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荞麦水溶性多糖的分离纯化及其分子量的测定被引量：9: 2009年; 通过热水浸提法从荞麦中提取水溶性多糖,并用离子交换柱和凝胶过滤柱对荞麦多糖进行分离纯化、测定其分子量。结果表明,荞麦多糖粗品用Savag法脱蛋白后,采用DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-400HR柱层析纯化,得到荞麦多糖(FEP),经过凝胶柱色谱分析表明,FEP为均一多糖。用苯酚硫酸法测定多糖的含量,用AKTA快速液相蛋白层析仪的紫外检测器在280nm波长处检测蛋白质含量。最后根据用不同分子量标准葡聚糖做出的标准曲线,测定出FEP分子量(Mw)为1720442D。; 许文涛张方方罗云波王颖黄昆仑; 关键词：荞麦多糖分离纯化分子量测定

Cr(III)在钝顶螺旋藻中的生物富集及其对钝顶螺旋藻生长的影响被引量：5: 2009年; 本实验研究了钝顶螺旋藻对Cr(III)的吸收和生物转化以及Cr(III)对钝顶螺旋藻的生长影响,用ICP-MS-HPLC对无机Cr(III)经钝顶螺旋藻吸收后的存在价态进行了分析。结果表明,钝顶螺旋藻对Cr(III)具有良好的富集和生物转化能力,在本实验中总铬富集量可达到173.17mg/g,有机化程度可高达96.99%。ICP-MS-HPLC分析结果表明没有有毒的Cr(VI)的产生。此外,干重测定结果显示低浓度的Cr(III)(<234.38×10-6g/g)促进钝顶螺旋藻的生长,高浓度的Gr(Ⅲ)(>234.38×10-6g/g)则抑制共生长,并导致钝顶螺旋藻形态异常。在一定范围内钝顶螺旋藻能高效富集Cr(III),可作为安全营养的保健食品;钝顶螺旋藻抗高Cr(III)压,吸附高浓度Cr(III)的能力使其可用于环境中Cr(III)污染的去除。; 许文涛王颖罗云波李元飒张方方黄昆仑; 关键词：钝顶螺旋藻 CR(III)生物富集生物转化

Nisin-rbLF-N融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：1: 2010年; 针对乳链菌肽(nisin)抑菌谱窄的缺点,选择对抗菌谱较广且具有较强抗性的牛乳铁蛋白氨基末端多肽(rbLF-N)为材料,构建融合基因Nisin-rbLF-N。将融合基因克隆到原核表达载体pGEX-4T1中,转化E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,将诱导表达的产物进行Tricine-SDS-PAGE蛋白电泳及抑菌活性检测。结果表明,克隆菌经诱导后可表达出可观的融合蛋白,融合蛋白以包涵体形式存在,包涵体经洗涤、尿素溶解、复性后具有抗菌生物活性。; 袁晓宇许文涛黄昆仑罗云波谷新晰田洪涛; 关键词：融合基因抑菌活性

潮霉素磷酸转移酶的致敏性评价研究被引量：7: 2009年; 潮霉素磷酸转移酶基因广泛用于转基因生物的基因转化过程中,该基因(hpt)编码的蛋白属于无食用和食物过敏史的处源目的蛋白。根据IFBC-ILSI制定的转基因食品致过敏性评价方法,进行了与已知的过敏蛋白的氨基酸序列相似性比较、消化稳定性实验以及动物模型实验。结果表明,未发现连续8个氨基酸序列相同:该蛋白在80℃加热10min左右时已全部降解,不具有热稳定性:体外模拟消化实验表明,消化20min时,SDS-PAGE和Western Blotting已检测不出Hpt蛋白。实验采用BN大鼠作为过敏模型,ELISA检测特异IgG、IgE以及组胺水平,Hpt蛋白与阳性存在显著性差异(p<0.05),与阴性无显著性差异。综合结果表明,Hpt蛋白潜在致敏性很低。本研究可为进一步开展以hpt基因为标记性基因的作物上市前安全性的评价提供基础数据。; 许文涛芦云罗云波元延芳黄昆仑; 关键词：安全评价体外消化动物模型过敏

