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幽门螺杆菌Catalase基因的克隆、表达及其抗原性鉴定被引量：7: 2006年; 目的：构建含人幽门螺杆菌（Hpylori，Hp）过氧化氢酶（catalase，KatA）编码基因的重组质粒，测定、分析其核酸序列，并在E.coli中表达，研究其抗原性。方法：应用PCR技术从HpDNA染色体中扩增KatA编码基因片段，将其T-A克隆和测序，并与GenBank公布的其他Hp菌株的基因序列比较，再将目的基因插入至融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达，用GST亲和层析对其进行纯化。纯化产物用于对29株小鼠抗Hp-全菌单克隆抗体（mAb）的鉴定及与Hp啊感染患者血清进行Western blot。结果：KatA基因全长为1 515 bp，并在GenBank上登录（No．DQ333889），与GenBank公布的其他Hp菌株的核酸的同源性为96％～97％，表达的KatA融合蛋白的相对分子质量（Mr）为85 000，29株小鼠抗Hp全菌mAb中有4株mAb是针对KatA的，表达产物可被Hp感染患者的血清特异性识别。结论：重组KatA具有较好的抗原性，为坳检测试剂和疫苗的研究奠定了基础。; 李妍宁云山龙敏董文其李明; 关键词：幽门螺杆菌 CATALASE 克隆基因表达抗原性

幽门螺杆菌标准株NCTC11639 HSPA基因的克隆、表达及其抗原性的鉴定: 2006年; 目的:构建含人幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)热休克蛋白A(heatshockproteinA,HSPA)编码基因的重组质粒,测定、分析其核酸序列,并在E.coli中表达,研究其抗原性。方法:应用PCR技术从HpDNA染色体中扩增HSPA编码基因片段,将其T-A克隆和测序,并与GenBank公布的其他Hp菌株基因序列比较,再将目的基因克隆至表达载体pGEX-4T-1上进行表达和纯化,用Westernblot检测产物的抗原性并用ELISA法对29株小鼠抗Hp全菌单克隆抗体进行鉴定。结果:HSPA基因全长351bp(GenBank登录号为DQ141574),核酸同源性为96%～98%,表达的HSPA融合蛋白分子量约为41ku,表达产物可被Hp感染患者血清识别,29株抗小鼠Hp全菌单克隆抗体中有4株是针对HSPA抗原的。结论:重组HSPA具有较好的抗原性,为Hp疫苗的研究奠定基础。; 李妍宁云山龙敏董文其李明; 关键词：热休克蛋白质类克隆抗原性幽门螺杆菌

幽门螺杆菌NCTC11639标准株lpp20基因的克隆、表达及其抗原性的鉴定被引量：1: 2006年; 李妍宁云山龙敏董文其李明; 关键词：幽门螺杆菌标准株抗原性 LPP20 基因工程技术免疫保护性

幽门螺杆菌尿素酶B基因的克隆、表达及其抗原性的鉴定被引量：1: 2006年; 目的构建含人幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B(UreaseB,UreB)编码基因的重组质粒,测定、分析其核苷酸序列,并在E.coliTop10中表达,研究其抗原性。方法应用PCR技术从HpDNA染色体中扩增UreB编码基因片段,将其T-A克隆和测序,并与GenBank公布的其它Hp菌株基因序列比较,再将目的基因克隆至表达载体pGEX-4T-1中进行表达,用GST亲和层析对其进行纯化,纯化产物用于对29株小鼠抗Hp-全菌单克隆抗体(mAb)的鉴定及与Hp感染患者血清进行Westernblot。结果扩增的UreB基因全长1704bp,并在GenBank上登录(No.DQ141576),与GenBank公布的其它Hp菌株的核酸同源性为97%～99%,表达的UreB融合蛋白的相对分子量为91000。29株小鼠抗Hp-全菌mAb中有6株是针对UreB抗原的,纯化产物可被病人血清和抗UreB的鼠单克隆抗体识别。结论重组UreB具有较好的抗原性,为Hp检测诊断和疫苗的研究奠定了基础。; 李妍宁云山龙敏董文其李明; 关键词：幽门螺杆菌尿素酶B 抗原性

抗幽门螺杆菌单克隆抗体的制备与鉴定被引量：10: 2006年; 目的制备抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)全菌的单克隆抗体并对其特异性进行初步鉴定。方法用培养的幽门螺杆菌超声破菌后的上清和沉淀为抗原分别免疫BALB／c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体并测定抗体免疫球蛋白亚类、效价及亲和力,用重组表达的Hp Lpp20、HspA、urease A、CagA、urease B、catalase蛋白鉴定抗体。结果共获得34株抗Hp的单克隆抗体,其中抗上清31株和抗沉淀3株,34株抗体中针对Lpp20、HspA、urease A、CagA、urease B、catalase蛋白的抗体分别为3、2、4、1、5、2株,目前已鉴定的部分单克隆抗体的亚类均为IgGl,细胞培养上清的效价为1:16-1:32,腹水效价为1:32000～1:64000,抗体亲和常数介于1×10-10mol／L-5．2×10-12mol／L。结论获得特异性针对幽门螺杆菌的单克隆抗体,为幽门螺杆菌的诊断和疫苗研究奠定基础。; 李妍宁云山洪燕华刘宜楚罗军龙敏董文其李明; 关键词：幽门螺杆菌单克隆抗体疫苗杂交瘤技术

幽门螺杆菌尿素酶A基因的克隆、表达及其抗原性的鉴定被引量：2: 2006年; 目的构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)标准株NCTC11639尿素酶A(UreaseA,UreA)编码基因的重组质粒,测定、分析其核酸序列,并在E.coli中表达,研究其抗原性。方法应用PCR技术从HpDNA染色体中扩增UreA编码基因片段,将其克隆至pMD18-T载体上进行序列测定,并与GenBank上公布的其它Hp菌株基因序列进行比较,再将目的基因克隆至表达载体pGEX-4T-1上进行表达和纯化,用Western-blot检测产物的抗原性并用于对24株抗Hp全菌小鼠单克隆抗体的鉴定。结果扩增的UreA基因全长675bp(登录号为DQ141577),与GenBank上公布的其它Hp菌株的UreA核酸序列的同源性为95%～98%,表达的UreA融合蛋白分子量为52000,表达产物可被病人血清和全菌免疫的小鼠血清识别,29株抗Hp小鼠单克隆抗体中有4株是针对UreA抗原的。结论重组UreA具有较好的抗原性,为Hp检测试剂和疫苗的研究奠定基础。; 李妍宁云山龙敏董文其李明; 关键词：幽门螺杆菌克隆基因表达抗原性

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国家科技攻关计划(2001CB510208)