山西高校科技研究开发项目(20111010)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：刘红丽张铁娥关丽孟晓丽王海龙更多>>
- 相关机构：山西医科大学更多>>
- 发文基金：山西高校科技研究开发项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 刚地弓形虫活化蛋白激酶C受体1基因的克隆和原核表达及纯化和抗原性分析被引量：1
- 2013年
- 目的克隆刚地弓形虫活化蛋白激酶C受体1(TgRACK1)基因,原核表达、纯化TgRACK1,并分析其抗原性。方法制备弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgRACK1基因全长编码序列(GenBank登录号:AY547291)的开放阅读框设计引物并进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pGEX-6p-1载体,重组质粒转化大肠埃希菌DH5α,阳性菌落经菌液PCR、双酶切及DNA测序进行鉴定。将重组质粒pGEX-6p-1-TgRACK1转化至大肠埃希菌BL21(DE3)并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物;分别以抗GST标签抗体和兔抗弓形虫血清为一抗,免疫印迹(Western blotting)分析鉴定重组蛋白及其抗原性。重组融合蛋白经GST琼脂糖凝胶亲和纯化,纯化蛋白经SDS-PAGE分离,考马斯亮蓝染色结合凝胶成像系统分析其纯度。结果 RT-PCR扩增产物约为970 bp,重组质粒pGEX-6p-1-TgRACK1构建成功。经IPTG诱导获得相对分子质量约63 kDa的可溶性重组蛋白。诱导表达的蛋白质为带GST标签的重组融合蛋白,且能被兔抗弓形虫血清识别。亲和纯化后获得纯度大于95%的重组TgRACK1蛋白质。结论克隆得到弓形虫活化蛋白激酶C受体1基因,原核表达并纯化出该基因编码的蛋白质,且该重组蛋白具有抗原性。
- 王海龙殷丽天孟晓丽张铁娥关丽刘红丽殷国荣
- 关键词：刚地弓形虫原核表达抗原性
