国家自然科学基金(31170608)
- 作品数：13 被引量：31H指数：4
- 相关作者：李孟楼张正青郝春凤王化鹏张伟更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学武威市林业科学研究院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 花绒寄甲Caspase-1基因在不同虫态的表达被引量：1
- 2015年
- 为明确花绒寄甲Caspase-1基因及其蛋白酶活性在不同虫态中的表达特性,采用RT-PCR和Caspase酶活测定方法进行研究。结果表明:Caspase-1酶活性变化趋势与其基因表达趋势基本一致,Caspase-1基因及其蛋白酶在5龄幼虫期和蛹期有较高的活性,且其活性高于所有成虫期;成虫期随存活时间的延长,Caspase-1酶活性总体呈现增长趋势。Caspase-1及其酶活在不同虫态中表达规律的揭示,为研究Caspase-1基因与花绒寄甲生理代谢和寿命关系提供依据。
- 屈赟赵乐乐高盼盼任春艳翟俊伟李孟楼
- 关键词：花绒寄甲表达量
- 花绒寄甲Prx6基因的确定和表达分析被引量：1
- 2016年
- 【目的】获得花绒寄甲过氧化物还原酶6基因(Prx6),分析其在花绒寄甲发育和衰老过程中相对表达量的变化,以进一步揭示花绒寄甲衰老的分子机制。【方法】基于花绒寄甲成虫转录组数据库获得Prx6基因,并对其进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,分析Prx6在花绒寄甲发育和衰老阶段的表达量。【结果】从花绒寄甲成虫转录组数据库中获取了2个Prx6基因,分别命名为Prx6-1和Prx6-2,其开放阅读框长度依次为654和672bp,分别编码218和224个氨基酸。多序列比对和系统发育分析表明,这2个基因均属于1-Cys家族,并且与鞘翅目的赤拟谷盗Prx6-1和Prx6-2的同源性最高,分别为71%和82%。发育阶段的定量结果表明,Prx6-1在2龄幼虫、蛹和初孵成虫体内的表达量较高,在6龄幼虫体内的表达量最低;Prx6-2在2龄和4龄幼虫体内表达量较高,在6龄幼虫体内表达量最低。在成虫衰老过程中,2个Prx6基因表达量整体上呈现出随羽化后时间的延长而增加的趋势。【结论】花绒寄甲Prx6基因影响其发育,特别是在2龄和6龄幼虫期。在花绒寄甲衰老过程中,2个Prx6基因的表达量随其羽化后时间的延长而升高。
- 郭瑞坚郝春凤张正青张伟王化鹏李孟楼
- 关键词：花绒寄甲实时荧光定量PCR成虫
- 不同人工饲料对花绒寄甲成虫肠道微生物群落组成的影响被引量：4
- 2013年
- 研究不同饲料对花绒寄甲[Dastarcus helophoroides(Fairmaire)]成虫肠道微生物区系的影响。人工配制4种花绒寄甲成虫饲料(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ),主要成分分别为蚕蛹粉、蟋蟀粉、替代寄主粉和蚂蚁粉,分别饲养花绒寄甲成虫。无菌取其肠道,进行肠道细菌16SrDNA全长PCR扩增和16SrDNA V3可变区的PCR扩增,扩增产物经16SrDNA作为分子标记的变性梯度凝胶电泳(DGGE)分离后再进行相似性分析。结果表明,从成虫肠道共得到11种细菌,分别属于德库菌属(Desemzia)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、不粘柄菌属(Asticcacaulis)、纤维弧菌属(Cellvibrio)、动性杆菌属(Planomicrobium)、橙单胞菌属(Aurantimonas)和埃希氏菌属(Escherichia)。经相似性分析后,饲喂饲料Ⅰ(蚕蛹粉)和饲料Ⅱ(蟋蟀粉)的成虫肠道细菌区系相似性为64%;饲喂饲料Ⅲ(替代寄主粉)和饲料Ⅳ(蚂蚁粉)的成虫肠道细菌区系的相似性为61%。饲料Ⅰ、Ⅱ喂养的成虫和饲料Ⅲ、Ⅳ喂养的成虫肠道菌群差异性较大,相似性为21%。可见,不同饲料对花绒寄甲成虫肠道微生物群落组成有很大的影响。
