天津市科技发展战略研究计划项目(043113411)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 相关作者：张晓东叶丽虹东楠耿学丽杨宗伟更多>>
- 相关机构：南开大学天津市第三中心医院承德医学院附属医院更多>>
- 发文基金：天津市科技发展战略研究计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乙型肝炎病毒x基因蛋白转导载体的构建
- 2005年
- 乙型肝炎病毒X蛋白在细胞转化和肝癌的发生发展中具有重要作用.为了深入研究X蛋白的致癌机理构建了pTAT-GFP-X载体.该研究以克隆在真核表达载体pCMV-X质粒中的x基因为模板,设计了x基因的PCR引物,采用PCR方法扩增x基因,回收PCR产物,以XhoI和EcoRI酶切位点将PCR产物连接到蛋白转导系统pTAT-GFP载体中,再用XhoI和EcoRI酶对筛选的重组子进行酶切鉴定,获得了510bp的目的片段,表明已成功地将目的片段克隆在pTAT-GFP载体中.经DNA序列分析检测,显示克隆的x基因无突变.经SDS-PAGE和Westernblot检测证实,将重组质料pTAT-GFP-X转化致大肠杆菌BL21中,可表达pTAT-GFP-X融合蛋白.该pTAT-GFP-X载体蛋白转导系统的构建,为进行X蛋白的蛋白转导实验奠定了基础.pTAT-GFP-X融合蛋白具有穿透细胞膜进入细胞的能力,进而在细胞内发挥作用,与转基因不同,无需细胞内基因表达的过程,使得X蛋白的定量实验成为可能,X蛋白的蛋白转导实验更有助于探讨x基因的致癌机理.
- 东楠张晓东叶丽虹王洪辉
- 关键词：基因克隆乙肝病毒X基因
- 乙肝病毒X蛋白诱导肝癌细胞凋亡的信号转导途径被引量：4
- 2005年
- 乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)X蛋白(HBX)与肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的发生具有密切的关系.HBX不但具有拮抗细胞凋亡的作用,还具有促进细胞凋亡的作用.为了进一步探讨HBX促细胞凋亡作用的分子机制,通过脂质体转染的方法将携带X基因的真核表达载体pCMVX导入H7402肝癌细胞,使乙肝病毒x基因(HBx)瞬时过量表达.流式细胞仪检测结果显示,在瞬时转染3μgpCMVX质粒后,肝癌细胞发生凋亡.为阐明HBX诱导细胞凋亡的信号转导途径,对HBX与线粒体释放细胞色素c的关系做了初步探讨.通过罗丹明123染色,经流式细胞仪分析,显示在转染HBx基因后细胞线粒体膜电位明显下降,表明HBX可促进细胞色素c从线粒体释放增加.Western印迹检测结果显示,肝癌细胞在导入HBx基因后,细胞凋亡线粒体转导途径中细胞色素c、Apaf1、procaspase3和procaspase9等的表达水平均上调.研究结果说明,HBX可通过影响线粒体凋亡途径促进肝癌细胞凋亡.
- 东楠李楠叶丽虹张晓东
- 关键词：肝癌乙型肝炎病毒X蛋白细胞凋亡信号转导细胞色素
- 乙型肝炎病毒X蛋白与端粒酶的关系被引量：1
- 2006年
- 端粒(telomere)是真核细胞染色体末端的重复序列,对维持染色体的稳定性具有重要作用.端粒酶(telomerase)是维持端粒长度必需的一种逆转录酶,在细胞增殖、衰老、永生化和癌变等方面具有重要的作用.在肿瘤细胞中端粒酶发生明显变化,有较高水平的表达和很强的活性,成为肿瘤细胞的重要特征之一.乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus)X蛋白(HBx)与肝癌的发生密切相关,HBx可以通过多种途径发挥致癌作用,其中一个重要的分子机制,即激活人端粒酶反转录酶hTERT(为端粒酶的催化亚单位)使细胞发生永生化而癌变.因此,详细阐明HBx与hTERT的关系对于揭示乙肝病毒致癌机制具有重要的意义.本文对HBV的分子结构和HBx的分子生物学特性进行了详细的阐述,对HBx与hTERT及其调控因子的关系进行了归纳和总结,有助于进一步阐明HBx的致癌机制.
- 张烜张晓东叶丽虹
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白端粒端粒酶人端粒酶反转录酶
- 慢性乙型肝炎和肝硬化及肝癌患者血清中anti-HBx测定及其临床意义被引量：4
- 2007年
- 目的建立检测患者血清中 HBV 的 x 抗原(HBxAg)及其抗体(anti-HBx)的方法,阐明其在慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者血清中的临床意义。方法将 HBV 的 x 基因全长克隆至原核表达载体 pET30a(+)中,构建 pET30a-X 原核表达载体,转化入大肠杆菌 BL21(DE3)后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达 His-HBx 融合蛋白,纯化后将重组蛋白免疫家兔,制备兔抗 HBx 多克隆抗体。应用纯化后的兔抗 HBx 多克隆抗体和纯化后的重组蛋白,建立检测血清中 HBxAg 和 anti-HBx 的方法。应用建立的 ELISA 法,分别对慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者组及正常对照组血清中 HBxAg 和 anti-HBx 进行检测。结果 HBxAg/anti-HBx 在慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中的阳性率分别为8.7%/10.4%,17.9%/40.6%,9.8%/34.4%。统计学分析显示,与慢性乙型肝炎相比,肝硬化或肝癌患者血清中 anti-HBx 的阳性率较高(P<0.01)。结合临床检测的其他 HBV 血清学指标,发现在 anti-HBs 阳性病例中,anti-HBx 阳性率为5.2%(1/19);而在 HBsAg、HBeAg 和 anti-HBc 3项同时为阳性的病例中,anti-HBx 的阳性率为28.9%(39/135),二者相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。213名正常对照血清中 HBxAg 和 anti-HBx 均为阴性。结论血清中 anti-HBx 并非一个保护性抗体,标志 HBV 的感染和复制,是从慢性乙型肝炎向肝硬化和(或)肝癌发展的血清标志之一。
- 张航吴莲英刘树业邵新华杨宗伟张秀琴耿学丽叶丽虹张晓东
- 关键词：乙型酶联免疫吸附测定生物学标记物