微生物菌群多样性分析方法的研究进展被引量：49: 2009年; 随着现代科学技术的进步,对微生物多样性的研究已经提升到了一个新的高度,特别是由于分子生物学在该分支学科中的应用,使得在微生物菌群多样性的研究中克服了传统培养的缺点,使分析方法取得了长足的进步。本文主要介绍了微生物多样性研究的多种方法,将其简要划分为三大部分:(1)传统纯培养技术;(2)现代分子生物学技术;(3)上述两种方法的联合使用,并重点阐述了这些方法的优缺点,展望了微生物多样性研究方法的发展前景。; 许文涛郭星罗云波黄昆仑; 关键词：微生物菌群多样性分子生物学方法

三种土壤微生物总DNA提取方法的比较被引量：12: 2009年; 本文对3种常用的土壤微生物总DNA提取方法Martin法、高盐改进法及试剂盒法进行了比较,并通过DNA得率、纯度及16S rDNA V3可变区的PCR扩增结合DGGE法(denaturinggradient gel electrophoresis),分别对3种方法进行评价。结果表明,3种方法提取的DNA均能满足土壤微生物多样性分析的要求。其中试剂盒方法操作简单,提取的DNA质量较高,但DNA得率较低且成本昂贵。Martin法和高盐改进法用时较长,DNA得率较高,纯度较低,但对后续PCR扩增和DGGE分析没有明显影响,且成本低廉。; 王丽娜许修宏宛煜嵩金芜军; 关键词：土壤微生物 DNA提取 DGGE

重组弹性蛋白酶诱导表达、纯化及酶学特性研究被引量：4: 2009年; 将已构建好的表达载体pPIC3.5K/PAE转化毕赤酵母KM71,经甲醇诱导表达弹性蛋白酶,通过对发酵条件的初步优化,确定毕赤酵母重组菌株表达的最佳条件为:甲醇浓度1%,最佳诱导时间4d。通过DEAE-SepharoseFF弱阴离子交换柱一步纯化,获得良好的纯化效果。该重组蛋白酶最适pH值范围6.0～8.5,最适温度范围为25～40℃,催化反应条件温和。Ca2+和Mg2+对重组弹性蛋白酶活性有不同程度的促进作用,Zn2+、Cd2+、Mn2+、Fe2+、Co2+、Cu2+和EDTA对该酶有不同程度的抑制作用。; 谷新晰许文涛黄昆仑罗云波林希谨陈卓君田洪涛; 关键词：弹性蛋白酶纯化酶学特性

稻米中PCR抑制因子抑制机理的研究被引量：2: 2009年; 针对在检测过程中发现的大米中存在PCR抑制现象,对PCR抑制因子作用机理进行研究。通过把糙米加工成精米和米麸后的实验证明,PCR抑制因子主要存在于糙米的米麸中。研究间接证明PCR抑制因子主要通过抑制Taq聚合酶的酶活来抑制PCR反应。尝试采用多种方法来对大米中的PCR抑制因子进行鉴定,通过非变性电泳(PAGE)和电泳迁移率实验(EMSA)实验排除了大米中的PCR抑制因子是大分子物质。; 许文涛黄昆仑邓爱科罗云波; 关键词：稻米基因组 PCR

乳酸乳球菌乳脂亚种MG1363中盐诱导启动子的克隆: 2012年; 为了从乳酸菌中筛选和克隆启动子,实验利用缺失T7启动子的质粒载体PRSET/LacZ直接在大肠杆菌(E.coli)DH5α中分离乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)MG1363的基因启动子片段,获得了10多个具有抗氨苄和盐诱导出蓝斑的重组子。反复筛选并对其中一个抗性最高的重组子PRSET-osm进行序列测定和同源性分析发现,所克隆的基因启动子片段来自乳酸乳球菌乳脂亚种MG1363的基因组,并具有原核启动子的保守序列(Pribnow框和Sextama框)。对启动子osm进行进一步序列分析和鉴定发现,其在大肠杆菌BL21中启动LacZ基因的表达,确定osm为盐诱导启动子。; 余红仙许文涛程国灵戴蕴青黄昆仑田洪涛罗云波; 关键词：大肠杆菌基因启动子

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国家林业局948项目(2007-Z8)