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人汗腺腺上皮细胞快速分离培养的初步研究被引量：11: 2006年; 目的体外分离、培养及鉴定人汗腺腺上皮细胞,观察其生长特性。方法在解剖显微镜下挑取汗腺,用胶原酶消化法将其消化成单个细胞,接种后观察其生长情况,并用上皮膜抗原、角蛋白K19和肌动蛋白进行免疫组化鉴定。结果细胞生长良好,约3周左右长满瓶底,呈铺路石样生长。免疫组化示抗上皮膜抗原、角蛋白K19阳性,抗肌动蛋白阴性,证明分离培养的细胞为汗腺腺上皮细胞。结论建立了一种体外快速分离和培养人汗腺腺上皮细胞的方法。; 雷霞伍津津鲁元刚朱堂友; 关键词：汗腺上皮细胞

人脐静脉内皮细胞的分离培养和冻存被引量：4: 2006年; 目的研究体外分离、培养、冻存人脐静脉内皮细胞的有效方法以获得大量人脐静脉内皮细胞,为构建含血管的组织工程皮肤提供种子细胞。方法新鲜脐带内灌注胶原酶消化,获得内皮细胞,用含20%胎牛血清的M199液进行培养。倒置显微镜观察细胞形态,结合Ⅷ因子免疫组化鉴定细胞来源。内皮细胞加入10%甘油的冻存液,分别置于液氮保存1周和4周,复苏后血球计数板计数,绘制生长曲线。结果脐静脉内灌注胶原酶法可获取高纯度的内皮细胞,与未冻存细胞相比,复苏的细胞活力保持在80%以上,复苏后生长曲线与未冻存细胞相似。结论脐静脉灌注酶消化法可获取大量高纯度的内皮细胞。冻存的内皮细胞复苏后仍保持较高的体外增殖能力,可作为制备含血管的组织工程皮肤的种子细胞来源。; 周凌伍津津鲁元刚朱堂友杨亚东; 关键词：脐静脉内皮细胞细胞冻存

培养基钙浓度对复方壳多糖组织工程皮肤基底膜构建的形态学研究被引量：7: 2007年; 目的寻找最适于组织工程皮肤生长及基底膜构建的体外培养基钙浓度。方法按照鲁元刚等建立的方法制备复方壳多糖组织工程皮肤,根据培养基钙浓度不同,分为1.00、1.45、1.65和1.95mmol/L四组。在37℃、5%CO2及90%以上湿度孵箱内浸没培养3d后,将培养物置于不锈钢筛网上进行气-液界面三维培养,每天换液1次。培养7、15d,行HE、PAS染色观察组织工程皮肤的组织学特性;并利用免疫组织化学染色对基底膜的主要成分——型胶原进行观察,评价基底膜构建情况。结果各组组织工程皮肤组织学观察类似正常皮肤,有分化良好的表皮和致密真皮,但1.95mmol/L组表皮分化较其他组更好;1.00、1.45及1.65mmol/L组角化层外侧常伴未角化的角质形成细胞,1.95mmol/L组表皮细胞角化完全,且与颗粒层细胞结合牢固。PAS染色显示各组真、表皮间有紫红色带状结构;免疫组织化学染色显示真皮与表皮间型胶原反应呈阳性,且1.95mmol/L组阳性反应强于1.00mmol/L组。结论钙浓度为1.95mmol/L的培养基最适合于复方壳多糖组织工程皮肤生长及基底膜构建。; 鲁元刚伍津津雷霞张教扬朱堂友杨桂红杨涛; 关键词：组织工程皮肤壳多糖培养基钙浓度

人角质形成细胞库的建立被引量：9: 2004年; 目的　探索人皮肤表皮细胞分离、培养、传代、冻存及复苏技术。方法　采用细胞培养技术及免疫组化染色鉴定技术。结果　采用细胞培养技术体外分离培养了小儿包皮表皮细胞 ,培养的表皮角质形成细胞 ,经冻存、复苏后 ,此角质形成细胞仍既能增殖 ,又能分化 ,生长状态与新鲜分离的角质形成细胞相类似。; 李伟伍津津吴国选朱堂友鲁元刚; 关键词：表皮细胞细胞培养细胞库

壳多糖组织工程皮肤治疗糖尿病足性溃疡被引量：7: 2011年; 目的比较壳多糖组织工程皮肤、亲水性敷料(多爱肤)和传统纱布对糖尿病足性溃疡治疗疗效。方法将53例糖尿病足皮肤溃疡患者随机分为多爱肤组、壳多糖组及常规治疗组,以溃疡愈合率及平均愈合时间为观察指标。结果多爱肤组愈合率与常规治疗组比较,差异有统计学意义(P<0.05);壳多糖组愈合率与多爱肤组相比,差异有统计学意义(P<0.05);常规治疗组与多爱肤组及壳多糖组比较,平均愈合时间差异有统计学意义(P<0.05),多爱肤组与壳多糖组比较,平均愈合时间无统计学差异(P>0.05)。结论多爱肤组可提高溃疡愈合率,缩短平均愈合时间;壳多糖组织工程皮肤与多爱肤相比较能显著提高溃疡愈合率。; 吕波吴绮楠陈兵谭明红邓武权梁自文伍津津; 关键词：多爱肤糖尿病足溃疡

