转基因生物新品种培育专项(2009ZX08008-001B)
- 作品数：8 被引量：31H指数：3
- 相关作者：石国庆代蓉万鹏程周平刘守仁更多>>
- 相关机构：新疆农垦科学院石河子大学新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 绵羊ILK基因的克隆及其在毛囊生长期的表达被引量：4
- 2012年
- 整合素连接激酶（ILK）是一种支架蛋白,在毛囊发育过程中发挥重要作用。文章利用PCR技术,首次获得绵羊ILK基因的编码区全长序列,并进行了生物信息学分析;同时对该基因的组织表达谱及其在不同绵羊品种毛囊生长期皮肤组织中的表达变化进行了研究。结果表明,绵羊ILK基因ORF全长1 359 bp,编码452个氨基酸。ILK蛋白结构经预测含有3个锚定重复序列和1个激酶结构域,并存在多个磷酸化位点和蛋白激酶C的磷酸化位点。半定量RT-PCR结果显示该基因在绵羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、骨骼肌、皮肤和小肠组织中均有表达,皮肤、脾脏和肝脏中表达量较高;实时荧光定量PCR结果表明在3~5月份（毛囊生长起始期）,ILK基因在中国美利奴超细型和哈萨克羊皮肤组织中的表达水平较高并均呈逐月上升趋势;在6~10月份（毛囊生长期）,中国美利奴超细型皮肤ILK基因表达水平高于同期的哈萨克羊。分析认为ILK可能在调控绵羊次级毛囊生长发育过程中起一定作用。
- 杨剑波甘尚权杨永林张红琳宋天增冯静杨井泉高磊石国庆沈敏
- 关键词：整合素连接激酶基因克隆毛囊绵羊
- 中国美利奴超细型与哈萨克羊毛囊兴盛期皮肤组织消减cDNA文库的构建被引量：3
- 2012年
- 【目的】筛选影响绵羊羊毛性状的重要候选基因,为研究羊毛性状形成的分子机制奠定基础。【方法】利用抑制性消减杂交技术构建中国美利奴超细型和哈萨克羊兴盛期皮肤组织间正、反向消减cDNA文库,并对差异基因进行测序和生物信息学分析;应用半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR对部分差异基因进行鉴定。【结果】①从所构建绵羊皮肤组织的正、反向消减cDNA文库中分别获得153和143个ESTs,其中分别包括5和4个未知功能的ESTs,推测可能是新基因;对部分已知功能ESTs进行了GO聚类分析、通路分析和蛋白互作分析,结果显示粗、细毛羊之间存在一定差异;②文库中的3个差异基因KRTAP8-2、Trichohyalin和KRTAP3-2均能在皮肤中特异性地高表达,其中KRTAP8-2和Trichohyalin基因在中国美利奴超细型羊皮肤组织中的表达丰度分别是哈萨克羊的3.45和2.07倍,而KRTAP3-2基因在哈萨克羊皮肤组织表达丰度是中国美利奴超细型羊的1.87倍。【结论】成功构建了中国美利奴超细型和哈萨克羊皮肤组织间抑制性消减cDNA文库,初步筛选出一批可能影响羊毛性状的差异表达ESTs。
- 杨剑波甘尚权李晶高磊杨井泉张科杨永林沈敏石国庆
- 关键词：抑制性消减杂交中国美利奴羊哈萨克羊
- 角蛋白启动子荧光素酶表达载体的构建及其表达活性分析被引量：2
- 2011年
- 角蛋白14(K14)和角蛋白5(K5)主要在毛囊基质和复层鳞状上皮基底层的角质细胞里表达。这两个启动子已被广泛应用于毛囊特异表达外源基因的转基因小鼠模型的研究中,为了能将其应用于转基因绵羊生产,探讨基因对绵羊毛囊发育的影响,从人基因组中克隆得到K14和K5启动子,利用不同的报告基因在细胞水平分析各启动子的表达活性。结果表明,这两个启动子在不同细胞系中都能驱动外源基因的表达,而且K14启动子在小鼠皮肤细胞系JB6-C41中的表达活性高于其他细胞。
- 代蓉孟庆勇沈思军石国庆刘守仁
- 关键词：启动子活性荧光素酶角蛋白
- 不同培养体系对绵羊体外受精胚胎发育及细胞凋亡的影响被引量：2
- 2011年
