国家高技术研究发展计划(2007AA021501)
- 作品数：19 被引量：60H指数：5
- 相关作者：朱旭东陶文沂潘皎程龙毕建男更多>>
- 相关机构：江南大学南开大学无锡卫生高等职业技术学校更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学化学工程更多>>
- 在南方红豆杉中接种美丽镰刀菌提高紫杉醇产量的研究被引量：1
- 2008年
- 以美丽镰刀菌和南方红豆杉为试验材料,通过在南方红豆杉植株中接种美丽镰刀菌,使两者发生相互作用,达到短期的共生平衡,二年生组和四年生组紫杉醇产量分别较接种前提高55.06%和22.08%,经t检验,试验组与对照组紫杉醇产量变化有显著差异。
- 程龙周红张梁张兰芳吴小瑜张向阳严琳诸戌娴
- 关键词：南方红豆杉紫杉醇
- 耦合培养对紫杉醇产量的影响被引量：6
- 2008年
- 以美丽镰刀菌和东北红豆杉细胞为实验材料,通过耦合式生物反应器进行耦合培养,以紫杉醇作为研究指标,研究内共生真菌与宿主植物细胞的的关系。经耦合培养,两种细胞的紫杉醇产量均有不同程度的提高,美丽镰刀菌达29倍,相应的东北红豆杉悬浮细胞增加了3.5倍。
- 程龙张梁陶文沂陶冠军周红张兰芳
- 关键词：紫杉醇东北红豆杉
- 美丽镰刀菌与固定化东北红豆杉的共生培养被引量：3
- 2008年
- 采用固定化培养法模拟东北红豆杉（Taxus cuspidate）和美丽镰刀菌（Fusarium mairei K178）的共生环境，对其相互作用进行初步研究以期提高各自紫杉醇产量。共培养条件为：海藻酸钠浓度2％（M／V），Zcuspidate细胞包埋量0．15g／ml，CaCl2浓度4％（M／V），凝胶直径为3～3．5mm，钙化0．5h，以40ml接种量接入装液量为70ml／250ml摇瓶的改良MS培养基，25℃、160r／min振荡黑暗培养，第9d接入10％（V／V）对数期的F．mairei，10d后收获。结果表明，F．mairei对rcuspidate细胞的生长有强烈抑制作用，能诱导紫杉醇等次生代谢物向胞外分泌；Fmairei与rcuspidate的相互作用对共生培养物的紫杉醇产量也有显著影响。
- 周玉洁程龙陶文沂周红
- 关键词：东北红豆杉固定化紫杉醇共培养
- 三种红豆杉属植物中紫杉烷类化合物含量的检测与分析被引量：4
- 2010年
- 优化色谱条件,利用高效液相对天然生长的南方红豆杉、中国红豆杉和东北红豆杉枝条中的3种紫杉烷类物质含量进行了检测和分析。结果表明:3种红豆杉中,紫杉烷类化合物总含量的高低依次为:东北红豆杉为0.427mg·g-1、南方红豆杉为0.396mg·g-1、中国红豆杉为0.350mg·g-1;紫杉醇含量的高低依次为:南方红豆杉为0.153mg·g-1、东北红豆杉为0.142mg·g-1、中国红豆杉为0.0102mg·g-1。该方法把3种紫杉烷类化合物:10-脱乙酰巴卡亭III(10-deacetyl-baccatinIII)、巴卡亭III(baccatinIII)和紫杉醇(Taxol)置于同一色谱条件下检测,以比较不同种类紫杉烷类化合物的含量,为红豆杉资源的开发和利用奠定了基础。
- 朱慧芳郑文龙王玉亮冯小路周选围
- 关键词：红豆杉紫杉烷类化合物高效液相色谱
- 一株柏树内生真菌产生抗肿瘤药物紫杉醇被引量：11
- 2007年
- 报道了一株从柏树中分离到的产抗癌药物紫杉醇的菌株,样品采自江苏,是第一例柏树内生菌产紫杉醇的报道,表明产紫杉醇真菌的多样性.简化和改进了提取紫杉醇的方法,可以快速得到一定量的紫杉醇满足TLC 分析的需要,该方法提高了处理样品的速度,节省了时间和试剂消耗等,适用于大量样品的初筛.
