南京军区医学科技创新课题(10MA129)
- 作品数：4 被引量：30H指数：2
- 相关作者：王长军操敏张凤玉龚秀芳潘秀珍更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京师范大学南京军区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：南京军区医学科技创新课题国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 恙虫病东方体合肥分离株截短56kDa蛋白抗原表达及活性分析
- 2014年
- 本文获得恙虫病东方体合肥分离株截短56kDa外膜蛋白基因工程纯化抗原，并鉴定其免疫学活性，为进一步研制广谱诊断试剂、疫苗以及分析其在东方体致病的分子机制奠定基础。我们通过DNA Star和Mega等软件对含有440个氨基酸的合肥株56kDa蛋白序列进行抗原性分析；将合肥株56kDa截短蛋白基因克隆至原核表达载体pET28a获重组质粒，转入大肠杆菌E．coli BL21感受态中，经IPTG诱导，SDS—PAGE电泳分析检测蛋白表达；采用亲和层析法纯化目的蛋白，Western-blot及ELISA法鉴定其免疫学活性。序列分析发现合肥分离株56kDa蛋白可分为4个保守区和3个可变区，抗原性分析结果显示，其保守区的亲水性和抗原性均有很高峰值。SDS—PAGE电泳显示约56kDa的目的重组蛋白表达条带，Western—blot分析显示该重组蛋白可与恙虫病病人血清反应，阴性血清则未出现相应印迹，ELISA分析结果显示该蛋白最低浓度为80ng／μL时仍可检出阳性血清；5μg／mL蛋白可检测阳性血清滴度高达1：12800，证实其具有较强反应原性。本实验获得恙虫病东方体合肥株56kDa截短外膜蛋白基因工程抗原具有良好的抗原活性，有望进一步应用于恙虫病的诊断、疫苗研制及致病机制分析。
- 耿美玲郑峰吕恒朱进胡丹郝丽娜张凤玉龚秀芳李丙军李先富潘秀珍王长军操敏
- 关键词：恙虫病东方体抗原性基因表达
- 建立染料法荧光定量PCR检测恙虫病东方体被引量：2
- 2014年
- 目的建立染料法荧光定量PCR检测恙虫病东方体。方法根据恙虫病东方体56kD外膜蛋白基因序列设计特异性引物，建立染料法（SYBRgreenI）实时荧光定量PCR，评估其灵敏性及特异性；并对恙虫病东方体鸡胚培养物、东方体感染小白鼠脏器标本以及恙虫病病人血样等多种样本进行检测。结果建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r2=0．99），灵敏性评估显示20¨l体系单PCR反应管靶基因大于28个拷贝即可被有效检测，最低检出浓度为2拷贝／¨l，比普通PCR检测方法提高1～2个数量级，并且具有较好的重复性；建立的SYBRI染料法具有良好的特异性，与立氏立克次体R株等其他5种立克次体，以及被检测的其他几种病原菌DNA模板均不发生特异性扩增；用建立的染料法对东方体鸡胚培养物、东方体感染动物脏器，以及采集的现场恙虫病病人血样共59份标本进行检测，其中57份检出阳性。用该定量PCR检测恙虫病东方体实验感染小鼠的血、脾脏、肾脏、肝脏标本，结果脾脏中东方体检出量最多，肝脏和肾脏次之，血中的恙虫病东方体量较低。结论本研究建立荧光定量PCR方法均具有很高的特异性和敏感性，适合各种样本中东方体的快速检测，可用于实验室的快速诊断。
- 耿美玲操敏张锦海胡丹郝丽娜张凤玉龚秀芳李丙军潘秀珍王长军
- 关键词：恙虫病荧光定量PCR法
- 安徽三界地区啮齿动物感染恙虫病东方体调查被引量：13
- 2011年
- 目的调查安徽三界地区啮齿动物自然感染恙虫病东方体分离株,并确定其基因型别。方法流行季节在野外用鼠笼捕鼠并鉴定鼠种、携螨率;巢式PCR对鼠脏器进行恙虫病东方体56 kD基因片段检测;将鼠脏器接种小白鼠进行病原体分离,PCR扩增分离株Ot 56 kD基因片段,并将目的片段进行测序,基因序列同源性及进化分析。结果捕获啮齿动物数及其携螨率,黑线姬鼠60%(15/25);褐家鼠45.5%(5/11);东方田鼠和鼩鼱各2只,均阴性。40只野鼠脏器有3只恙虫病东方体PCR扩增阳性,阳性率为7.5%;从黑线姬鼠标本中分离到1株恙虫病东方体Sanjie,56 kD基因片段测定该株与台湾TT0711a和NT0511b分离株同源性最高(98%),系统发生树分析也显示与Kawasaki型共处于同一分支。结论安徽三界地区存在鼠类恙虫病东方体自然感染,黑线姬鼠为其主要宿主,当地恙虫病东方体属Kawasaki基因型。
- 操敏王忠灿陆年红黄华东郭恒彬王长军张兴唐家琪
- 关键词：恙虫病东方体啮齿动物病原分离分子流行病学
- 我国秋冬型恙虫病流行病学研究概况被引量：15
- 2014年
- 1986年前,我国恙虫病仅知流行于浙江以南地区,主要属夏季型,以黄毛鼠、黄胸鼠、北社鼠为主要宿主动物,以地里纤恙螨为主要媒介。1986年在江苏、山东发生恙虫病流行,属秋冬型。此后,在天津、山西、河北、河南、安徽、北京发行流行,吉林、辽宁、黑龙江有病例报告。以黑线姬鼠、北社鼠、褐家鼠、大仓鼠、朝鲜姬鼠为主要宿主动物;以小盾纤恙螨为主要媒介,可疑的媒介有姬鼠纤恙螨、东方纤恙螨等。
- 姜志宽吴光华王长军韩招久丁凌云王莉马冰滢
- 关键词：恙虫病流行病学