- 王伟伟何彩李孟楼
- 关键词：花绒寄甲成虫饲料DGGE肠道微生物区系
- 粘虫肠道细菌群落多样性的PCR-DGGE指纹图谱分析被引量：1
- 2012年
- 研究东方粘虫[Mythimna separata(Walker)]肠道细菌的多样性。采用常规分离培养与分子鉴定相结合的方法,并以16SrDNA作为分子标记的变性梯度凝胶电泳(DGGE)对肠道细菌进一步分离,DGGE分离样品是研磨提取粘虫中肠组织DNA、提取培养混合菌DNA及直接以培养混合菌为模板进行PCR扩增的产物。结果表明,共得到DGGE条带19条,其中肠组织研磨提取DNA的DGGE条带最多,为17条;直接以培养混合菌液为模板进行PCR扩增次之,为13条;培养混合菌液提取DNA的条带最少,为12条。传统方法和分子生物学方法相结合研究肠道微生物多样性时能获得更全面的微生物信息,可采用培养混合菌提取DNA再结合其他方法进行后续研究。
- 何彩南小宁张正青李孟楼
- 关键词：粘虫DGGE
- 花绒寄甲巨型昆虫围心细胞的扫描电镜观察
- 2015年
- 【目的】研究花绒寄甲围心细胞形态、数量和分布特点,为了解其结构和功能提供基础。【方法】以经多代繁育的花绒寄甲幼虫、蛹和成虫为材料,用扫描电镜对其心脏和巨型围心细胞形态进行解剖观察。【结果】花绒寄甲的背血管属于直管型,心脏起始于第2腹节,心脏表面覆盖着纵向的心包膜肌肉,心脏由6个心室组成,每个心室两侧分别整齐排列着5~7对巨型围心细胞,直径达(114.2±3.9)μm。花绒寄甲幼虫、蛹和成虫期围心细胞的数量和形态无显著差异,围心细胞与心室接触表面的空隙处存在大量血细胞。【结论】花绒寄甲的围心细胞在胚胎期可能已完成了所有的分化和发育,具备了完整的功能。
- 王吉申崔俊刘忆臕丁申欧万发李孟楼
- 关键词：花绒寄甲心脏超微结构
- 花绒寄甲卵和成虫释放技术被引量：10
- 2014年
- 花绒寄甲Dastarcus helophoroides是蛀干害虫天牛的重要天敌,释放花绒寄甲卵和成虫能有效控制林木被害率和天牛的虫口数量。释放花绒寄甲卵,北方选择在3月下旬至6月中旬,南方的释放期可延长至8月;将卵卡固定在天牛虫粪孔下方的背阴处（虫孔高度〈3m）或距离地面2.5~3.0m的树干背阴处（虫孔高度〉3m）。花绒寄甲成虫释放在北方选择5-7月初期,南方选择3月下旬或9月中旬;直接将释放盒钉在距离地面约2.5m树干背阴处。若立木被害率较小,则一次性每公顷投放成虫释放盒或卵卡200~250个;若被害林株天牛密度较大,则应连续释放2年且每年释放1次,每被害木释放花绒寄甲卵40~80粒（卵卡1~2个）和成虫5~10头。
- 张正青王小纪李荣周王化鹏郝春凤李孟楼
- 花绒寄甲荧光定量PCR分析中内参基因的选择被引量：8
- 2015年
- 合适的内参基因是利用实时荧光定量PCR准确分析基因相对表达量的先决条件。以存活时间为6个月、12个月、18个月、24个月、30个月和36个月的花绒寄甲成虫为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术,检测了核糖体蛋白11(RPS),丁二酸脱氢酶复合物(SDHA)、组蛋白(Histone)、泛素结合蛋白(UBC)、cGMP依赖性蛋白激酶Ⅰ(PGK)、延伸因子(EF-1α)、β-肌动蛋白(β-Actin)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、核糖体蛋白RPL13(L13)、α-微管蛋白(α-Tubulin)共10个看家基因mRNA的表达情况。经过geNorm、NormFinder和BestKeeper 3个统计学程序,综合分析确定RPS基因或α-Tubulin基因在不同存活时间的花绒寄甲中为较佳用于校正目标基因的内参选择,而RPS、GAPDH和α-Tubulin的组合为最佳校正目标基因内参基因组合。
