国家自然科学基金(81000301)
- 作品数：7 被引量：21H指数：3
- 相关作者：刘淑霞刘青娟张玉军封晓娟吕欣更多>>
- 相关机构：河北医科大学河北医科大学第四医院河北医科大学第三医院更多>>
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- 狼疮性肾炎肾组织中NF-κB p65的表达及与细胞增殖的关系被引量：7
- 2013年
- 目的探讨核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65在狼疮性肾炎肾组织中的表达变化及与细胞增殖的关系。方法采用原位杂交技术检测狼疮性肾炎活检肾组织中NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达;采用RT-PCR、Western blot和免疫组化SABC法检测狼疮鼠(BXSB鼠)和C57BL/6鼠肾组织中NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达及其核转位;将常规培养的小鼠系膜细胞随机分为正常对照组、高迁移率族蛋白1(high mobility group protein box 1,HMGB1)刺激组和HMGB1+PDTC组,Western blot法检测NF-κB p65表达,免疫细胞化学检测PCNA蛋白表达。结果 (1)狼疮性肾炎活检肾组织中NF-κB mRNA及蛋白表达升高,且定位于细胞核;(2)BXSB鼠肾组织中NF-κB p65 mRNA和蛋白表达均升高,肾小球内NF-κB p65核表达明显增强;(3)重组HMGB1可促进体外培养的小鼠系膜细胞NF-κB磷酸化;(4)PDTC可降低HMGB1诱导的系膜细胞增殖。结论狼疮性肾炎发病过程中伴NF-κB信号途径的激活,且可参与系膜细胞的增殖。
- 康朋朋张玉军张景坤王冀刘青娟陈宁吴海江刘淑霞
- 关键词：狼疮性肾炎P65系膜细胞细胞增殖
- HMGB1/SREBP-1参与IFN-γ介导的小鼠肾小球系膜细胞内的脂质沉积被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)诱导小鼠系膜细胞内脂质沉积的可能机制。方法:常规培养的小鼠系膜细胞(MMC)分为正常对照组、刺激组、刺激+空质粒组(sh-HMGB1)和刺激+质粒组(sh-SREBP-1);油红O染色观察细胞内脂质沉积;RT-PCR检测HMGB1、SREBP-1和脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达;Wesern blot检测蛋白表达。结果:油红O检测显示IFN-γ刺激组MMC细胞中出现明显脂滴;IFN-γ刺激能够上调HMGB、SREBP-1和FASmRNA及蛋白表达;沉默HMGB1能够降低IFN-γ诱导的SREBP-1和FAS上调,并减少细胞内脂质沉积;沉默SREBP-1能够减少HMGB诱导的MMC细胞内脂质沉积。结论:IFN-γ可能通过上调HMGB/SREBP-1/FAS的表达促进小鼠系膜细胞内脂滴沉积。
- 张玉军陈砚凝郑书深刘青娟郝军韩嫣杨保卫刘淑霞
- 关键词：IFN-Γ脂质沉积高迁移率族蛋白1
- Notch胞内域1对高糖诱导小鼠肾小球足细胞凋亡的影响
- 2013年
- 目的通过体外高糖培养小鼠肾小球足细胞，检测Notch胞内域1（NICDl）的表达与肾小球足细胞凋亡的关系并了解其他信号通路是否介导高糖对Notch通路的激活，以探讨治疗糖尿病肾病的潜在方向。方法高糖培养小鼠足细胞，于刺激0、12、24、48、72h后收集细胞，检测NICDl蛋白表达情况。将细胞分为7组：正糖组、高糖组、高糖＋1分泌酶抑制剂（GSI，抑制NICDl活化）组、高糖＋p38细胞分裂素活化蛋白激酶抑制剂组、高糖＋Janus激酶2抑制剂组、高糖＋转化生长因子B，I型受体抑制剂组和高糖＋磷酸肌醇3激酉每／蛋白激酶B抑制剂组。