不同类型胶原蛋白构建的组织工程皮肤收缩情况研究: 2009年; 目的研究不同类型及不同浓度胶原蛋白构建的组织工程皮肤随着培养时间的增加皮肤收缩的情况。方法分别采用不同浓度牛肌腱胶原蛋白和鼠尾胶原蛋白构建组织工程皮肤,测量组织工程皮肤的收缩度,采用Wilcoxon Signed Ranks Test和Friedman Test对结果进行分析。结果牛肌腱胶原蛋白构建的组织工程皮肤收缩度要小于鼠尾胶原蛋白构建的组织工程皮肤(P<0.01);不同浓度胶原蛋白构建的组织工程皮肤其收缩度也不相同(P<0.01)。组间比较差异有显著性(P<0.01)。结论牛肌腱胶原蛋白构建的组织工程皮肤在保持其形态稳定性上显著优于鼠尾胶原蛋白构建的组织工程皮肤。牛肌腱胶原构建的组织工程皮肤,胶原浓度越高其形态稳定性越好。; 宋维旭伍津津赵晓云朱堂友杨桂红

复方壳多糖组织工程皮肤分泌b-FGF的初步研究被引量：1: 2007年; 目的研究组织工程皮肤培养液中碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)的分泌情况。方法收集复方壳多糖组织工程皮肤制备过程中复方壳多糖皮肤替代物(SE)、复方壳多糖真皮替代物(DE)、单层角质形成细胞(KC)以及复方壳多糖DE与KC在transwell内共培养的培养液样本,双抗体夹心ELISA法测定其中b-FGF分泌量。结果b-FGF分泌量依次为单层KC<复方壳多糖DE/KC共培养<复方壳多糖SE<复方壳多糖DE。结论角质形成细胞能调控成纤维细胞分泌b-FGF能力,有利于伤口愈合。; 王亚洲伍津津朱堂友李元朝张民众; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子组织工程皮肤成纤维细胞角质形成细胞

天狼猩红-偏振光检测组织工程皮肤中胶原的观察被引量：7: 2007年; 目的研究组织工程皮肤中胶原合成及分泌情况,并与正常皮肤对照。方法采用苦味酸-天狼星红染色,偏振光显微镜观察,Photoshop半定量分析,观察Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。结果正常皮肤和组织工程皮肤的真皮中都有Ⅰ、Ⅲ型胶原,在正常皮肤的真皮中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量分别是98.51±11.28、33.93±3.90;培养成熟的组织工程皮肤中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量分别是91.42±3.82、30.75±2.29,二者相比差异无统计学意义(P>0.05)。组织工程皮肤培养8、15、30d,组织内Ⅰ型胶原分别为50.75±4.22、63.57±6.87、91.42±3.82,Ⅲ型胶原分别为16.90±1.64、23.65±4.08、30.75±2.29,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论(1)培养成熟的组织工程皮肤与正常人皮肤中胶原含量及分布无明显差异;(2)组织工程皮肤不同的培养时期胶原的含量及种类有明显差异。; 宋维旭伍津津鲁元刚杨涛; 关键词：组织工程皮肤天狼猩红偏振光胶原

复方壳多糖组织工程皮肤的组织学特性被引量：3: 2007年; 目的评价制备的复方壳多糖组织工程皮肤在组织学方面的特性，为其修复皮肤缺损创面提供实验依据。方法通过苏木精-伊红（HE）染色、高碘酸-希夫（PAS）染色、免疫组织化学染色及电镜，观察组织工程皮肤的组织学特征，包括表皮、真皮及两者的连接结构基底膜。结果制备的复方壳多糖组织工程皮肤表皮细胞增殖活跃，分层分化良好，厚约150μm，真皮层细胞生长正常，排列有序。PAS染色示真表皮间有均匀红染的条带出现，免疫组织化学染色结果显示Ⅳ型胶原、Ⅶ型胶原、层黏蛋白反应阳性，在电镜下可见角质形成细胞间大量桥粒，基底层内侧较多半桥粒，与机体皮肤结构相似。结论复方壳多糖组织工程皮肤组织结构良好，符合新型皮肤替代物在治疗皮肤缺损时的组织学要求。; 鲁元刚伍津津张教扬雷霞杨桂红杨涛; 关键词：壳多糖组织工程皮肤基底膜层黏蛋白

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重庆市科技攻关计划(7897)

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