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信号分子复合物在细胞信号转导中的作用及其研究技术被引量：1: 2005年; 细胞的代谢、迁移、增生、分化等活动,都是在各种信号分子(signalingmolecules)的控制下进行的。各种细胞过程并非单个信号转导分子的直接作用就能完成的,而是以多个相关分子形成复合物的形式参与调控。例如多种转录因子在调节基因表达时,通常都是相互作用形成复合物而发挥功能的。细胞的生命过程并不仅是许多独立反应的总和,而是由信号分子复合物执行并调控的。通过生物大分子之间的相互作用并形成不同的复合物,从而对细胞信号过程进行精密调控。本文对信号分子复合物的形式、功能域、调节机制以及研究的主要技术手段进行综述,并预测信号分子复合物的研究前景。; 赵雷姜勇; 关键词：信号转导

高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放细胞因子的作用及其与脂多糖对白细胞介素6释放的协同效应被引量：11: 2006年; 目的观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）释放细胞因子的影响及其对脂多糖（LPS）诱导细胞因子白细胞介素6（IL-6）表达的作用。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白（15ng／ml）诱导HUVEC 11种细胞因子／趋化因子的水平变化；检测不同浓度HMGB1（0～75ng／ml）刺激后不同时间点（0、1、3、6、12和24h）HUVEC分泌IL-6的水平以及HMGB1（15ng／ml）与LPS（10ng／ml）共同刺激对HUVEC分泌IL-6的影响。结果 HMGB1刺激后HUVEC分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、干扰素γ（IFN-γ）、IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的水平明显升高（均P〈0．01），分别是对照（未加刺激）的5．7、4．2、27．8、12．8和5．4倍；HMGB1蛋白以时间和剂量依赖方式诱导IL-6的分泌，在刺激后3～6h，IL-6水平开始增加，在6h时IL-6由对照的32ps／ml±21pg／ml增加到75pg／ml±22pg／ml（P〈0．01），12h（453pg／ml±78pg／ml）～24h（901pg／ml±184pg／ml）持续升高（P〈0．01）；随着HMGB1浓度的增加，IL-6的水平也明显增加，当HMGB1浓度为3、15、75ng／ml时，IL-6分别是155ps／ml±33pg／ml、901pg／ml±184pg／ml、1508pg／ml±378pg／ml，与基础值32pg／ml±21pg／ml相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。分别用LPS（10ng／ml）和HMGB1（15ng／ml）单独刺激HUVEC时，IL-6的含量从基础的32pg／ml±22pg／ml分别增加至289pg／ml±42pg／ml和901pg／ml±184pg／ml（均P〈0．0l）；如果用二者共同刺激HUVEC，IL-6的生成量大大增加（2361pg／ml±299pg／ml），二者存在协同作用（F=69．405，P〈0．01）。结论 HMGB1蛋白可诱导HUVEC释放多种炎性细胞因子；HMGB1诱导IL-6的上调具有时效性和量效性关系，并可协同LPS刺激HUVEC释放IL-6，在脓毒症的发生和发展中起重要作用。; 刘靖华李志杰唐靖刘亚伟赵雷邓鹏姜勇; 关键词：脓毒症细胞因子

His-TAT-mCherry融合蛋白的跨膜转导及其在细胞内的定位被引量：2: 2009年; 目的构建在原核中表达的人类免疫缺陷病毒转录活化因子(HIV-TAT)红色荧光蛋白(mCherry)融合表达载体,荧光显微镜观察HIV-TAT的跨膜转导及其在细胞内的定位,为进一步研究HIV-TAT的跨膜转导机制及其定位提供重要工具。方法采用基因重组技术构建含HIV-TAT以及红色荧光蛋白的质粒pET14b-His-TAT-mCherry,对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,将该质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,使其在体外表达,并进行纯化、除菌。将纯化的His-TAT-mCherry融合蛋白与Hela细胞共同孵育,荧光显微镜下观察。结果PCR、双酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;表达纯化出了高纯度的His-TAT-mCher-ry融合蛋白。荧光显微镜下见Hela细胞中红色荧光蛋白主要分布在胞质中,细胞膜上也有一定分布。结论成功构建了pET14b-His-TAT-mCherry原核表达质粒,纯化了高纯度的His-TAT-mCherry融合蛋白,该蛋白在哺乳动物细胞中有跨膜转导活性,为研究HIV-TAT的跨膜转导机制提供了一个重要的工具。; 陈茜宋方丽刘亚伟杨勤姜勇; 关键词：红色荧光蛋白跨膜转导

高迁移率族蛋白与真核基因表达调控被引量：24: 2005年; 高迁移率族蛋白(high mobility group protein,HMG)是一系列的染色质相关蛋白,广泛存在于真核生物细胞中,含量丰富,因其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的高迁移率而得名.HMG蛋白家族可分为HMGB、HMGA和HMGN三类亚家族,各亚家族有其特征的结构域,这些结构域介导了HMG和DNA或染色质相关区域的相互作用.现已发现这些蛋白质具有多种重要生物学功能,其中几乎所有HMG都可以通过修饰、弯曲或改变染色质/DNA的结构,促进各种蛋白质因子形成大分子复合物来调节基因转录.; 徐佳刘志锋姜勇; 关键词：迁移率聚丙烯酰胺凝胶电泳真核生物细胞染色质 G蛋白 HMG