分别采用免疫细胞化学和Westernblotting法检测NICDl的表达，流式细胞术和原位缺口末端标记法（TUNEL）观察足细胞凋亡情况。两组间数据比较采用t检验，多组间数据比较采用单因素方差分析。结果高糖培养足细胞NICDl蛋白较正糖组（0．079±0．010）增加，12h开始增加（0．443±0．075），48h达峰（0．746±0．034），72h略下降（0．658±0．056，F=6．235，P〈0．01）。流式细胞术及TUNEL显示48h时足细胞凋亡率升高，给予GSI后抑制NICDl的活化及足细胞凋亡（P〈0．01）；给予Janus激酶2（0．193±0．096）和转化生长因子B，I型受体抑制剂（0．225±0．067）可抑制高糖对NICDl蛋白的活化（t=6．781、4．287，均P〈0．叭）。结论高糖通过Notch通路诱导足细胞凋亡，高糖对Notch通路的激活可能通过Janus激酶／转录激活因子和转化生长因子β1／Smad通路。
- 王晓萌高峰郝军刘淑霞赵玉峰
- 关键词：高糖足细胞NOTCH通路凋亡
- HMGB1对小鼠系膜细胞细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响被引量：3
- 2011年
- 该实验以小鼠系膜细胞MMC为研究对象,以重组HMGB1为刺激物,通过检测细胞周期的变化及细胞PCNA、CyclinD1、CDK4和p16的表达水平,初步探讨HMGB1对系膜细胞的细胞周期及其相关调控因子的影响。选取小鼠系膜细胞MMC为研究对象,随机分为对照组及0.05mg/LHMGB1刺激组,经流式细胞术检测发现HMGB1能够上调小鼠系膜细胞中S期细胞所占比例;免疫细胞化学检测显示,PCNA蛋白在小鼠系膜细胞中的表达上调;通过RT-PCR技术及Western blot技术检测到小鼠系膜细胞中CyclinD1 mRNA和蛋白以及CDK4蛋白的高表达情况,而p16蛋白的表达呈时间依赖性降低。由此可见,HMGB1可能是通过上调CyclinD1/CDK4的表达,并下调p16的表达,促进细胞从G_0/G_1期进入S期,介导了小鼠系膜细胞的异常增殖,可能是HMGB1参与狼疮性肾炎发病的可能机制之一。
- 封晓娟刘淑霞吕欣徐宁
- 关键词：狼疮性肾炎HMGB1细胞周期细胞增殖
- 高迁移率族蛋白1对狼疮肾炎小鼠肾小球细胞增殖的影响被引量：2
- 2015年
- 目的通过敲低肾组织高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达，探讨其对改善狼疮肾炎小鼠肾功能，降低肾小球细胞增殖水平的影响。方法MRL／Faslpr鼠（n=24）被随机分为模型组、shHMGB1组和空质粒组；选取周龄、体质量相匹配的MRL／MpJ鼠为健康对照组。shHMGB1组和空质粒组采用电穿孔转染技术分别转染shHMGB1质粒和空质粒，模型组和健康对照组仅转染生理盐水。用全自动生化分析仪检测小鼠血清尿素氮和肌酐水平，测定尿蛋白浓度并计算24h尿蛋白量（UP）。HE染色观察肾组织的形态学表现；免疫荧光和Western印迹法检测小鼠肾小球中HMGB1和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达；实时定量PCR法检测小鼠肾小球HMGB1和PCNAmRNA表达变化。结果（1）与健康对照组相比，模型组小鼠肾小球HMGB1mRNA和蛋白的表达升高（均P〈0．05）；与模型组相比，shHMGB1组小鼠肾小球中HMGB1mRNA和蛋白的表达降低（均P〈0．05）。（2）与模型组相比，shHMGB1组小鼠尿蛋白减少（P〈0．05）。（3）免疫荧光和Western印迹结果显示，与健康对照组相比，模型组小鼠肾小球中PCNAmRNA和蛋白表达升高（P〈0．05）。与模型组相比，shHMGB1组肾小球中PCNA表达降低（P〈0．05）。结论敲低肾组织HMGB1表达可改善狼疮肾炎小鼠的肾功能，降低肾小球细胞的增殖水平。
- 王秋红封晓娟吴超刘淑霞
