内蒙古自治区自然科学基金(200711020506)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 相关作者：杜晨光曹贵方李海军杨燕燕鲍庆江更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学内蒙古大学更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金内蒙古自治区人才开发基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 蒙古绵羊Ghrelin基因的克隆和原核表达被引量：2
- 2011年
- 为了克隆蒙古绵羊Ghrelin基因,构建其原核表达载体,并检测其在大肠杆菌中的表达情况。本研究用RT-PCR方法从蒙古绵羊胃组织mRNA扩增获得Ghrelin基因的cDNA序列,克隆到pMD-19T载体后进行序列分析。将测序正确的cDNA序列与原核表达载体pET-32a(+)连接,并转化BL21(DE3)大肠杆菌。经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明克隆的蒙古绵羊Ghrelin基因序列与已发表基因序列有2个碱基的差异,该碱基的变化并不影响氨基酸序列,目的蛋白主要以可溶性形式存在,Western-blot初步证实了所获得的融合蛋白是特异的。本研究成功构建了蒙古绵羊Ghrelin基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达,为进一步研究蒙古绵羊Ghrelin基因的功能提供参考。
- 梁建荣曹贵方赵鹏伟温世勇程兰玲凃勇
- 关键词：GHRELIN基因克隆原核表达蒙古绵羊
- 绵羊卵泡内Ghrelin的免疫组化定位被引量：5
- 2008年
- 为探索Ghrelin在绵羊各级卵泡的存在和分布,采用免疫组织化学技术研究了Ghrelin多肽在绵羊卵泡中的分布情况。结果表明,初级卵泡、早期生长卵泡和晚期生长卵泡均有Ghrelin表达,卵母细胞呈阳性信号,而在各级卵泡中颗粒细胞Ghrelin呈弱阳性信号。各级卵泡内Ghrelin的表达,提示Ghrelin在卵泡发育过程中可能具有一定作用。
- 杜晨光曹贵方
- 关键词：GHRELIN绵羊卵泡
- 绵羊卵巢上Ghrelin部分序列鉴定被引量：1
- 2010年
- 为了研究GhrelinmRNA是否在绵羊卵巢表达,试验根据GenBank中报道的绵羊Ghrelin序列设计1对特异性引物,以绵羊卵巢所提取的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出绵羊Ghrelin的cDNA,经DNA测序后进行分析。结果表明:扩增到的绵羊Ghrelin cDNA为Ghrelin的部分序列,将测序结果同已发表的绵羊Ghrelin序列进行比对,233个碱基中有1个碱基的差异,该差异不影响翻译后多肽的序列;该片段cDNA包含由231bp组成的开放读码框(ORF),编码77个氨基酸的前原绵羊Ghrelin多肽。
- 郭志凯李国俊杜晨光
- 关键词：绵羊卵巢GHRELINCDNA克隆
- Ghrelin在绵羊体内卵母细胞和早期胚胎的表达被引量：5
- 2008年
- 为了明确ghrelin是否参与了卵母细胞成熟及胚胎早期发育进程,本研究利用免疫荧光技术和实时定量RT-PCR技术检测了绵羊卵母细胞和体内早期胚胎中ghrelin蛋白的表达定位和ghrelin mRNA水平相对表达变化规律。免疫荧光染色结果表明,ghrelin蛋白主要分布于卵母细胞胞质内;实时定量RT-PCR结果揭示绵羊卵母细胞和早期胚胎ghrelin mRNA的相对表达量依据发育阶段的不同而呈现一定变化规律,即在成熟卵母细胞,2细胞胚胎期和8细胞胚胎期显著高于未成熟卵母细胞和4细胞胚胎期(P<0.05),囊胚期表达量最高。卵母细胞和早期胚胎中ghrelin蛋白的表达及ghrelin mRNA特定的表达模式,揭示这一新型分子在绵羊卵母细胞成熟以及胚胎早期发育过程中具有潜在的调控作用。
- 杜晨光杨燕燕李海军鲍庆江郭宏儒曹贵方
- 关键词：GHRELIN绵羊卵母细胞胚胎实时定量RT-PCR免疫荧光染色
- RT-PCR技术检测绵羊卵巢内Ghrelin的表达
- 2009年
- 为了明确Ghrelin在绵羊卵巢有腔卵泡上是否存在表达,本研究利用实时定量RT-PCR技术检测了绵羊卵巢有腔卵泡内的卵母细胞、卵丘细胞和壁层颗粒细胞的Ghrelin蛋白的表达量情况。结果揭示绵羊卵巢有腔卵泡内各类型细胞Gh-relin mRNA的相对表达量大致相同。绵羊卵巢有腔卵泡内各类型细胞Ghrelin蛋白的表达及Ghrelin mRNA的表达模式,尤其是卵母细胞中的表达,揭示这一新型分子在绵羊卵巢上具有潜在的调控作用。
- 斯琴高娃杜晨光
- 关键词：GHRELIN实时定量RT-PCR