线粒体转录因子A的研究进展: 2006年; 线粒体转录因子A是HMG蛋白家族中的成员,目前已知除了可以调控线粒体DNA的拷贝数和转录活性、参与细胞凋亡外,还可对人的寿命和疾病产生影响,如甲状腺功能减退性肌病和线粒体脑病等。近来研究还发现m tTFA也可在细胞核内发挥作用,提示核及线粒体基因表达调控的机制上存在偶联或协同作用。本文主要总结近年来关于线粒体转录因子A的研究进展,从其基因学定位和结构、蛋白质结构、基因表达调控及其主要功能做一概述,同时总结不同研究过程中提出的未知问题,并对进一步的研究方向做一展望。; 刘志锋姜勇; 关键词：线粒体转录因子线粒体转录因子A

His标记的小鼠线粒体转录因子A的克隆和表达纯化及其多克隆抗体的制备: 2005年; 目的表达和纯化带His标记的小鼠线粒体转录因子A(mitochondrialtranscriptionfactorA,mtTFA)融合蛋白,并制备mtTFA的特异性多克隆抗体。方法提取正常BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR方法扩增出无信号肽的mtTFA编码序列,克隆入经KpnⅠ和BamHⅠ酶切后的pET14b。酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后用镍离子亲和树脂(Ni2+-NTAHis·BindResin)纯化融合蛋白。用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果成功克隆出了mtTFA的编码序列,并构建了带His标记的小鼠mtTFA融合蛋白的重组表达质粒pET14b/His-mtTFA。表达的融合蛋白经亲和树脂纯化后得到大量的高纯度目的蛋白,获得了高特异性兔抗血清。结论获得了His标记的小鼠mtTFA原核表达载体,纯化得到高纯度的目标蛋白,并制备出高特异性兔抗血清,对进一步研究其生物学功能及调节细胞核同线粒体之间功能协同性的信号通路有重要意义。; 刘志锋邵紫韫徐佳刘靖华邓鹏姜勇; 关键词：线粒体转录因子A 融合蛋白基因克隆蛋白表达

p38L12-TAT融合肽对山梨糖醇引起的ECV304细胞ATF2磷酸化的抑制作用被引量：1: 2006年; 构建p38Loop12(L12)的TAT融合表达载体,纯化原核表达的p38L12融合蛋白并鉴定其在真核细胞内的功能.利用PCR方法分别扩增出p38L12及其“TXY”双磷酸化位点的AF突变体p38L12(AF)片段,克隆入His标记的TATEGFP融合蛋白原核表达载体pHTE(pET14bHisTATEGFP),经酶切、测序鉴定正确后,将重组质粒转化原核表达菌,诱导表达纯化融合蛋白;将融合蛋白加入ECV304细胞后于荧光显微镜下观察并行Western印迹分析,检测融合蛋白的细胞内转导活性;通过检测内源性ATF2磷酸化水平,鉴定高渗刺激下p38L12对内源性p38活性的影响.成功构建了p38L12和p38L12(AF)片段与TAT的融合表达载体,并获得相应的融合蛋白.在ECV304细胞中可见导入的HTEp38L12和HTEp38L12(AF)融合蛋白具有较高的细胞内转导活性和转导效率,并可竞争性抑制高渗刺激对内源性p38的活化.基于HIV1TAT细胞转导系统证实p38L12可竞争性抑制高渗刺激诱导的内源性p38对ATF2的活化,从而发挥对p38激活特异性抑制的功能.; 郭爱华刘志锋李海玉唐靖李志杰刘亚伟龚小卫刘靖华邓鹏姜勇; 关键词：LOOP

视紫质样GPCR中偶联氨基酸的变构通讯网络被引量：2: 2005年; 目的:预测视紫质样GPCR中由Leu125等氨基酸组成的变构通讯网络.方法:基于视紫质蛋白的多序列比对,利用统计偶联分析方法计算该多序列比对中各氨基酸位点的统计能量.然后,提取该多序列比对在Leu125氨基酸位点为异亮氨酸的序列组成子比对,根据子比对计算比对中任一位点和Leu125氨基酸位点的统计偶联能量.结果:根据此统计偶联能量推测出与Leu125偶联的氨基酸位点.结论:通过统计偶联分析推测出的与Leu125偶联的氨基酸位点为研究证实了的视紫质样GPCR中的重要功能位点,它们构成了视紫质样GPCR的变构通讯网络.; 谭小丹卢智勇邓亲恺姜勇; 关键词：视紫质

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国家高技术研究发展计划(2001AA234061)

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