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国家高技术研究发展计划(2007AA02Z418)

作品数:5 被引量:13H指数:5
相关作者:朱进管晓虹刘新建林红李琛更多>>
相关机构:南京医科大学中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京市第二医院更多>>
发文基金:国家高技术研究发展计划上海市浦江人才计划项目江苏省科技支撑计划项目更多>>
相关领域:医药卫生农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 4篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 3篇医药卫生
  • 1篇生物学
  • 1篇农业科学

主题

  • 5篇狂犬
  • 5篇狂犬病
  • 4篇病毒
  • 3篇抗狂犬病
  • 3篇狂犬病毒
  • 2篇人源
  • 2篇抗体
  • 1篇蛋白
  • 1篇中和抗体
  • 1篇人与生物圈计...
  • 1篇融合蛋白
  • 1篇生物圈
  • 1篇生物学
  • 1篇生物学活性
  • 1篇生物学活性鉴...
  • 1篇噬菌体
  • 1篇噬菌体展示
  • 1篇试剂
  • 1篇试剂盒
  • 1篇特异

机构

  • 4篇南京医科大学
  • 3篇中国人民解放...
  • 1篇军事医学科学...
  • 1篇南京医科大学...
  • 1篇南京市第二医...

作者

  • 4篇朱进
  • 2篇刘新建
  • 2篇冯振卿
  • 2篇管晓虹
  • 1篇王忠灿
  • 1篇徐伟
  • 1篇卞颖华
  • 1篇陈乐如
  • 1篇周镇先
  • 1篇张夏玲
  • 1篇冯晓敏
  • 1篇李琛
  • 1篇林红
  • 1篇李明

传媒

  • 3篇南京医科大学...
  • 1篇Journa...