- 关键词：狼疮肾炎高迁移率族蛋白1细胞增殖增殖细胞核抗原肾功能
- γ-干扰素通过激活JAK/STAT信号转导途径上调小鼠系膜细胞内HMGB1表达被引量：5
- 2012年
- 目的:本实验以小鼠系膜细胞为研究对象,IFN-γ为刺激物,通过检测JAK/STAT信号途经的激活及HMGB1mRNA及蛋白表达,探讨γ干扰素刺激系膜细胞HMGB1表达上调的可能机制。方法:常规培养小鼠系膜细胞(Mousemesangial cell,MMC),无血清培养基同步化后分为正常对照组、IFN-γ(500 U/ml)刺激组和INF-γ+AG490(INF-γ500 U/ml+AG490 200μmol/ml)组。Western blot检测JAK、STAT1和HMGB1蛋白的表达变化,RT-PCR检测HMGB1mRNA的表达变化。结果:Western blot结果显示IFN-γ能够促进小鼠系膜细胞JAK、STAT1磷酸化和STAT1核转位,并呈时间依赖性;AG490能够降低IFN-γ介导的JAK1、JAK2、STAT1的活化,并呈时间依赖性。IFN-γ能够上调系膜细胞中HMGB1mRNA及蛋白表达,并随着刺激时间延长,其相对表达量呈上升趋势,AG490处理后,系膜细胞中HMGB1mRNA蛋白表达降低,并随时间延长而下调。结论:IFN-γ能够促进小鼠系膜细胞HMGB1表达上调,JAK/STAT信号通路激活可能是其主要机制之一。
- 陈砚凝张玉军吕欣刘青娟刘淑霞
- 关键词：狼疮性肾炎JAK/STATHMGB1
- TLR2在HMGB1诱导的小鼠系膜细胞增殖中的作用及其可能机制被引量：2
- 2014年
- 目的:初步探讨HMGB1是否通过Toll like receptor-2(TLR-2)促进小鼠系膜细胞增殖。方法:选取小鼠系膜细胞MMC为研究对象,为了确定HMGB1对小鼠系膜细胞增殖的影响,将小鼠系膜细胞随机分为正常对照组及50、100和200μg/L HMGB1刺激组,分别培养2、4、8和12 h,以BrdU掺入法检测小鼠系膜细胞的增殖水平。为了检测HMGB1对小鼠系膜细胞TLR2、PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16表达的影响,将常规培养的MMC细胞随机分为正常对照组及100μg/L HMGB1刺激组,分别于培养2、4、6、8和12 h收集细胞,采用Real-time PCR及Western blot检测小鼠系膜细胞TLR2、PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16的表达变化。为了明确TLR2表达与HMGB1介导的MMC增殖中的作用,将MMC细胞随机分为正常对照组、HMGB1刺激组(100μg/L)、HMGB1刺激+pYr-3.1-shTLR2组(转染组)、HMGB1刺激+空白质粒组(空白质粒组),刺激8 h收集细胞,Western blot检测pYr-3.1-shTLR2的沉默效果及细胞周期蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16蛋白的表达变化。结果:HMGB1上调小鼠系膜细胞增殖水平;HMGB1时间依赖性上调小鼠系膜细胞TLR2的表达;HMGB1刺激能够上调小鼠系膜细胞中PCNA、Cyclin D1、CDK4 mRNA及蛋白的表达,时间依赖性地降低小鼠系膜细胞中p16的表达;RNA干扰沉默TLR2表达,能够有效地下调HMGB1诱导的小鼠系膜细胞中细胞周期蛋白的表达,降低系膜细胞的增殖水平。结论:HMGB1可能通过与小鼠系膜细胞膜表面受体TLR2结合后,通过某种信号途径上调细胞周期调控蛋白Cyclin D1、CDK4的表达,并下调细胞周期依赖性激酶抑制剂p16的表达,推动细胞从G0/G1期进入S期,促使细胞增殖水平提高。
- 王秋红张玉军刘青娟封晓娟康朋朋刘淑霞
- 关键词：高迁移率族蛋白1TOLL样受体2CYCLIND1CDK4细胞增殖
