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干细胞移植前TX小鼠有效放疗剂量的探索被引量：3: 2007年; 目的探索TX小鼠适合的干细胞移植前的放疗剂量，为细胞移植治疗用于WD动物模型提供优良的预处理方案。方法雌性7—8周龄TX小鼠分组接受8Gy、7Gy、6Gy和5Gyγ射线放疗，后接受DL雄性小鼠骨髓干细胞移植，移植后追踪12周考察受体鼠的一般情况，移植物抗宿主病（GVHD）、肝功能、血清铜蓝蛋白和供体细胞在受体鼠肝脏存活情况。结果8Gy组和7Gy组100％、6Gy组50％动物于移植后2周内死亡；5Gy组动物12周内完全存活，且GVHD反应轻微，移植后12周时肝功能和铜蓝蛋白较6Gy组改善更明显；从供体细胞在受体鼠肝脏中的存活情况来分析，5Gy和6Gy组间相比无统计学意义。结论TX小鼠模型用于细胞移植研究的适合预处理放疗剂量是5Gy。; 陈曦国宁王莹梁秀龄丰岩清石铸丁建新黄劭敏; 关键词：肝豆状核变性干细胞小鼠

ATP7B基因治疗对Wilson病小鼠模型肝功能的影响被引量：2: 2008年; 目的:探讨重组真核表达质粒pcDNA3.0/ATP7B基因治疗对TX小鼠肝功能的影响。方法:TX小鼠18只,随机分为6组,采用质粒和脂质体混合后进行尾静脉注射的方式,分别给予pcDNA3.0/APT7B 0、10、20、50、100、150μg,治疗3 d后测定其肝铜含量,确定最佳治疗剂量。然后选择36只TX小鼠,随机分为生理盐水(NS)组、pcDNA3.0组和pcDNA3.0/ATP7B组,分别以NS、PCDNA3.0、pcDNA3.0/ATP7B进行治疗,于治疗后第0、3、7、14天抽血检测ALT。结果:取100μg为治疗剂量;pcDNA3.0/APT7B组与NS组及pcDNA3.0组比较,于治疗后第3、7、14天ALT显著下降(P<0.05),以第3天下降最明显。结论:ATP7B基因重组真核表达质粒pcDNA3.0/ATP7B对TX小鼠肝功能有改善作用。; 汤其强梁秀龄陈曦徐评议; 关键词：ALT 基因治疗

肝损伤Balb-c小鼠用于细胞移植治疗的有效亚致死放疗剂量被引量：1: 2007年; 目的:探索肝损伤Balb-c小鼠适合的亚致死性放疗剂量,为细胞移植治疗用于肝病动物模型提供预处理方案。方法:实验于2004-10/2005-06在中山大学附属第一医院神经科实验室和中山大学实验动物中心完成。供体鼠为48只雄性Balb-c小鼠,受体鼠为24只雌性Balb-c小鼠。24只雌性受体鼠以2-乙酰氨基芴法建立肝损伤模型,根据γ射线照射剂量按随机数字表法分为4组,即γ射线8Gy,7Gy,6Gy和5Gy照射组,每组6只。放疗后当天接受带有CM-Dil荧光标记的供体雄性小鼠骨髓干细胞移植,每只受体小鼠移植骨髓干细胞1.0×107个。移植后追踪12周,观察受体鼠的一般情况及移植物抗宿主病反应,检测干细胞示踪剂CM-DiI(积分吸光度值)和供体雄性Sry基因(Sry与β-actin扩增产物积分吸光度比值)在受体鼠肝脏中的表达,以明确供体细胞在受体鼠肝脏存活情况。结果:放疗后γ射线8Gy照射组小鼠在放疗后4～10d内全部死亡,γ射线7Gy照射组死亡4只,共14只小鼠进入结果分析。①移植后受体鼠的移植物抗宿主病情况比较:γ射线7Gy照射组移植后第1周时移植物抗宿主病症状明显,4周后完全消失;γ射线5,6Gy照射组移植物抗宿主病症状轻微,持续3周消失。②各组受体小鼠肝脏中的CM-DiI分布情况比较:γ射线5,6,7Gy照射组CM-DiI积分吸光度值分别为2.86±0.72,2.65±0.55,2.53±0.42,3组相比差异无显著性意义(P>0.05)。③各组受体小鼠肝脏中雄性Sry基因的表达情况比较:γ射线7,6和5Gy照射组Sry与β-actin扩增产物积分吸光度比值分别为0.194±0.015,0.213±0.031,0.208±0.027,各组间差异无显著性意义(P>0.05)。结论:鉴于外周血细胞被供体细胞取代量随着放疗剂量增加而增加的理论,肝损伤Balb-c小鼠模型用于细胞移植研究的适合亚致死性放疗剂量是6Gy。; 陈曦丰岩清王莹石铸黄东锋黄劭敏梁秀龄; 关键词：肝疾病干细胞移植放射治疗剂量

