吉林省科技发展计划基金(200905186)
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- 携带人TRAIL基因的双靶向溶瘤腺病毒与X线联合抑瘤效应
- 2012年
- 目的探讨携带人TRAIL基因的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL,联合X线照射对A549细胞生长的影响。方法将质粒pPE3-hTRAIL与pSG500用Lipofectamine2000共转染至293细胞内同源重组,包装出的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL,采用PCR法进行鉴定,并在293细胞中大量扩增病毒,采用50%组织培养感染计量法测定病毒滴度,以MOI为5的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL感染A549细胞24 h,用RT-PCR法检测hTRAIL基因在肿瘤细胞中的表达。用不同MOI值(0.01～40)的CNHK500-hTRAIL感染A549细胞,感染5 d,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其对A549细胞的细胞存活率,以便确定适宜的感染滴度。用CNHK500-hTRAIL感染A549细胞,感染后48 h,用不同剂量的X线(1和2 Gy)照射,照射后3 d,通过MTT比色法检测CNHK500-hTRAIL联合X线照射下A549细胞的细胞存活率。结果 PCR法鉴定表明溶瘤腺病毒CNHK500内携带hTRAIL基因,制备的CNHK500-hTRAIL病毒滴度为3.25×109PFU/ml,且CNHK500-hTRAIL携带的hTRAIL基因在A549细胞中有效表达。经不同MOI值CNHK500-hTRAIL感染A549细胞,细胞存活率为64.26%～96.02%。CNHK500-hTRAIL感染联合不同剂量X线照射组细胞存活率较单纯X线照射(1和2 Gy)和单纯CNHK500-hTRAIL感染组明显降低(P<0.01),细胞存活率分别为50.77%和45.56%,增敏效应比值(E/O)为1.5和1.6,均大于1.4。结论成功构建了携带hTRAIL基因的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL,CNHK500-hTRAIL感染与X射线联合照射对A549细胞生长有协同抑制作用。
- 朴春姬孙晓玲刘丽波李林芳刘辉张海英
- 关键词：溶瘤腺病毒肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体细胞存活率