年份

  • 2篇2012
  • 1篇2011
  • 2篇2010
5 条 记 录,以下是 1-5
排序方式:
人源抗狂犬病毒免疫型抗体库的构建及特异性抗体筛选与鉴定被引量:8
2010年
目的:利用噬菌体展示技术,构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,筛选特异性的抗狂犬病毒糖蛋白人源单链抗体(scFv)并对其进行初步鉴定。方法:从接种狂犬疫苗的志愿者外周血中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,并利用重叠扩增PCR将VH和VL拼接为scFv。将纯化后的scFv克隆至噬菌体载体pComb3XSS构建人源抗狂犬病毒单链抗体库,以狂犬病毒糖蛋白(RABVG)为抗原,从抗体库中筛选抗RABVG的scFv。通过phage-ELISA验证噬菌体单链抗体的结合特异性,将阳性克隆转化E.coliTOP10F′进行表达。结果:构建了人源抗狂犬病毒抗体库,抗体库的库容为3.29×109。经过5轮筛选,获得43株与RABVG特异结合的噬菌体单链抗体,其中15个A450值较高的克隆序列分析结果显示,有3个正确的单链抗体基因。单链抗体基因转化TOP10F′构建工程菌,表达纯化后的单链抗体,经ELISA检测能够与RABVG特异性结合。结论:从构建的人源免疫型抗狂犬病毒单链抗体库筛选出的能与RABVG特异性结合的scFv,为进一步制备抗RABVG的治疗性人源化抗体奠定了基础。
李琛林红刘新建王忠灿周镇先陈乐如管晓虹朱进
关键词:噬菌体展示狂犬病毒
狂犬病毒G蛋白基因的克隆、表达及生物学活性鉴定被引量:6
2011年
目的:将狂犬病毒G蛋白(rabies virus Gprotein,RVG)基因片段克隆到原核表达载体中,表达并纯化GST融合G蛋白,为研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供诊断抗原。方法:根据GenBank发表的狂犬病病毒CVS-11株G蛋白结构基因序列设计引物,利用RT-PCR扩增出RVG基因片段,并定向克隆于pGEX-6P-1载体中,构建原核表达载体pGEX-RVG。阳性重组质粒转化宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过对表达条件的优化,确定可溶性表达的最佳条件。利用谷胱甘肽转移酶(GST)亲和层析法获得纯化的目的蛋白,Western blot对表达的蛋白进行鉴定。结果:构建了原核表达载体pGEX-RVG,经IPTG诱导后可表达分子量约36 000融合蛋白,经纯化获得高纯度的目的蛋白。Western blot检测表明重组的融合蛋白有较好的生物学活性。结论:成功表达并纯化狂犬病毒G蛋白,为进一步研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供抗原。
冯晓敏卞颖华徐伟刘新建朱进管晓虹
关键词:狂犬病毒融合蛋白可溶性表达
全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量:5
2012年
目的:利用人源IgM转基因小鼠制备全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对其进行初步鉴定。方法:以灭活的狂犬病病毒CTN株作为抗原免疫人IgM转基因小鼠。采用杂交瘤技术结合酶联免疫吸附试验(ELISA)高通量交叉筛选技术(HTS)制备全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体。通过双抗体夹心ELISA鉴定单抗的人源性和抗体型,间接ELISA、斑点杂交(Dot Blot)实验及Western blot检测单抗的特异性,BiaCore X-100测定单抗结合抗原的亲和力。结果:建立了2株稳定分泌抗狂犬病病毒人源性单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为9E3和9F2。双抗体夹心ELISA结果显示2株单抗均为人源性免疫球蛋白IgM型。间接ELISA、斑点杂交实验结果表明2株单抗均能特异性识别灭活的狂犬病病毒CTN株。Western blot结果显示2株单抗均能与狂犬病病毒糖蛋白特异性结合。2株单抗与狂犬病病毒CTN株抗原结合的亲和力分别为2.62×10-10mol/L、4.06×10-11mol/L。结论:筛选制备了2株特异性、高亲和力的全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体。本研究为进一步筛选人源抗狂犬病病毒免疫预防性中和抗体及其免疫治疗的应用奠定了基础。
张夏玲孙见宇殷珏李明周亦凭刘云成李万波朱进朱进冯振卿
关键词:狂犬病病毒
Characterization and potential diagnostic application of monoclonal antibodies specific to rabies virus被引量:5
2010年
Objective:Rabies is invariably a fatal encephalomyelitis that is considered to be a serious public health problem.It is necessary to develop standard rabies virus diagnostic tools,especially for diagnosing the strains prevalent in China.Methods:Monoclonal antibodies(MAbs)specific to rabies virus were produced and characterized by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA),isotyping,affinity assay,immunofluorescence assay(IFA),and immunocytochemistry.The MAb,whose affinity was higher for antigen,was used to establish an antigen captureELISA(AC-ELISA)detection system and test the efficiency by using clinical samples.Results:The heavy chain subclasses of two MAbs were all determined to be IgG2a.The 3C7 MAb showed stronger reactivity with rabies virus protein than the 2C5 MAb in an ELISA analysis,whereas the 3C7 MAb showed the highest affinity for antigen.IFA and immunocytochemistry results also indicated that the two MAbs could recognize rabies virus protein in its native form in cell samples.Data obtained using clinical samples showed that rabies virus could be detected by AC-ELISA detection system using the 3C7 MAb.Conclusion:It was potentially useful for the further development of highly sensitive,easily handled,and relatively rapid detection kits/tools for rabies surveillance in those areas where rabies is endemic,especially in China.
Xinjian LiuXiaomin FengQi TangZhongcan WangZhenning QiuYuhua LiChangjun WangZhenqing FengJin ZhuXiaohong Guan
关键词:狂犬病毒免疫细胞化学人与生物圈计划快速检测试剂盒
人源抗狂犬病中和抗体的制备及其在防治中的应用研究
<正>据2010年的世界卫生组织统计,全球每年死于狂犬病的人数超过5.5万人,其中95%发生在亚洲和非洲的发展中国家,印度和我国狂犬病报告发病数居全球前两位,狂犬病的防治成为全球关注的热点。对狂犬病Ⅲ级暴露后的防治,主要...
朱进冯振卿刘新建林红杨松涛管晓虹
文献传递
共1页<1>
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