- 【目的】通过SOFaaBSA和CR1aaBSA-FBS两种培养液对体外胚胎发育率及胚胎凋亡发生的影响,筛选适合绵羊体外受精胚胎发育的培养体系,为相关研究提供一定的理论依据和研究基础。【方法】采用激光共聚焦显微镜和细胞原位凋亡检测技术(TUNEL),分析这两种胚胎体外培养系统的绵羊体外受精胚胎发育的影响及各发育阶段的细胞凋亡状况及对胚胎发育的影响。【结果】SOFaaBSA和CR1aaBSA-FBS组的卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率均高与其它实验组,但这两组之间差异不显著(P>0.05)。同时,在两种培养液培养的2细胞、3-8细胞期的绵羊体外受精正常形态的胚胎中均未发现凋亡信号,凋亡信号在两种培养液中都是首次出现在9-16细胞胚胎细胞中,并且随着胚胎发育至囊胚期,凋亡细胞数随着胚龄增长越来越多。在SOFaaBSA培养液培养的桑椹胚和囊胚细胞胚胎凋亡率显著低于CR1aaBSA-FBS培养液培养的桑椹胚和囊胚(P<0.05),同时,在CR1aaBSA-FBS培养液中桑椹胚和囊胚细胞平均具有凋亡细胞的数量显著高于SOFaaBSA培养液(P<0.05)。【结论】CR1aaBSA-FBS培养系统显著的增加了绵羊晚期体外胚胎的凋亡。CR1aaBSA-FBS能够支持绵羊体外受精胚胎的发育,但SOFaaBSA培养液更适合绵羊体外胚胎的发育。
- 万鹏程石文艳代蓉周平刘守仁石国庆
- 关键词：绵羊体外受精凋亡TUNEL
- 绵羊体外受精胚胎培养系统优化与囊胚差异染色被引量：6
- 2010年
- 【目的】评定SOF和CR1培养系统对绵羊体外受精胚胎的发育的影响,筛选适合绵羊体外受精胚胎发育的培养体系,为相关试验研究提供一定的理论依据和研究基础。【方法】通过分析研究SOF和CR1两种培养系统在添加不同蛋白和血清成分时对绵羊体外受精胚胎发育的影响,并采用一种简化的差异染色方法,对SOFaaBSA和CR1aaBSA-FBS组培养液培养的绵羊扩张囊胚和孵化囊胚的总细胞数,滋养层细胞与内细胞团细胞数的组成和比例进行深入比较。【结果】SOFaaBSA和CR1aaBSA-FBS组的卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率均高于其它实验组,但这两组之间差异不显著(P>0.05)。同时,SOFaaBSA组的扩张囊胚和孵化囊胚的总细胞数和滋养层细胞(TE)数均显著高于CR1aaBSA-FBS组(P<0.05),但内细胞团(ICM)数和ICM与TE细胞的比例在两组培养系统中均无显著差异(P>0.05)。【结论】CR1aaBSA-FBS培养液能够像SOFaaBSA培养液一样支持绵羊体外受精胚胎的发育,CR1培养系统可以用于绵羊体外受精胚胎的生产,但SOFaaBSA培养液相比较CR1aa BSA-FBS培养液而言更加适合绵羊体外受精胚胎的发育。
- 万鹏程石文艳周平代蓉石国庆刘守仁
- 关键词：绵羊体外受精
- BMP4对小鼠毛囊数量的影响被引量：14
- 2012年
- 利用PolⅡ型人角蛋白14基因的启动子K14驱动eGFP-shRNA整合转录本的表达方法,制备在皮肤组织中高效表达靶向BMP4基因的siRNA转基因小鼠模型。利用Northern杂交的方法验证siRNA在转基因小鼠皮肤中高表达,但未从mRNA水平分析BMP4基因的表达变化。以建立的转基因小鼠模型为基础,检测小鼠皮肤组织中BMP4基因的表达变化,并观察妊娠18.5d(E18.5)转基因胎鼠与同窝阴性胎鼠背部皮肤组织切片中毛囊数量的变化,选择5个不同的视野进行毛囊数量计数后统计分析。结果表明,转基因小鼠皮肤组织中BMP4基因的表达下调,同时毛囊数量显著增加。表明利用融合表达载体制备转基因小鼠实现目的基因RNAi的方法可以有效地抑制动物体内目的基因的表达,同时也从胎鼠毛囊数量分析统计的结果发现,该基因对小鼠毛囊的发生发育有一定的影响。
- 毛青青代蓉沈思军郭洪万鹏程周平石国庆
- 关键词：转基因小鼠RNAIBMP4
- 抗朊蛋白单克隆抗体的免疫学特性研究
- 2009年
- 以牛、羊重组朊蛋白(PrP)、正常牛、羊的脑组织匀浆、牛海绵状脑病(BSE)及羊痒病阳性的脑组织匀浆及切片为抗原,测定9株抗朊蛋白单克隆抗体的ELISA、免疫印迹及免疫组化等免疫学反应特性。结果表明:5株单抗可用于BSE及羊痒病的ELISA、免疫印迹检测;3株单抗可用于BSE及羊痒病的免疫组化检测;1株单抗在免疫印迹试验中只与羊痒病PrPSc的核心片段反应,结合该株单抗所识别的抗原表位PrP第78~93氨基酸(aa),证实BSE与羊痒病PrPSc的蛋白酶K消化位点存在差异。
- 吴晓东吴晓东张永强刘雨田邹艳丽刘珊李林
- 关键词：传染性海绵状脑病朊蛋白单克隆抗体免疫学特性
- 湖羊与中国美利奴军垦细毛羊子宫组织形态学研究被引量：1
- 2011年
- 本试验旨在对绵羊多胎湖羊与单胎细毛羊孕角子叶面积、子叶内DNA含量及子宫、胎儿重量与早期妊娠之关系的分析,揭示绵羊多胎妊娠的生物学基础,以便在生产上采取相应措施,从而达到提高绵羊繁殖力的目的。
- 石国庆程瑞禾阎玉琴管锋汤晓禄刘荣仁卢守亮代蓉万鹏程
- 关键词：湖羊
