辽宁省科学技术计划项目(2008225016)
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
- 相关作者：王思敏冯浩宁宏刘加勇林婷婷更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 雷帕霉素对转化生长因子-β2诱导的人晶状体上皮细胞上皮-间叶样转化的抑制作用及其机制被引量：6
- 2013年
- 背景转化生长因子-β2（TGF-β2）诱导的人晶状体上皮细胞（LECs）上皮细胞-肌成纤维细胞转化（EMT）过程是后发性白内障（PCO）的主要发病机制，因此寻求有效抑制这一作用的药物对于防治PCO有重要意义。目的观察雷帕霉素（RAPA）对人LECs增生和TGF-β2诱导的EMT的抑制作用。方法采用含质量分数10％胎牛血清的DMEM高糖细胞培养液对人LECs系SRA01／04进行体外培养，换以无血清培养液培养后分别用TGF-β2（5mg／L）、TGF-β2＋10nlg／LRAPA、TGF-β2＋100mg／LRAPA、TGF-β2＋1000mg／LRAPA、TGF-β2＋10000mg／LRAPA共培养SRA01／0472h，仅用无血清培养液培养的SRA01／04作为对照组。采用MTT法检测各组SRAOI／04的吸光度（A490）值以评估SRA01／04的增生情况，并计算RAPA对细胞生长的抑制率。各组细胞作用48h后，采用逆转录PCR（RT-PCR）法和Westernblot法分别检测LECsETM的标志物-α平滑肌肌动蛋白（d-SMA）和上皮性钙黏附蛋白（E-cad）的表达。选取TGF-β2＋400mg／LRAPA分别作用于培养的SRA01／0424、48、72h，采用Westernblot法检测SRA01／04中α-SMA、E-cad的表达水平。结果MTT法检测结果显示，对照组、TGF-β2组、TGF-β2＋10ing／LRAPA组、TGF-β2＋100mg／LRAPA组、TGF-β2＋1000ing／LRAPA组和TGF-β2＋10000mg／LRAPA组SRA01／04的A490值分别为0．680＋0．020、0．550±0．013、0．480＋0．014、0．400＋0．011和0．200＋0．019，表明随着RAPA质量浓度的增加，SRAOI／04增生值降低，差异有统计学意义（F=101．920，P=0．000），且RAPA的抑制率逐渐增加。RT-PCR和Westernblot检测结果表明，阴性对照组SRAOI／04中α-SMAmRNA（α-SMAmRNA／β-actinmRNA）及其蛋白（α-SMA／β-actin）仅有少量表达，TGF．B，组可见SRAOI／04中01．SMAmRNA及其蛋白表达量明显增加，但不同质量浓度的RAPA作用于SRA01／04后，随着RAPA质量浓度的增加，SRAOI／04中α-SMAmRNA及蛋白的表达�
- 林婷婷王思敏刘加勇冯浩宁宏
- 关键词：雷帕霉素转化生长因子-Β2人晶状体上皮细胞
- PP242对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用及GRIM-19表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的观察PP242对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖和GRIM-19表达的影响。方法对永生系人晶状体上皮细胞SRA01/04进行培养及传代,Cell Counting Kit-8比色法检测PP242(100,250,500,750,1 000 nmol/L)处理细胞株SRA01/04后12,24,48 h细胞生长情况;应用免疫印迹法及实时定量RT-PCR检测使用PP242(100,250,500 nmol/L)培养细胞48 h后GRIM-19及其mRNA的表达情况。结果 100,250,500,750,1 000 nmol/L PP242对人晶状体上皮细胞系SRA01/04作用12,24,48 h后,其抑制率12 h组分别为8.59%,14.53%,19.62%,23.01%,28.80%;24 h组分别为10.22%,19.67%,34.92%,42.90%,46.86%;48 h组分别为24.19%,48.13%,54.54%,61.36%,65.34%,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);100,250,500 nmol/L PP242处理人晶状体上皮细胞48 h后,免疫印迹法检测结果显示GRIM-19蛋白的表达水平逐渐增强;实时定量RT-PCR检测结果显示,GRIM-19 mRNA表达增强,绝对定量mRNA结果分别为0.700±0.112,0.994±0.128,1.584±0.173,与正常对照组(0.456±0.177)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PP242对体外培养的人晶状体上皮细胞的增殖存在抑制作用,其作用强度呈浓度和时间依赖性;人晶状体上皮细胞中存在GRIM-19的表达;PP242在抑制人晶状体上皮细胞的增殖过程中可上调GRIM-19的表达。
- 冯浩林婷婷王思敏刘加勇宁宏
- 关键词：人晶状体上皮细胞GRIM-19
