳性样品90份,分别用市售的HCV-cAg检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、HCV-Ab检测试剂盒进行3种指标的检测复核。结果 90份临床HCV-Ab阳性样品,检出HCV-cAg阳性25份(27.8%),荧光定量PCR检出67份阳性(74.4%),抗体复核阳性的75份(83.33%);检出率HCV-Ab(83.33%)>荧光定量(74.4%)>HCV-cAg(27.8%)。结论丙肝的3种标志物之间存在一定的联系,但不同试剂的检测结果间存在明显差异。; 龙润乡杨蓉白慧珠李华王晶晶廖芸谭振国谢忠平; 关键词：丙型肝炎病毒核心抗原丙型肝炎病毒核酸丙型肝炎病毒抗体

Protein A/G亲和层析在HCV抗体纯化中的应用效果被引量：5: 2010年; 目的分析蛋白A/G亲和层析柱在纯化抗HCV血清的影响因素,以便选择最佳使用条件提高ProteinA/G亲和柱的利用效率。方法分别将抗HCV血清用不同处理方式、不同上样方式、不同使用次数的亲和柱进行纯化,并收集纯化样品进行检测、分析。结果用饱和硫酸铵粗纯后,在蛋白A/G亲和层析柱的纯化效果更好;样品在亲和柱内吸附30min可提高亲和柱的对目的蛋白的吸附。结论使用初纯的抗体并增加吸附时间能提高亲和层析柱的利用率,并有效延长亲和柱的使用寿命。; 杨蓉谢忠平龙润乡白惠珠谭振国王燕吴忠香张勇; 关键词：PROTEIN 抗体纯化丙型肝炎病毒

免疫复合物解离剂的研究及在HCV抗原检测中的应用效果分析被引量：2: 2012年; 目的探索一种可以使免疫复合物发生解离的方法,并进行应用效果分析。方法通过对HAV抗原抗体复合物的解离,进行酸化剂、去垢剂的组合及解离时间、温度等相关条件筛选,优化出最佳的解离方法,应用于1 370份HCV血清样品,对解离前后的抗原阳性率进行统计分析。结果 160 EU/ml的HAV抗原能被效价为20 U/ml的HAV抗血清完全中和;只单独使用去垢剂对免疫复合物无解离效果;0.1 mol/LGly-HCL能解离抗原抗体复合物,加入1种或几种去垢剂后则其解离效果有不同程度的提高,其中以Gly-HCl+7%TritonX-100+5%CHAP的效果最好(q=27.177,P<0.01);免疫复合物在加入解离剂后在室温60 min、37℃30 min、60℃10 min为本试验较好的解离条件,其中以37℃30 min效果最佳;应用Gly-HCl+5%CHAPS+7%TritonX-100在37℃对样品进行预处理30 min后,可使HCV抗原阳性检出率由解离前的33.3%提升至75.56%,解离前后之间的阳性率差异具有显著地统计学意义(χ2=32.34,P<0.01)。结论酸化剂能将HAV及HCV抗原抗体免疫复合物解离,添加去垢剂后,解离效果好于单独使用酸化剂,且联合添加好于单独添加。; 杨蓉龙润乡李华谭振国白惠珠杨婷蒋蕊鞠谢忠平; 关键词：甲型肝炎病毒丙型肝炎病毒抗原抗体复合物解离抗原检测

丙型肝炎病毒3种标志物的稳定性被引量：9: 2009年; 目的观察丙型肝炎病毒3种标志物的稳定性。方法用HCV-Ab、RT-PCR及HCV-Ag检测试剂分别检测血清样品中的HCV-Ab、HCV-RNA和HCV-Ag,比较3种标志物在不同温度、不同时间下保存及冻融后的稳定性。结果在2036份血清样品中,共检出HCV-Ab阳性样品85份、HCV-Ag阳性样品51份,HCV-RNA阳性样品12份;HCV-Ab4℃保存14d、-20℃保存3年及冻融5次稳定性良好,阳性率均为100%;HCV-RNA随保存时间的延长,阳性检出率逐步下降,-20℃保存3年后下降至33.33%,冻融后下降至83.33%;HCV-Ag-20℃保存3年后,阳性率下降至68.63%,4℃保存14d和冻融对其无影响。结论3种标志物中,HCV-Ab的稳定性最好,其次是HCV-Ag,HCV-RNA最不稳定。; 龙润乡李华崔萍芳宋霞易红昆谢忠平; 关键词：丙型肝炎病毒标志物稳定性

丙型肝炎病毒分片段抗体检测及优势抗原表位分析被引量：2: 2010年; 目的检测丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体,并分析HCV优势抗原表位,为HCV抗原、抗体检测及疫苗研究提供依据。方法收集经ELISA法检测抗HCV阳性血清样品90份,使用总抗体检测试剂及抗HCV分片段试剂进行检测,并用荧光定量PCR对抗体弱阳性及阴性样品进行复核,分析不同片段出现的阳性率,从而分析HCV的优势抗原表位。结果 90份抗HCV阳性的样品经总抗体检测试剂检测,其中阳性78份(86.67%);90份抗HCV阳性的样品中,分片段试剂检测1个片段以上阳性样品59份(65.56%);其中C、NS3、NS4及NS5片段抗体阳性分别为56份(94.92%)、57份(96.61%)、42份(71.19%)及47份(79.66%),NS3及C片段抗体是HCV的优势抗体。结论 HCV-C及NS3表位是HCV的优势抗原表位;HCV分片段抗体与总抗体检测试剂之间阳性检出率存在一定差异。; 谢忠平杨蓉龙润乡李华白惠株廖云蒋蕊鞠王燕洪超; 关键词：丙型肝炎病毒

HCV多表位复合抗原基因表达条件的探索: 2012年; 目的:筛选出适合HCV多表位复合抗原基因(PCX)表达的菌株,优化表达条件,并进行目的蛋白的免疫特异性的检测。方法:将含HCV多表位复合抗原基因的重组质粒pWR450-PCX转入大肠杆菌DH5α、TOP10F′、BL21菌株中,在不同培养基中,经不同浓度IPTG诱导不同时间,表达融合蛋白(GZ-PCX),并利用患者阳性血清通过Western Blot检测其免疫特异性。结果:重组质粒在DH5α、TOP10F′菌株中均能表达有一定免疫特异性的目的蛋白,但BL21中不表达;目的蛋白在TB培养基中的表达量明显高于LB培养基。结论:在37℃,IPTG浓度为1mM诱导3h时,目的蛋白的表达量达到峰值;所制备的抗原具有一定的免疫特异性和免疫原性。; 杨蓉杨婷李华龙润乡董承红董丽娟谢忠平; 关键词：丙型肝炎病毒原核表达免疫原性

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国家高技术研究发展计划(2007AA02Z480)