- 宋旺王小纪郭瑞坚张伟张正青李孟楼
- 关键词：实时定量PCR内参基因花绒寄甲
- 花绒寄甲雌性生殖系统的解剖结构被引量：1
- 2016年
- [目的] 揭示花绒寄甲（Dastarcus helophoroides（Fairmaire））雌性生殖系统解剖结构在生殖过程中的变化规律及其与产卵量的关系,为从分子水平研究其生殖衰老过程提供形态学依据。[方法] 利用光学显微镜和扫描电镜,解剖观察了独立饲养1～12年龄组的花绒寄甲雌成虫生殖系统,同时比较了各年龄组的产卵量。[结果] 花绒寄甲雌性生殖系统由卵巢、侧输卵管、中输卵管、受精囊、受精囊腺、囊状膨大的生殖附腺和外生殖器构成;每个卵巢萼部有萼头11个,每萼头连接6或8根卵巢管,整个卵巢平均有卵巢管约70根;卵巢管的结构从端部至基部可分为端丝、原卵区、生殖区和卵巢管柄;随雌成虫存活年份的增加,卵巢管原卵区长度和直径有缩短现象,部分卵巢管出现蚀空性病变（无内含物,只有管壁）,日产卵量自羽化后第4年明显下降。[结论] 花绒寄甲雌性生殖系统具有囊状膨大的生殖附腺,随成活年份的增加产卵量的衰减与卵巢管的衰老有关,人工大量繁育时自第4年开始应及时淘汰和更新种群。
- 苏建明郝春凤李孟楼
- 关键词：花绒寄甲雌成虫生殖系统
- 花绒寄甲methuselah-like基因的鉴定和表达被引量：2
- 2016年
- 采用c DNA末端快速扩增技术获取了花绒寄甲(Dastarcus helophoroides)methuselah-like基因的c DNA全长序列,命名为mth-like2,采用多种生物信息学软件分析了Mth-like2受体蛋白的结构特征,并采用Real-time q PCR技术分析了该基因的表达情况。结果表明:mth-like2基因c DNA全长为2 117 bp,开放阅读框的大小为1 458bp,编码485个氨基酸,相对分子质量为56 750,理论等电点为8.83,存在7个跨膜结构域。系统发育分析结果显示,该基因对应的受体蛋白序列与赤拟谷盗(Tribolium castaneum)Mth2-like亲缘关系最近。mth-like2基因在不同组织和不同虫态均有表达,其中雄性生殖系统的表达量显著高于其他组织,6龄幼虫显著高于其他虫态;mth-like2基因的表达量随存活时间的延长显著下调;在氧化、高温和饥饿条件下,mth-like2基因的表达量也均有显著变化,且在氧化和高温下雌雄有显著差异。
- 王化鹏郝春凤张正青张伟常勇李孟楼
- 关键词：花绒寄甲
- 花绒寄甲HSP70基因的特征与表达被引量：5
- 2016年
- 为阐明热休克蛋白70（HSP70）在花绒寄甲（Dastarcus helophoroides）发育及雌雄成虫抵抗环境胁迫中的作用,利用实时荧光定量PCR技术分析了其在发育阶段和环境胁迫时的表达情况。从花绒寄甲转录组中获得3条HSP70基因,分别命名为D.h HSP69.09、D.h HSP70.11和D.h HSP71.88。发育阶段定量结果显示,3条HSP70在所有发育阶段均有表达,D.h HSP69.09在1龄幼虫期表达量最高;D.h HSP70.11和D.h HSP71.88在雄虫中表达量最高。在检测的成虫组织中,D.h HSP69.09和D.h HSP70.11在卵巢表达量最高;D.h HSP71.88在脂肪体中表达量最高。HSP70基因随温度升高（23℃升至44℃）、41℃下处理时间（0~270 min）延长、氧化剂浓度（0~70 mmol·L-1）的升高表达量先增加后减少,雌雄表达量差异较大。饥饿试验显示,雌雄虫表达模式不同;随饥饿时间延长,雄虫HSP70基因表达量有所降低,雌虫一定时间内有所上升。因此,花绒寄甲HSP70可能与不同发育期的转换、幼虫的蜕皮行为相关;HSP70对温度、氧化和饥饿胁迫的应激敏感程度和表达水平不同,能够有效应对高温、氧化、饥饿等环境胁迫。
- 郝春凤王化鹏张正青常勇李孟楼
- 关键词：花绒寄甲逆境胁迫HSP70实时荧光定量PCR
