国家科技支撑计划(2006BAD6A13)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：罗飞陈义平周洁南文龙陆明哲更多>>
- 相关机构：中国动物卫生与流行病学中心扬州大学湖南九鼎科技(集团)有限公司更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪伪狂犬病血清抗体gB-ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2011年
- 用纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的gB-ELISA方法。最佳反应条件为:抗原包被浓度为3.15μg/mL,待检血清稀释度为1∶40。该方法对猪圆环病毒病、猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征(猪蓝耳病)、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和SPF猪阴性血清检测呈阴性反应。批间、批内试验变异系数均不超过8%。用该方法与HerdChek ELISA试剂盒同时对119份血清进行了平行检测,其相对敏感性、特异性和符合率分别为:75%、80.7%和79%。试验结果表明:猪伪狂犬病血清抗体gB-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性,且重复性好,可用于猪伪狂犬病毒血清抗体检测。
- 罗飞李宇琴陈义平周洁
- 关键词：猪伪狂犬病毒抗体
- 猪伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白gD主要抗原表位区基因的克隆及原核表达被引量：5
- 2011年
- 本试验通过PCR方法以猪伪狂犬病病毒SD株的基因组DNA为模板扩增得到了含gD主要抗原表位编码区的片段,将该PCR产物克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32a的T7启动子下游。构建的重组质粒pET-gD经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子质量约为45.2ku,主要以包涵体形式存在。表达产物用His亲和层析柱纯化。Western blotting结果显示,该纯化蛋白能与猪伪狂犬病病毒抗体阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的抗原反应性,可以作为猪血清伪狂犬病病毒抗体诊断用抗原。
- 罗飞李宇琴周洁南文龙陆明哲陈义平
- 关键词：伪狂犬病病毒主要抗原表位原核表达
- 猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位区基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2009年
- 参照GenBank发表的猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位的编码区基因序列,设计一对引物,通过PCR扩增后,将约为600bp的目的片段克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32(a)的T7启动子下游,构建的重组质粒pET-gB经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子量约为42.4KDa,主要以包涵体形式存在。BandScan分析表明,表达量约占菌体蛋白的60.5%。利用His亲和层析方法得到了纯化的表达产物。Western blotting结果显示,重组蛋白能与阳性血清发生特异性反应,具有较好的抗原反应原性,可以作为检测用抗原。
- 罗飞陈义平陆明哲彭大新周洁李宇琴徐宝娟南文龙
- 关键词：猪伪狂犬病毒主要抗原表位原核表达