pcDNA3.1(+)/ATP7B对TX小鼠成纤维细胞铜代谢的影响被引量：3: 2005年; 【目的】研究Wilson病野生型基因ATP7BcDNA真核表达载体pcDNA3.1(+)/ATP7B对TX小鼠成纤维细胞铜代谢的影响。【方法】构建人Wilson病野生型基因ATP7BcDNA的真核表达载体pcDNA3.1(+)/ATP7B。随机选取TX小鼠20只构建TX小鼠的成纤维细胞模型,平行分成3组,一组未加质粒,另两组分别加入等量pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(+)/ATP7B,观察对细胞模型铜代谢的影响。并进行免疫组化实验以观察表达是否增强。【结果】实验前未加质粒组,加入pcDNA3.1(+)组与加入pcDNA3.1(+)/ATP7B组细胞内铜含量分别为(78±20),(77±17),(75±13)ng/mg;实验后分别为(76±20),(74±13),(40±10)ng/mg。与未加质粒组和加入pcDNA3.1(+)相比,加入pcDNA3.1(+)/ATP7B组的细胞内铜含量显著下降(P皆<0.01),其细胞内ATP7B蛋白的表达明显增强。【结论】Wilson病真核表达载体pcDNA3.1(+)/ATP7B在TX小鼠成纤维细胞水平上确有排铜作用。; 汤其强梁秀龄陈曦徐评议王莹徐琳; 关键词：PCDNA3.1(+)鼠成纤维细胞铜代谢观察表实验前

pcDNA3.0/ATP7B对TX小鼠肝铜代谢影响被引量：1: 2008年; 目的探索以重组真核表达质粒pcDNA3.0/ATP7B进行TX小鼠基因治疗的初步疗效。方法以质粒和脂质体混合后进行尾静脉注射,分别给予TX小鼠pcDNA3.0/APT7B 0、10、20、50、100、150μg,3 d后测定其肝铜含量(ng/mg,即每mg干重的肝组织中铜的含量),确定合适的治疗剂量。然后随机选取36只TX小鼠,随机分成3组,即注射生理盐水组、注射pcDNA3.0组、注射pcDNA3.0/ATP7B组。进行肝脏组织RT-PCR、W estern b lot检测和肝铜含量测定。结果根据预实验结果,取pcDNA3.0/APT7B 100μg/只为治疗剂量。RT-PCR和W estern b lot结果显示,加入pcDNA3.0/ATP7B组于加入后第3、7、14天均可见阳性条带。但以加入第3天时最明显。加入生理盐水组和加入pcDNA3.0质粒组均未见阳性条带。加入pcDNA3.0/APT7B组与生理盐水组及pcDNA3.0组比较,于加入第3、7天肝铜含量显著下降(P<0.05),以第3天下降最明显。加入第14天肝铜含量无显著下降,P>0.05。结论ATP7B基因重组真核表达质粒pcDNA3.0/ATP7B对TX小鼠的铜代谢有改善作用。; 汤其强梁秀龄陈曦徐评议; 关键词：肝豆状核变性转染基因疗法小鼠

1～6月龄TX小鼠铜代谢和肝损害情况研究被引量：14: 2005年; 【目的】研究不同月龄TX小鼠的铜代谢情况、肝脏功能和病理学损害特点,为以TX鼠为模型的研究在选择不同月龄动物方面提供适合的时间点。【方法】选取1～6月的每月龄TX小鼠和同系DL小鼠雌雄各3只,分别作为病例组和对照组,测定肝、脑、肾、血清中的金属铜含量,测定血清铜蓝蛋白及谷草转氨酶等指标,肝脏标本HE染色观察组织病理学改变,电镜下观察超微结构。【结果】TX小鼠自第2月起肝、脑的干体质量铜含量较对照组明显增高(P<0.05),肝脏增高幅度更甚,至4月龄时两组差异尤为显著,同期肾铜增高及血清铜降低与对照组相比有统计学意义(P<0.05);血清铜蓝蛋白明显降低;转氨酶的升高以第5月时为著;病理改变光镜下主要为变性坏死,胞核空泡样变,电镜下见线粒体、溶酶体中大量电子致密物沉积,以第4月时最重。【结论】理想的Wilson病模型和肝损害动物模型,症状前治疗的探索可选用1月龄的TX鼠,出现临床症状后治疗的探索应选用2月龄小鼠,病情高峰时期的实验可考虑选用4、5月龄的动物。; 陈曦梁秀龄汤其强丰岩清石铸陈松林黎锦如; 关键词：肝豆状核变性疾病模型动物

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国家自然科学基金(3040147)

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