- 严冰毕建男纪元王文婕赵阳朱旭东
- 关键词：紫杉醇薄层层析高效液相色谱
- 紫穗槐-4,11-二烯合酶基因在酵母工程菌中具有协同作用被引量：2
- 2011年
- 为了构建高产的紫穗槐-4,11-二烯酵母工程菌,主要探究了含紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的不同表达载体在酵母工程菌中是否存在协同效应。首先构建了含紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的酵母表达载体pGADADS,分别将pGADADS和pYeDP60/G/ADS转入酿酒酵母W303-1B和WK1中,获得6种能产生紫穗槐-4,11-二烯的酵母工程菌:W303B[pGADADS]、W303B[pYGADS]、W303B[pYGADS+pGADADS]、WK1[pGADADS]、WK1[pYGADS]和WK1[pYGADS+pGADADS]。对上述6种酵母工程菌进行发酵培养,通过GC-MS对发酵产物进行检测。结果显示,这6种酵母工程菌均能产生紫穗槐-4,11-二烯,其产率随着紫穗槐-4,11-二烯合酶基因拷贝数的增加而上升,且产生的紫穗槐-4,11-二烯对酵母工程菌没有产生毒性。导入多种ADS重组质粒后酵母工程菌的紫穗槐-4,11-二烯产率显著高于多个单质粒工程菌产生的紫穗槐-4,11-二烯之和。上述结果表明,同一宿主细胞中多种含紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的表达载体之间存在明显的协同效应,这为构建青蒿素前体高产工程菌提供了一种思路。
- 孔建强支晓慧王伟程克棣朱平
- 关键词：青蒿素
- 紫穗槐-4,11-二烯合酶及其代谢工程研究进展被引量：4
- 2009年
- 紫穗槐-4,11-二烯合酶催化FPP(farnesyl pyrophosphate,法尼基焦磷酸)生成青蒿素前体紫穗槐-4,11-二烯,是青蒿素生物合成途径中的关键酶。本文对紫穗槐-4,11-二烯合酶的分子生物学和代谢工程研究进行了综述。紫穗槐-4,11-二烯合酶编码基因及其相关核酸序列已经得到了克隆。紫穗槐-4,11-二烯合酶cDNA全长1641bp,编码546aa。紫穗槐-4,11-二烯合酶最适pH范围较宽,但需要二价金属离子作为辅酶才能发挥作用,其产物和底物的特异性不高。在紫穗槐-4,11-二烯合酶作用下,FPP首先进行的是1,6-合环,然后是1,10-合环,形成紫穗槐-4,11-二烯。由于紫穗槐-4,11-二烯合酶在青蒿素生物合成中具有重要的意义,自从其基因被克隆测序后,先后被导入E.coli、S.cereviseae、烟草、拟南芥和A.nidulans,获得了能产生紫穗槐-4,11-二烯的各种工程菌或细胞,研究通过不同方式提高工程菌中紫穗槐-4,11-二烯产量的方法。
- 孔建强黄勇沈君豪王伟程克棣朱平
- 关键词：青蒿素工程菌
- 美丽镰刀菌在南方红豆杉中的生长动力学研究被引量：1
- 2011年
- 在南方红豆杉上接种美丽镰刀菌能提高其紫杉醇产量的基础上,研究植物体内共生真菌在宿主植株中的生长规律,通过在南方红豆杉中接种美丽镰刀菌,并分别于4～14 d内分离五年生南方红豆杉中的美丽镰刀菌,显示其在进入南方红豆杉植株的前期是沿维管束垂直上行生长,生长速率为y=0.004 4 x3-0.106 3 x2+1.010 2 x-1.986 7,R2=0.987 1。
- 程龙吴小瑜韩元喜
- 关键词：南方红豆杉紫杉醇生长动力学
- 纤维素降解球毛壳菌NK-102的高效遗传转化方法
- 2011年
- 【目的】在球毛壳菌(Chaetomium globosum)NK-102中,建立菌株特异性转化体系。【方法】构建新的抗性标记pUCATPH-Pgap,转化效率优于pUCATPH和pCM768。建立了PEG-原生质体和根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105介导的两种转化方法。【结果】原生质体转化效率为30-50个转化子/10μg DNA,抗性标记pUCATPH-Pgap效率最高。EHA105介导转化率达到3.2×102转化子/107孢子。Southern blot证明DNA随机整合于基因组中,转化子抗性稳定。【结论】两种转化体系的建立为筛选高效利用纤维素的球毛壳菌突变株奠定了基础。
- 郝晓冉纪元陈煌毕建男潘皎朱旭东
- 关键词：球毛壳菌纤维素根癌农杆菌
- 粘细菌AHB103-1代谢产物抗肿瘤活性的初步研究
- 2011年
- 本文对粘细菌AHB103-1的次级代谢产物A组分的抗肿瘤活性和作用机制进行了初步的探讨。采用MTT方法研究了它对HepG2、MDA-MB-231、293T和B16四种肿瘤细胞的作用浓度和作用时间,并与临床上应用的几种抗肿瘤药物对HepG2细胞的作用效果进行了比较;利用荧光显微镜和扫描电镜观察研究了它对HepG2细胞的作用机制。结果表明:A组分的抗癌活性比泰素低,却高于表柔比星、依立替康和奥沙利铂。当样品浓度≥15μg/mL时,对各种肿瘤细胞株的抑制率均达到90%以上。随着样品浓度的降低,对各细胞株的抑制率均表现下降趋势。当样品浓度为30μg/mL时,对四种细胞株作用时间选择24 h即有理想效果。当样品浓度为1.88μg/mL时,对B16、293T和HepG2细胞,作用时间选择48 h较好;而对MDA-MB-231,作用时间选择72 h较好。荧光显微镜和扫描电镜观察的结果分别从形态学上证明了A组分具有引起HepG2细胞凋亡的活性。
- 徐凤陶文沂
- 关键词：次级代谢产物抗肿瘤活性抑制率细胞凋亡
