湖南省自然科学基金(10JJ5034)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- HBx基因缺失突变体(HBx-d382)对L02细胞cyclinD1、cyclinG1和E2F1表达的影响
- 2011年
- 目的前期的研究成功构建了稳定表达HBx基因及其缺失突变体(HBx-d382)的L02细胞,分别命名为L02/HBx和L02/HBx-d382,并证实其可导致肝细胞恶性转化。该研究进一步探讨HBx-d382对L02细胞G1期细胞周期调控相关基因cyclinD1,cyclinG1和E2F1表达的影响。方法实验分为L02/pcDNA3.0(稳定转染pcDNA3.0)、L02/HBx和L02/HBx-d382(分别稳定转染质粒pcDNA3.0/HBx和pcDNA3.0/HBx-d382)3组。通过实时定量PCR以及wester-blot检测转染HBx基因及其缺失突变体HBx-d382后L02细胞cyclinD1、cyclinG1和E2F1表达的改变。方法实时定量PCR以及wester-blot结果表明稳定表达HBx基因或HBx-d382的L02细胞cyclinD1、cyclinG1和E2F1表达上调,表达HBx-d382的L02细胞上调最为明显。结论 HBx-d382可能通过上调cyclinD1、cyclinG1和E2F1从而影响细胞G1期调控,进一步导致肝细胞恶性转化。
- 胡志亮侯周华符小玉陈莉谢萍欧阳奕杨永峰谭德明
- 关键词：HBXCYCLIN
- HBx基因及其缺失突变体(HBx-d382)对L02细胞microRNA表达谱的影响被引量：6
- 2010年
- 目的研究转染HBx基因(hepatitis Bvirus Xgene)及其缺失突变体(HBx-d382)后L02细胞Mi-croRNA表达谱的变化。方法通过脂质体转染和G418筛选获得L02/HBx、L02/HBx-d382阳性克隆,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和western blot鉴定目的基因表达,利用MicroRNA芯片技术检测其对L02细胞MicroRNA表达的影响。结果 RT-PCR及Western blot表明在L02/HBx和L02/HBx-d382细胞株中存在目的基因表达。MicroRNA芯片发现与L02细胞相比,L02/HBx-d382细胞有7个MicroRNA表达上调,5个MicroRNA表达下调,L02/HBx细胞有4个MicroRNA表达上调,12个MicroRNA表达下调。结论成功构建HBx基因及其缺失突变体(HBx-d382)的真核表达模型,该类病毒基因会影响L02肝细胞的MicroRNA表达谱。
- 胡志亮谭德明侯周华刘国珍谢萍欧阳奕刘菲刘洪波
- 关键词：HBX微小RNA
- 微小RNA在HBx缺失突变体致肝细胞增殖中的作用及其机制被引量：2
- 2012年
- 目的研究微小RNA（miRNA）在HBx缺失突变体致人肝细胞异常增殖中的作用及其相关机制。方法利用miRNA芯片技术检测稳定表达HBx-d382及HBx的L02（即分别含HBx基因缺失突变体HBx-d382及野生型HBx基因）细胞系中miRNA的表达，实时荧光定量PCR对上述miRNA进行验证。选取在L02／HBx-d382和L02／HBx细胞中均表达明显下调的两个miRNA：roAR-338—3P、miR-551b进行功能研究，分为实验组（转染miRNA模拟物组）、阴性对照组（NC，转染miRNA阴性对照）及脂质体组（1ipo，单加转染试剂），通过脂质体转染到细胞中，四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞周期，实时荧光定量PCR和Westernblot检测细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白G1和E2F转录因子的改变。采用SPSS16．0统计软件，数据均进行了正态检验并符合正态性，组间均数比较采用成组f检验。结果（1）与L02／pcDNA3．0细胞比较，L02／HBx-d382细胞有6个miRNA表达上调，5个miRNA表达下调；L02／HBx细胞有4个miRNA表达上调，12个miRNA表达下调。实时荧光定量PCR验证的结果与芯片相一致。（2）转染了miR-338—313-模拟物和miR-551b-模拟物后，L02／HB0d382及L02／HBx细胞增殖均受抑制，细胞周期均阻滞在G1期，细胞增殖能力减弱。L02／HBx-d382细胞中，细胞增殖能力：lipo组、NC组、miR-338—3p组和miR-551b组分别为90．0％±1．3％、88．0％±1．6％、56．0％±6．1％和62．0％±6．4％，miR-338—3p组与：lipo组、NC组比较，t值分别为10．402、9．133；miR-551b组和与lipo组、NC组比较，t值分别为8．763、7．403，P值均〈0．01。L02／HBx细胞中，细胞增殖能力：lipo组、NC组、miR-338-3p组和miR-551b组分别为91．0%±1．7％、89．0%±2．1％、60．0%±7．7％和66．0％±9．3％，miR-338—3p组与lipo组、NC组比较，t值分别为9．105、8．074；miR-551b组与lipo组、NC组比较，t值分别为7．
- 符小玉谭德明侯周华胡志亮刘国珍欧阳奕刘菲
- 关键词：RNA细胞增殖
